网织红细胞计数窥盘的设计与应用

严家来+方安宁

摘 要： 网织红细胞是评价骨髓造血能力的重要指标，国际血液学标准化委员会推荐米勒窥盘用于网织红细胞的手工计数，但其也存在一定缺点，作者对近年的相关文献进行了整理分析，并提出观点，为如何更好地设计、制作和选用的网织红细胞计数窥盘提供参考。

关键词： 网织红细胞 窥盘 设计 应用

红细胞（RBC）的发育依次经历原始红细胞、早幼红细胞、中幼红细胞、晚幼红细胞和成熟红细胞（图1）。网织红细胞（Ret）是介于晚幼红细胞和成熟红细胞之间的尚未完全成熟的过渡阶段细胞，其胞质中尚残留部分核糖核酸（RNA）等嗜碱性物质，可被新亚甲蓝等碱性染料活体染色后呈织网状或颗粒状结构，故称之为网织红细胞。国际血液学标准化委员会（ICSH）将网织红细胞分成Ⅰ～Ⅳ型（图2）。网织红细胞计数可反映骨髓的造血功能，对贫血的诊断、鉴别诊断及预后有重要的参考价值。

目前虽然有流式细胞仪（FCM）和带网织红细胞参数的五分类血细胞分析仪（BA）可以检测网织红细胞，而且衍生出众多参数，但至今尚未普及。基层医疗单位还是应用窥盘法计数网织红细胞。网织红细胞的认识从形态学开始，以手工方法计数，可直观地看到网织红细胞的形态特征。网织红细胞计数的参考方法（WS/T346-2011）是直接在油镜下分别计数网织红细胞和成熟红细胞（图3），网织红细胞百分比（Ret%）按以下公式计算：

要保证网织红细胞的准确性即低CV%值，往往需要增大计数的红细胞数（表1）。由此可见，直接计数网织红细胞比例时，红细胞计数的工作量非常大。

网织红细胞计数广泛应用米勒窥盘，计数1000个红细胞中网织红细胞的百分比。米勒窥盘是一种光学圆形片状窥盘，直径19mm，安装在显微镜目镜中，窥盘中有面积比例为1∶9的2个正方形计数方格[1]（图4），只需计数小方格（A）内的红细胞即可准确估量出整个大方格（B）内的红细胞数。

米勒窥盘在某些型号的显微镜下不能看到窥盘的整个大方格，以及1：9比例固定的缺点等。经查阅文献，介绍几种计数网织红细胞的窥盘（表1）供大家参考。

各种窥盘结构的核心是在血片上细胞分布均匀的前提下，要能够以“小”窥“大”，并根据细胞数量确定一个部分与整体的合适比例，以降低工作强度，提高工作效率和准确性。要做到窥盘的科学合理，必须遵循以下几点：①窥盘是置于显微镜目镜头内的玻璃片或透明胶片，画线结构应在直径16mm圆圈的范围以内，确保视野内能够看到完整的结构；②对于部分非平场显微镜，边缘细胞不清晰，易漏数误数，小格尽可能设计位置居中；③大小方格比例10：1在计算和准确度上优由于9：1的设计；④对于压线细胞的处理，方格型优于圆圈型，易于做到压线细胞计数一半，舍弃一半。

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