阴道病学妇女宫颈HPV感染及基因型分布特征

林雄辉，周长邵，陈丽丽

(解放军第九五医院 检验科，福建 莆田 351100)

阴道病学妇女宫颈HPV感染及基因型分布特征

林雄辉Δ，周长邵，陈丽丽

(解放军第九五医院 检验科，福建 莆田 351100)

目的 探讨阴道病学妇女宫颈人乳头瘤病毒(human papillomavirus，HPV)感染及基因型分布特征。方法 采用PCR-反向点杂交法对解放军第九五医院816例宫颈病变妇女宫颈脱落细胞进行HPV检测，并进行23种HPV基因分型鉴别。结果 本组816例接受HPV分型检测中，HPV阳性532例(65.20%)，其中371例(69.74%)高危型HPV(HR-HPV)感染，161例(30.26%)低危型HPV(LR-HPV)感染。45岁以下人群HPV感染率较高；宫颈癌患者HPV感染率为97.10%高于CINⅡ-Ⅲ患者(80.54%)、CINⅠ患者(41.55%)、宫颈炎患者(17.20%)，差异具有统计学意义(P<0.05)；HPV感染亚型排列前5位分别为HPV16、58、18、11、56型。单一感染几率为79.70%，重复感染率为20.30%；单一感染中以HR-HPV感染率为主，多重感染以双重感染为主。结论 44岁以下女性HPV感染的高危人群，HPV感染以16、58、18、11、56为主，宫颈癌及癌前病变患者HPV感染率较高，重视HPV感染筛查对防治宫颈癌有积极意义。

人乳头瘤病毒；宫颈病变；基因分型

人乳头状瘤病毒(human papillomavirus，HPV)是一种DNA病毒，目前已鉴定出200多种HPV感染亚型，其中50多种与人类生殖道感染有关[1]。不同类型的HPV致病类型也存在差异，其中LR-HPV感染(HPV6、11、40等)可致宫颈良性病变，HR-HPV感染(HPV16、18、31等)会增加宫颈癌和癌前病变发生风险[2]。研究报道，HR-HPV持续感染是宫颈癌及癌前病变发生的重要影响因素转移[3]。因此，重视对有性生活女性的HPV感染筛查尤为重要，便于对高危人群进行早期预防、早期治疗。本研究通过收集宫颈脱落细胞并进行23种HPV感染亚型检测，了解宫颈病变妇女HPV感染情况及亚型分布，对宫颈疾病和宫颈癌防治有重要指导意义，现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 病例选取2014年12月～2015年8月解放军第九五医院门诊及住院的816例宫颈疾病妇女作为研究对象，均有性生活，且自愿接受HPV检测。年龄19～73岁，平均年龄(43.29±8.58)岁。宫颈病变类型：343例宫颈炎，219例CINⅠ期，185例CINⅡ-Ⅲ期，69例宫颈癌。由妇科医师讲解本次调查研究的目的、筛查流程等，告知研究期间可随时退出该研究，本研究由医院伦理委员会批准，研究对象均自愿本研究病签署知情同意书。

1.2 方法

1.2.1 宫颈细胞采集：妇科医生于研究对象非月经期采集宫颈脱落细胞，采集前禁性生活、盆浴、阴道检查。充分暴露宫颈，取无菌棉球拭净阴道及宫颈口分泌物，将专用取样刷置入宫颈内口，毛刷基底面与宫颈外口齐平，顺指针旋转3～5圈收集宫颈口及颈管脱落上皮细胞，将刷头放入洗脱管中，并旋转管盖，做好标记。

1.2.2 HPV分型检测：主要仪器包括5415R小型高速离心机(德国Eppendorf)，9600型PCR仪(HEMA),FYY-3型分子杂交仪。取保存液1 mL放入试管中，13 000 r/min离心10 min，舍弃上清液保留沉淀物，如细胞沉淀为赘生物或疣体组织物，可用加样枪头将其刺破、捣碎。沉淀物中加入DNA提取液5 μL，充分混匀，100 ℃水浴环境下裂解10 min，13 000 r/min离心10 min，取上清液作PCR反应。利用HPV通用引物(由亚能生物技术公司合成)扩增，采用PCR-反向点杂交法检测HPV亚型。本次检测HPV基因亚型包括：17种高危型HPV(HR-HPV)感染：16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、73、83；6种低危型HPV(LR-HPV)感染：6、11、42、43、44、81。

1.3 统计学方法 采用统计学软件SPSS 19.0中处理数据，计数资料采用(%)表示，比较采用χ2检验，以P<0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 HPV感染情况 本组816例接受HPV分型检测中，HPV阳性532例，阳性率65.20%；其中371例高危型HPV(HR-HPV)感染，感染率为69.74%，161例低危型HPV(LR-HPV)感染，感染率为30.26%，HR-HPV感染率高于LR-HPV感染率。44岁以下人群HPV感染率较高。

2.2 不同年龄HPV感染分布 35≤年龄<40出现HPV感染率最高，占86.60%，其次为40≤年龄<45，占71.96%，HPV感染年龄分布差异有显著性(P<0.05)。见表1。

表1 不同年龄HPV感染分布Tab.1 Distribution of HPV infection in different ages

2.3 不同宫颈疾病HPV感染情况 宫颈癌患者HPV感染率明显最高，占97.10%，其次为CINⅡ-Ⅲ患者，占80.54%，宫颈炎最低，为17.20%，差异显著，具有统计学意义(P<0.05)。见表2。

表2 不同宫颈疾病HPV感染情况Tab.2 HPV infection in different cervical diseases

2.4 532例HPV感染亚型分布 本组研究中，HPV感染亚型排列前五位分别为HPV16(12.22%)、HPV58(11.65%)、HPV18(11.09%)、HPV11(10.34%)、HPV56(7.89%)。见表3。

表3 532例HPV感染亚型分布Tab.3 Distribution of 532 HPV subtypes

2.5 HPV感染亚型组合分布 单一感染几率为79.70%，重复感染率20.30%；单一感染中，HR-HPV感染率为61.84%，LR-HPV感染率为17.86%；多重感染中，双重感染率为15.23%，三重感染3.95%、四重感染0.75%及其他0.38%。见表4。

表4 HPV感染亚型组合分布Tab.4 HPV infection subtype combination distribution

3 讨论

宫颈癌是常见的女性恶性肿瘤之一，发病率仅次于乳腺癌。近年来，随着宫颈癌筛查的工作普遍开展，宫颈癌早期诊断准确人数明显增加，有利于临床早期干预治疗，降低疾病致死率。然而，对各国宫颈癌发病资料进行分析，发现发展中国家宫颈癌发病率仍高于发达国家。目前，宫颈癌的发生机制尚不明确。研究认为，持续HR-HPV是宫颈癌和癌前病变的重要原因之一[3]。贾政军等[4]研究发现，几乎所有的宫颈癌患者均伴随HPV感染。

HPV感染属于一种传播性疾病，70%～80%左右有性生活的妇女会伴随HPV感染[5]。本组研究中，44岁以下人群出现HPV感染的几率相对较高，与张艳琼等[6]报道研究结果相符，与该年龄段女性性生活活跃有关。随着年龄的增长，女性HPV感染率有所下降，但该年龄段卵巢功能下降，机体免疫力下降，对HPV的清除能力会随之减弱，可能增加宫颈癌及癌前病变的发生风险。因此，临床积极开展宫颈癌相关知识宣传，定期进行HPV感染筛查，尤其是44岁以下人群，预防宫颈病变。

目前，已鉴定出的200多种HPV亚型中，约20种由生殖道分泌的HPV与肿瘤发生有关。根据其致病能力可分为HR-HPV、LR-HPV，其中HR-HPV持续感染会增加宫颈癌及癌前病变发生风险，LR-HPV感染可引起生殖道良性病变。本组研究中，宫颈癌患者HPV感染率明显最高，占97.10%，其次为CINⅡ-Ⅲ患者，占80.54%。因此，临床重视对HPV的筛查对预防宫颈癌及癌前病变中具有积极意义。本组研究中，HPV感染占前5位的分别为HPV16、58、18、11、56型，与Clifford等[7]报道HPV16、HPV18感染较为常见，其次为45、31、33的研究结果部分一致，可能与地区、研究对象的年龄有关。赵苏萍等[8]分析黔南州水族宫颈疾病妇女人HPV亚型分布，发现最为常见的类型为HPV16，其次为HPV33、58、52、38型。季月霞等[9]报道中，HR-HPV感染以HPV18作为常见，其次为HPV16；LR-HPV感染以HPV6、11型较为常见。总结既往文献，发现HPV16、HPV18是HR-HPV感染较为常见的类型[10]。目前，临床针对HPV16型和18型的二价疫苗和针对HPV16、18、11、6型的四价疫苗已经上市，在预防宫颈癌病变有积极作用[11]，但还用加大对HPV33、58、52型等疫苗的研究。

本组研究中，单一感染几率为79.70%，重复感染率为20.30%，单一感染常见；单一感染中以HR-HPV较为常见，多重感染中以双重感染感染较为常见，与智艳芳等[12]研究结果一致。目前关于多重HPV感染是否会增加宫颈病变的风险尚存在争议，Stenmark等[3]认为，对多重HPV感染不会增加宫颈癌发生风险；但严粉琴等[13]研究报道，多种HPV感染会增加病毒致病程度。因此，临床需扩大研究对象，了解多重HPV感染对宫颈癌及癌前病变发生风险的影响，为临床防治宫颈癌提供客观资料。

综上所述，宫颈癌属于一种可预防性疾病，HR-HPV持续感染是宫颈癌发生的高危影响因素。HPV感染亚型分布具有地域性的特点，各地区应对女性HPV感染状况和亚型分布进行分析，为临床防治宫颈癌及癌前病变提供流行病学资料，降低宫颈癌发生率。

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(编校：席大力 王俨俨)

Cervical HPV infection and genotype distribution characteristics in women with vaginal disease

LIN Xiong-huiΔ, ZHOU Chang-shao, CHEN Li-li

(Department of Inspection, PLA No.95 Hospital, Putian 351100, China)

ObjectiveTo study cervical human papillomavirus (HPV) infection and genotype distribution characteristics in patients with vaginal disease.MethodsThe PCR dot blot was used to carry out HPV detection of cervical exfoliated cells in 816 women with cervical lesions in the hospital, and 23 kinds of HPV genotypes were identified.ResultsAmong the 816 cases receiving HPV type detection, HPV of 532 cases (65.20%) was positive, including 371 cases (69.74%) with low-risk HPV (HR-HPV) infection, 161 cases (30.26%) with low-risk HPV infection (LR-HPV) (P< 0.05). The HPV infection rate below 45 years old was relatively higher. The HPV infection rate in patients with cervical cancer (97.10%) was higher than that in patients with cervical intraepithelial neoplasia (CIN) II - III (80.54%), patients with CIN Ⅰ(41.55%) and patients with cervicitis (17.20%) (P< 0.05). The top five types of HPV infection were HPV16, 58, 18, 11 and 56 type, respectively. The single infection rate (79.70%) was higher than multiple infection rate (20.30%) (P< 0.05); HR-HPV infection was the main infection in single infection, and double infection was the main infection in multiple infection.ConclusionBelow 45 years old women are the high-risk groups of HPV infection. 16, 58, 18, 11 and 56 are the main types of HPV infection. The infection rates of patients with cervical cancer and precancerous lesions are relatively higher. Paying attention to the screening of HPV infection has positive significance in the prevention and treatment of cervical cancer.

human papillomavirus; cervical lesions; genotyping

10.3969/j.issn.1005-1678.2016.11.055

林雄辉，通信作者，男，本科，检验师，研究方向：医学检验，E-mail：605990696@qq.com。

R737.33

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