建立头孢泊肟酯干混悬剂微生物限度检查方法

刘晓菲

摘 要：单一采用培养基稀释法或中和法不适用于头孢泊肟酯干混悬剂微生物限度日常检验检查，通过试验，研究结合运用两个方法进行微生物限度检查。对建立的结合方法进行效果确认，能够达到中国药典要求，适用于头孢泊肟酯干混悬剂微生物限度检查。

关键词：头孢泊肟酯干混悬剂；微生物限度检查；头孢菌素酶

中图分类号： TQ46 文献标识码： A 文章编号： 1673-1069（2016）16-177-2

0 引言

头孢泊肟酯干混悬剂主要成分为头孢泊肟酯，是口服广谱第三代头孢菌素[1]，具有很强的杀菌作用。中国GMP要求制药企业对非无菌药品进行微生物限度检查[2]。头孢类抗生素制剂的微生物限度检查方法一般采用薄膜过滤法，但是头孢泊肟酯干混悬剂抑菌性强[3]，过滤时间长，不适用于薄膜过滤法，因此，建立一种高效简便的微生物检查方法势在必行。

1 材料与方法

1.1 菌种

大肠埃希菌（ATCC8739）、枯草芽孢杆菌（ATCC6633）、金黄色葡萄球菌（ATCC6538）、白色念珠菌（ATCC10231）、黑曲霉（ATCC16404）、铜绿假单胞菌（ATCC9027），菌种均购自美国标准菌种保藏中心。

1.2 培养基

胰酪大豆胨琼脂培养基、沙氏葡萄糖琼脂培养基、胰酪大豆胨液体培养基、麦康凯液体培养基、麦康凯琼脂培养基。

1.3 中和剂

头孢菌素酶（批号：20160104 厂家：杭州北望生物技术有限公司）。

1.4 方法

1.4.1 需氧菌总数检查试验

取10g供试液加入100mL0.9%无菌氯化钠溶液中，制备成1：10的供试液。取在空的无菌培养基平皿中加入0.1 mL供试液，分别加入1mL金黄色葡萄球菌菌液、枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞菌菌液（<100CFU/ mL），在每个平皿中加入10万单位头孢菌素酶，然后注入20mL 45℃胰酪大豆胨琼脂培养基，每种试验菌平行做2个平板，轻轻摇匀，待培养凝固后，置于30～35℃培养3天后，进行菌落计数，计算回收率[4]。

同法测定加入30万单位和50万单位头孢菌素酶的回收率。

1.4.2 霉菌及酵母菌总数检查试验

取1：10供试液1ml加入空的无菌培养基平皿中，分别加入1mL白色念珠菌菌液、黑曲霉菌液（<100CFU/ mL），在每个平皿中加入1千单位头孢菌素酶，然后注入20mL 45℃沙氏葡萄糖琼脂培养基，每种试验菌平行做2个平板，轻轻摇匀，待培养凝固后，置于20～25℃培养5天后，进行菌落计数，计算回收率[4]。

同法测定加入1万单位和10万单位头孢菌素酶的回收率。

1.4.3 控制菌检查试验

取1：10供试液10ml分加到5瓶500ml胰酪大豆胨液体培养基中每瓶2ml，加入1mL大肠埃希菌菌液（<100CFU/ mL），再加入10万单位的头孢菌素酶，于30～35℃下培养18小时 ，吸取上述预培养物到麦康凯液体培养基， 42～44℃培养 18小时，取培养液划线接种于麦康凯琼脂平板上 ，30～35℃下培养18小时后，若有菌生长，则对菌落进行分离和鉴定，判断是否为大肠埃希菌[5]。

同法测定加入30万单位和50万单位头孢菌素酶的回收率。

1.4.4 结合法的效果确认试验

选取3批头孢泊肟酯干混悬剂，按照以上3个试验确定的检验方法，用5种细菌测试需氧菌总数回收率，用2种真菌测试霉菌及酵母菌总数回收率，观察控制菌的检查结果。

2 结果

2.1 加入不同量中和剂的需氧菌总数检查试验结果

根据试验结果，得出加入30万单位和50万单位头孢菌素酶后，各试验菌的回收率达到50%以上，符合中国药典要求。考虑到日常检验中的人员操作误差，为保证检验的准确性，加酶量选择50万单位。

根据试验结果，得出加入1万单位、10万单位头孢菌素酶后，各试验菌的回收率达到50%以上，符合中国药典要求。考虑到日常检验中的人员操作误差，为保证检验的准确性，加酶量选择10万单位。

通过试验，得出加入10 万单位头孢菌素酶不能检出控制菌，加入30万单位50万单位头孢菌素酶后，均可检出控制菌，为保证检验的准确性，加酶量选择50万单位。

2.4 结合法的效果确认

3 结论

经过研究，将培养基稀释法和中和法相结合，建立了头孢泊肟酯干混悬剂微生物限度检查方法。

需氧菌总数检查方法：取10g供试液加入100mL0.9%无菌氯化钠溶液中，制备成1：10的供试液。取1：10供试液0.1 mL加入无菌培养基平皿中，加入50万单位头孢菌素酶，然后注入20mL 45℃胰酪大豆胨琼脂培养基，平行制备2个平板，轻轻摇匀，待培养基凝固后，置于30～35℃培养3天后，菌落计数。

霉菌及酵母菌总数检查方法：取1：10供试液1mL加入无菌培养基平皿中，加入10万单位头孢菌素酶，然后注入20mL 45℃沙氏葡萄糖琼脂培养基，平行制备2个平板，轻轻摇匀，待培养基凝固后，置于20～25℃培养5天后，菌落计数。

控制菌检查方法：取1：10供试液10ml分加到5瓶500ml胰酪大豆胨液体培养基中每瓶2ml，加入50万单位的头孢菌素酶，30～35℃下培养18小时 ，吸取上述预培养物到麦康凯液体培养基， 42～44℃培养 18小时。取培养液划线接种于麦康凯琼脂平板上 ，30～35℃下培养18小时后，观察菌落。

参 考 文 献

[1] 孟现民，董平，姜旻，张永信.头孢菌素类抗菌药物的开发历程与研究近况[J].上海医药，2011，32（5）：218-221.

[2] 国家药品监督管理局.药品生产质量管理规范[M].北京.2010：6-7.

[3] 于威，金海波.关于头孢菌素类药物的综述[J].医药与保健，2010（05）：210.

[4] 国家药典委员会.中华人民共和国药典[M].2015年版.四部.中国医药科技出版社，2015.6：140-144.

[5] 国家药典委员会.中华人民共和国药典[M].2015年版.四部.中国医药科技出版社.2015.6：145-147.