铁屎米酮对心肌缺血再灌注对大鼠心肌酶、心肌细胞凋亡和血液黏度的影响

王景祥，郑　柔，吕若谷，刘洪权

(1.吉林省柳河医院，吉林 柳河135300；2.吉林大学中日联谊医院 儿科，吉林 长春130033；3.吉林大学预防医学院2015级研究生，吉林 长春130021；吉林大学第一医院 耳鼻喉科，吉林 长春130021)



铁屎米酮对心肌缺血再灌注对大鼠心肌酶、心肌细胞凋亡和血液黏度的影响

王景祥1，郑柔2，吕若谷3，刘洪权4*

(1.吉林省柳河医院，吉林 柳河135300；2.吉林大学中日联谊医院 儿科，吉林 长春130033；3.吉林大学预防医学院2015级研究生，吉林 长春130021；吉林大学第一医院 耳鼻喉科，吉林 长春130021)

铁屎米酮(canthin-6 -one,Can) 是芸香科花椒属植物刺异叶花椒中生物碱[1]，可减慢心率、减轻心肌细胞超微结构损伤。对心肌的收缩性能有短时的抑制作用，有降低左室舒张末期舒张压、收缩压及平均动脉压以及降低心肌耗氧量的作用[2，3]。为探讨其药理作用，本文采用心肌缺血再灌注损伤模型，从心肌酶、血液黏度及心肌细胞凋亡方面，观察铁屎米酮对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用。

1材料与方法

1.1动物健康雄性大鼠，体重200-230 g，由吉林大学实验动物中心提供。

1.2药品和试剂铁屎米酮由吉林大学白求恩制药厂提供，纯度质量在95.6%以上；舒血宁注射液神威药业集团有限公司生产，LDH、AST测定试剂盒中生北控生物科技股份有限公司生产，SOD、MDA、GSH-Px测定试剂盒由南京建成生物工程研究所生产，AnnexinV-FITC细胞凋亡试剂盒天津三箭生物技术有限公司生产。

1.3主要仪器EOS880型半自动血液生化分析仪意大利生产；BD Accuri C6流式细胞仪美国生产；UV755B分光光度计上海精密科学仪器有限公司生产，血液粘度计由北京普利生集团生产。

1.4方法将雄性大鼠随机分假手术组、模型组、舒血宁(10.0 mg·kg-1)组及铁屎米酮(20.0、40.0 mg·kg-1)组，每组10只。各组大鼠连续给药一周后。用乙醚麻醉后，先用手术线在开胸部位做一荷包，自左侧第4肋间开胸，暴露心脏，结扎左冠状动脉前降支( LAD)，将心脏送回胸腔，挤出胸腔内血液和气体，收拢荷包关闭胸腔。其余组缺血30 min后再次开胸，剪断手术线使血流再通，120 min后，大鼠腹主动脉取血，3 000 r/min，离心10 min，吸取上清液，按试剂盒方法测定血清 LDH、AST含量。测血清MDA、SOD和GSH-Px活性。测定全血低切(10/s)、中切(60/s) 及高切黏度(120/s)。于实验结束后立即取心尖及左室心肌 5 mm3，4℃冰0.9%氯化钠注射液洗去血污。将心肌组织制成细胞悬液，加冷的磷酸盐缓冲液洗两次。1 ml Binding Buffer重悬细胞，300 g,4℃离心 10 min，弃上清，重复2次。将细胞重悬浮于1 ml Binding Buffer，细胞浓度为1×109/L，每管取100 μl加入10 μl Annexin-V-FITC轻轻混匀,室温避光反应10 min，加5 μl PI，轻轻混匀,室温避光反应5 min。加入PBS至500 μl，在1 h内上机检测，用BD Accuri C6流式细胞仪检测细胞凋亡，

2结果

2.1铁屎米酮对心肌缺血再灌注大鼠血清AST，LDH活性及心肌细胞凋亡指数的影响

模型组大鼠血清AST、LDH及心肌细胞凋亡指数均明显高于假手术组(P<0.001)，表明心肌缺血再灌注损伤模型成立。铁屎米酮20.0 mg/kg、40.0 mg/kg剂量组及舒血宁组可明显降低血清AST和LDH的含量(P<0.05、P<0.01)，铁屎米酮20.0 mg/kg、40.0 mg/kg剂量组及舒血宁组可明显降低心肌细胞凋亡指数(P<0.05)。见表1。

2.2铁屎米酮对心肌缺血再灌注大鼠血清MDA、SOD、GSH-Px的影响

模型组血清MDA水平与假手术组相比较均明显升高(P<0.001)，SOD、GSH-Px活性明显降低(P<0.01)，说明心肌缺血再灌注损伤模型成立。铁屎米酮20.0 mg/kg、40.0 mg/kg剂量组及舒血宁组可明显降低血清MDA的含量(P<0.01)，明显升高血清SOD、GSH-Px含量(P<0.05)。见表2。

表1　铁屎米酮对心肌缺血再灌注大鼠血清AST，LDH活性及心肌细胞凋亡指数的影响±s，n=10)

注：与假手术组比较，▲P<0.001，与模型组比较，*P<0.05，**P<0.01

表2　铁屎米酮对心肌缺血再灌注大鼠血清MDA、SOD、GSH-Px的影响

注：与假手术组比较,▲P<0.01 与模型组比较，*P<0.05,**P<0.01

2.3铁屎米酮对心肌缺血再灌注大鼠血液粘度的影响

再灌注模型组的全血低、中、高切黏度均明显高于假手术组。与模型组比较，铁屎米酮20.0 mg/kg、40.0 mg/kg剂量组及舒血宁组可明显降低全血低、中、高切黏度(P<0.05，P<0.01)。见表3。

表3　铁屎米酮对心肌缺血再灌注大鼠血液粘度的影响±s，n=10)

注：与假手术组比较，▲P<0.05 与模型组比较，*P<0.05,**P<0.01

3讨论

心肌缺血再灌注损伤细胞膜和线粒体损伤，在自由基作用下钙超载，细胞膜通透性增加,组织坏死,心肌细胞各种酶外漏而释放入血，引起血中AST、LDH、MDA、SOD、GSH-Px含量变化。因此，血清AST、LDH、MDA、SOD、GSH-Px的活性变化可作为观察心肌缺血再灌注损伤程度及药物抗心肌缺血再灌注损伤疗效和预后的一些重要指标[4]。细胞凋亡是主动性细胞死亡形式，有许多因素参与细胞凋亡的调控，心肌缺血再灌注过程均可诱导细胞凋亡。红细胞聚集性主要是由红细胞数目及其聚集性和变形性决定的。聚集性越大，全血低切黏度越大[5]。

本实验用半自动血液生化分析仪和755分光光度计分别测定血清LDH、AST、MDA、SOD、GSH-Px的活性。用血液粘度计测定血液低、中、高粘度，用BD Accuri C6流式细胞仪检测心肌细胞凋亡指数，结果发现，再灌注模型组心肌酶、血液粘度、细胞凋亡指数发生明显变化，提示模型建立成功。 铁屎米酮明显降低AST、LDH和MDA的含量，升高血清SOD、GSH-Px含量，明显降低心肌细胞凋亡指数，明显降低血液低、中、高粘度，改善其血液流变学。提示铁屎米酮能减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤程度，其机制可能通过改善血液的粘稠度达到保护目的，表明铁屎米酮对心肌缺血再灌注损伤具有明显保护作用。

参考文献：

[1]朱克刚,丁牧良,屠治本,等.刺异叶花椒的化学成分研究[J].武汉植物学研究,1987,5(1):25.

[2]石明健,刘惟莞，胡岚，等.铁屎米酮对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用[J].药学学报，1999，34(3)：161.

[3]石明健，刘惟莞，宛小平.铁屎米酮对家兔血流动力学的影响[J].湖北医科大学学报，1995,16(1):10.

[4]翟玉荣，黄燮南，于小凤，等.注射用苦碟子对心肌缺血再灌注损伤大鼠心肌酶和血黏度的影响[J].中药药理与临床，2008，24(2)：53.

[5]岳海涛，李金成，吕铭洋，等.红花注射液对大鼠血栓形成的影响及其作用机制[J].中草药，2011,42(8)：1585.

*通讯作者

文章编号：1007-4287(2016)06-0896-02

(收稿日期：2015-11-31)