Smac和Livin在宫颈鳞状细胞癌组织中的表达及意义

谭美英　张杨

【摘要】 目的：探讨Smac和Livin在宫颈鳞状细胞癌组织中的表达及临床意义。方法：采用免疫组化法检测宫颈鳞状细胞癌、宫颈上皮内瘤变、正常对照者的组织标本中的Smac和Livin的表达，并将宫颈鳞状细胞癌中Smac和Livin表达的相关性进行分析。将收集的石蜡包埋组织标本制成组织芯片，应用免疫组化染色SP法检测Smac和Livin蛋白的表达。结果：宫颈癌组、内瘤变组、正常组Smac的阳性表达率分别为91.67%、62.50%、0，宫颈癌组、内瘤变组、正常组Livin的阳性表达率分别为91.67%、90.63%、22.22%。Smac和Livin测定结果的阳性率最高值均出现在宫颈癌组，明显高于其他两组，差异均有统计学意义（P<0.05）。且宫颈鳞状细胞癌中Smac和Livin的表达呈正相关。结论：Smac和Livin的表达与宫颈鳞状细胞癌的发生和发展密切相关，可能协同参与调控细胞的凋亡。

【关键词】 宫颈鳞状细胞癌； Smac； Livin

中图分类号 R714.2 文献标识码 B 文章编号 1674-6805（2016）9-0093-02

doi：10.14033/j.cnki.cfmr.2016.9.052

宫颈鳞状细胞癌是严重威胁女性健康的疾病之一，近年来发病趋势有所上升。目前对于宫颈鳞状细胞癌，手术切除是其主要的治疗方式，放疗和化疗是重要的辅助手段[1]。为了寻找更为有效的治疗方法，需对宫颈鳞状细胞癌的发生发展机制有进一步的研究。本研究检测宫颈鳞状细胞癌组织中存活蛋白（Livin）和线粒体促凋亡蛋白（Smac）的表达，旨在为研究提供参考。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2012年12月-2014年12月在笔者所在医院接受手术切除并被临床病理学明确诊断为原发性宫颈鳞状细胞癌组织标本（宫颈癌组）24份作为研究对象，标本所属患者年龄27～65岁，平均46岁。肿瘤的直径为2.1～4.7 cm，平均3.4 cm。同时另选取64份宫颈上皮内瘤变组织标本（内瘤变组）和18份正常宫颈组织标本（正常组）作为对照，选取的所有患者术前均未进行化疗、放疗和免疫治疗，且所有患者均无其他严重内科疾病或者是其他恶性肿瘤。宫颈癌组和内瘤变组患者性别、年龄、病情、手术方式等比较差异无统计学意义（P>0.05），具有可比性。

1.2 方法

所有标本均经过甲醛液固定以及石蜡包埋后，制作成组织芯片[2]。免疫组化染色多克隆抗体Smac购自于Santa Cruz Biotechnology（美国），二抗试剂盒由福建迈新生物技术开发有限公司提供，免疫组化染色多克隆抗体Livin购自于武汉博士德公司。采用EnVisionTM法进行免疫组化染色，严格按照说明书进行操作。阳性对照切片购自于试剂公司，PBS替代一抗作为阴性对照[3]。

1.3 结果判断标准

背景染色清晰，Livin和Smac阳性细胞均为胞质着色，呈棕黄色或棕黄色颗粒[4]。参照Bachtiary的方法在高倍镜下随机选取视野5个，每个视野计数200个细胞，结合染色情况，弱（1分），清晰（2分），强（3分）；阳性细胞数小于1.0%（0分），1.0%～10.0%（1分），11.0%～50.0%（2分），51.0%～80.0%（3分），大于80%（4分），综合两项评分，总分≥3则判断为阳性表达，总分<3则判断为阴性表达。由两位病理科医师独立阅片确定免疫组化结果，如存在不一致协商后统一意见，同时分析Livin和Smac相关性[5]。

1.4 统计学处理

采用SPSS 19.0软件对文中所得数据进行统计学分析，计数资料采用字2检验，计量资料以（x±s）表示，采用t检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 各组Smac测定结果比较

正常组Smac阳性率为0，内瘤变组Smac的阳性率为62.50%，宫颈癌组中Smac阳性率为91.67%；Smac测定结果阳性率最高值在宫颈癌组中，明显高于其他两组，差异均有统计学意义（P<0.05），见表1和图1。

2.2 各组Livin测定结果比较

正常组Livin阳性率为22.22%，内瘤变组Smac的阳性率为90.63%，宫颈癌组Smac阳性率为91.67%。Livin测定结果阳性率最高值在宫颈癌组中，明显高于其他两组，差异均有统计学意义（P<0.05），见表2和图2。

2.3 相关性分析

宫颈鳞状细胞癌中Smac和Livin的表达呈正相关（P<0.05）。

3 讨论

宫颈鳞状细胞癌属于女性常见恶性肿瘤之一，发病率呈逐年升高趋势。其发病机制目前尚未阐明，宫颈鳞状细胞癌的治疗已成为临床工作者研究的重点[6]。研究显示，肿瘤生长与细胞增殖和凋亡密切相关。因此，肿瘤发生的关键是调节细胞凋亡基因[7]。作为一种可与多种凋亡蛋白抑制剂（IAPs）分子结合的凋亡因子，Smac在调控细胞凋亡过程中具有重要作用。各种凋亡刺激Smac可使其与细胞色素C同时从线粒体释放，在结合IAPs情况下解除IAPs抑制半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶，加速细胞凋亡。研究指出，不同组织中Smac表达存在差异，非小细胞肺癌、肝癌及宫颈癌中高表达，胃癌中则低表达。Livin基因是一种新发现的IAP成员，可在胚盘、胚胎组织、乳腺癌、非小细胞肺癌、胃癌、前列腺癌、结肠癌、膀胱癌及黑色素瘤等中表达。Livin蛋白主要在细胞质中表达，通过半胱氨酸蛋白水解酶（如Caspases3/7和Caspases-9等）和LivinBIR区抑制Caspases蛋白活性，阻断凋亡受体而发挥作用。其在多数正常成人组织中不表达或低表达，在大部分恶性肿瘤中表达较高。因此，Livin和Smac表达对宫颈鳞状细胞癌的进展具有重要意义[8]。本文通过免疫组化染色法检测宫颈癌组、内瘤变组和正常组Smac和Livin，研究结果显示，宫颈癌组患者的Smac和Livin的表达均明显高于内瘤组和正常组，差异有统计学意义（P<0.05），证实了Smac和Livin的表达在宫颈鳞状细胞癌中的价值。此外，宫颈癌组、内瘤变组和正常组中Livin和Smac表达比较差异均有统计学意义（P<0.05），说明这两种蛋白的表达具有相关性，可能协同参与了细胞凋亡通路的调节，从而促进宫颈鳞状上皮病变的发生和发展[9]。这为今后宫颈鳞状细胞癌的治疗提供了新的研究靶点和方向[10]。

综上所述，Smac和Livin表达与宫颈鳞状细胞癌的进展存在相关性，对其进行研究可为宫颈鳞状细胞癌的临床治疗提供参考。

参考文献

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（收稿日期：2015-11-06）