解毒通络合剂对代谢综合征合并AMI大鼠BNP、NPY、SP含量的影响

项泳锋，魏陵博，张月辉，戎冬梅，初　楠

解毒通络合剂对代谢综合征合并AMI大鼠BNP、NPY、SP含量的影响

项泳锋1，魏陵博2，张月辉2，戎冬梅2，初楠2

1.山东中医药大学(济南 250355)；2.山东省青岛市海慈医疗集团

摘要：目的观察解毒通络合剂对代谢综合征(MS)合并急性心肌梗死(AMI)大鼠脑钠肽(BNP)、神经肽Y(NPY)、P物质(SP)含量的影响。方法将大鼠随机为空白对照组、模型对照组、琥珀酸美托洛尔缓释片(倍他乐克)组及解毒通络合剂低、高剂量组，除空白对照组外，其他4组制作代谢综合征模型，造模成功后开始灌胃，时间为4周，最后1次灌胃后予垂体后叶素注射造成AMI模型，用ELISA双抗体夹心法检测血清BNP、NPY、SP水平。结果伴MS大鼠心肌梗死后BNP明显升高，高剂量解毒通络合剂可以降低BNP含量；解毒通络合剂低、高剂量组和倍他乐克组可以降低NPY的含量(P<0.01)，解毒通络合剂高剂量组优于倍他乐克组(P<0.01)；解毒通络合剂高剂量组、倍他乐克组与模型对照组相比，SP含量显著提高(P<0.01)。结论高剂量解毒通络合剂能够改善伴MS的AMI大鼠心力衰竭症状，降低其交感神经活性。

关键词：代谢综合征；急性心肌梗死；解毒通络合剂；脑钠肽；神经肽Y；P物质

研究发现冠心病(CHD)热毒证临床表现类似于CHD合并代谢综合征(MS)，而交感神经的过度激活则被证明与高血压、腹型肥胖、胰岛素抵抗纪2型糖尿病的发生发展密切相关。脑钠肽(BNP)为心脏分泌的短肽激素，在心力衰竭时BNP分泌增多，具有利钠、利尿、扩血管降压、抑制肾素-血管紧张素-醛固酮系统和交感神经系统的作用；神经肽Y(NPY)是一种重要的神经递质，具有调节血管的收缩,增强血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、内皮素、NE等缩血管物质而抑制舒血管物质的作用；而且发生焦虑行为时，会反射性促使NPY mRNA表达，抑制交感神经的过度兴奋；P物质(SP)是一种能被免疫系统和神经系统共同识别的信号物质，具有传递信息，调节免疫反应等作用。本实验以解毒通络合剂灌胃伴代谢综合征(MS)的大鼠，观察解毒通络合剂对代谢综合征并急性心肌梗死(AMI)大鼠BNP、NPY、SP含量的影响

1材料与方法

1.1实验动物选用体重200 g±20 g的Wistar大鼠66只，12周龄，均为雄性，由青岛市药物检验研究所动物中心提供，饲养于青岛市药物检验研究所动物房，金属鼠笼，分笼饲养，每笼 5只，保持室内环境恒温20 ℃±2 ℃，湿度在50%～60%，通风良好，标准饲料，自由进食饮水。

1.2实验药物解毒通络合剂：黄连12 g，酒大黄3 g，连翘15 g，野葛根30 g，水蛭6 g，地龙12 g，钩藤15g，总计生药93 g，为1 d成人使用剂量，由青岛市海慈医疗集团药剂科中药制剂室制成生药浓度为2.4 g/mL的中药合剂，质量标准按照 2010 版《中国药典》制定。琥珀酸美托洛尔缓释片(倍他乐克，每片47.5 mg)，阿斯利康制药有限公司生产，国药准字号H32025391。

1.3主要试剂及仪器血清BNP、NPY、SP试剂盒购自上海鑫乐生物科技有限公司；链脲佐菌素(STZ)、枸橼酸钠缓冲液购自青岛捷世康生物科技有限公司；华法林钠片(每片2.5 mg)，山东齐鲁制药有限公司生产(国药准字号：H37021314)；维生素KM1注射液，山东鲁抗辰欣药业有限公司生产(国药准字号：H37021988)；25%乌拉坦，青岛市药物检验研究所提供。

BP-6动物无创血压测试仪，成都泰盟科技有限公司；H-2000R离心机，江东仪器公司；xMark酶标仪，伯乐科技生产；GNP-9050型隔水式恒温培养箱，上海市三发科技有限公司；心电图机，由美国Burdick公司生产。

1.4方法将66只Wistar大鼠常规喂养 1周，随机挑选6只为空白对照组，余60只复制代谢综合征大鼠模型。

1.4.1高血压应用华法林和维生素K1诱导动脉中层钙化法[1]，6周后判定造模结果，收缩压升高并持续18.67 kPa(140 mmHg)为造模成功。

1.4.2高血脂、高血糖采用高脂饲料喂养加注射链脲佐菌素法[2]制备，在高脂饲料喂养4周后禁食(不禁水)12 h，一次性腹腔注射STZ 30 mg/kg(用pH4.4的0.1 mol/L无菌枸橼酸缓冲液配成0.25%浓度)，注射72 h后大鼠禁食(不禁水)12 h，断尾取血，用罗氏血糖仪测定大鼠空腹血糖≥11.1 mmol/L[3-4]为造模成功。

1.4.3分组与灌胃将造模后的大鼠随机分为4组，分别为模型对照组、倍他乐克组及解毒通络合剂高、低剂量组，每组15只。倍他乐克组：给予倍他乐克4.07 mg/(kg·d)灌胃；解毒通络合剂高剂量组给予解毒通络合剂24 g生药/(kg·d)灌胃；解毒通络合剂低剂量组给予解毒通络合剂16 g生药/(kg·d)灌胃。正常对照组和模型对照组给予蒸馏水10 mL/(kg·d)灌胃，时间4周。

1.4.4标本采集与检测最后1次灌胃后，禁食 12 h，以25%乌拉坦7 mL/kg腹腔注射麻醉大鼠，固定，连接心电图机，进行正常心电图检测，将垂体后叶素注射液用生理盐水配成2 U/mL，按照8 U/kg剂量经舌下静脉于10 s内推完，观察心电图变化，心电图出现Q波、ST段抬高、T波高耸或倒置证实心肌梗死形成。腹部正中切口，腹主动脉取血约5 mL，4 000 r/min离心10 min，将大鼠血清置于-70 ℃低温下冷冻备用，采用ELISA试剂盒双抗体夹心法检测大鼠血清BNP、NPY、SP含量 。

2结果

2.1大鼠在灌胃后出现死亡的情况采血前模型对照组和解毒通络合剂低剂量组各死亡8只，倍他乐克组死亡9只，中药高剂量组死亡5只。

2.2实验大鼠经干预后BNP、NPY、SP含量的比较与空白对照组比较，模型对照组BNP明显升高(P<0.01)；解毒通络合剂高剂量组BNP含量与模型对照组比较显著降低(P<0.01)，而倍他乐克组、解毒通络合剂低剂量组与模型对照组比较差异无统计学意义；解毒通络合剂高剂量组、解毒通络合剂低剂量组和倍他乐克组NPY含量与模型对照组比较显著降低(P<0.01)，解毒通络合剂高剂量组NPY含量与倍他乐克组、解毒通络合剂低剂量组比较显著降低(P<0.01)；与空白对照组比较，模型对照组SP含量降低(P<0.01)，解毒通络合剂高剂量组、倍他乐克组SP含量与模型对照组比较显著提高(P<0.01)，解毒通络合剂高剂量组SP含量与倍他乐克组、解毒通络合剂低剂量组比较显著提高(P<0.05)。详见表1。

表1　各组大鼠BNP、NPY、SP含量比较(±s)

3讨论

研究发现冠心病(CHD)热毒证临床表现类似于CHD合并MS，还提示热毒证的发生与交感神经兴奋有关[5]。MS是以中心性肥胖为基础，包括血脂紊乱、高血压、糖尿病或糖耐量异常及胰岛素抵抗为主要临床表现的症候群，可直接促进动脉粥样硬化性心血管疾病和 2 型糖尿病的发生和发展[6]。研究证实，MS的大多组分，例如高血压、腹型肥胖、胰岛素抵抗、2型糖尿病都与交感神经系统的过度激活密切相关[7]。

研究表明急性冠脉综合征多伴有脑钠尿肽合成量及释放量显著增多，从而导致病人血浆中脑钠尿肽及去甲肾上腺素含量增加[8]。本研究也发现心肌梗死后动物BNP明显升高，高剂量解毒通络合剂可以降低BNP的含量，而倍他乐克缓释片无此作用，提示解毒通络合剂在减轻心肌梗死动物心力衰竭方面要优于倍他乐克。

NPY 是由36个氨基酸残基组成的神经活性肽，交感神经兴奋可使其释放增加，与情志因素密切相关[9]。中枢NPY为抑制性神经递质，外周的NPY则具有正向刺激作用，它和糖皮质激素以及儿茶酚胺共同增强应激反应。心脏的NPY存在于窦房结等处，与交感神经兴奋性增高所致的心律失常相关，本研究表明中药组能够降低外周血清NPY的含量，高剂量组优于倍他乐克组，说明解毒通络合剂在降低动物交感神经活性方面优于倍他乐克。

P物质是神经激肽中含量最丰富的一种脑肠肽，广泛分布于中枢神经系统和胃肠系统，具有痛觉传递、参与炎症反应和免疫调节、影响生殖内分泌功能等作用[10]。研究表明[11]，动物心力衰竭或心肌受损时SP的含量会下降，与本研究结果相同，解毒通络合剂高剂量组可以提高心肌梗死动物SP的含量，疗效与倍他乐克组相同。

解毒通络合剂以黄连、水蛭为君药，《本草纲目》谓黄连去心窍恶血，水蛭破血逐瘀通经。连翘、野葛根、钩藤、地龙共为臣药，冰片、熟大黄为佐使，全方咸以入血，以苦寒折之，辛寒散之，留者攻之，可以较好地解除热壅血瘀证。药理研究证实黄连、野葛根有类似抗β肾上腺素受体阻滞和钙拮抗作用，并有较好的降糖作用，治疗不稳定型心绞痛有较好的疗效，并可改善左室舒张功能异常[12]。本研究表明：对于伴MS的心肌梗死动物解毒通络合剂可以更好地改善心力衰竭症状，降低交感神经兴奋性。

参考文献：

[1]Essalihi R，Dao HH，Yamaguchi N，et al．A new model of isolated systolic hypertension induced by chronic warfarin and vitamin K1 treatment[J]．Am J Hypertens，2003，16(2)：103-110．

[2]武燕，袁红，田环环，等.链脲佐菌素诱导 2 型糖尿病大鼠模型的探索[J]．中医学报，2014，29(188)：25-27.

[3]翟迎九，董雪红，周丽诺，等． STZ 糖尿病大鼠心肌细胞凋亡及葡萄糖、血管紧张素Ⅱ、瘦素对心肌细胞凋亡影响的观察[J]．复旦学报：医学版，2005，32(3)：330-332．

[4]都晓伟，王欢，吴军凯，等．参葛降糖胶囊对胰岛素抵抗型糖尿病大鼠脂肪细胞因子水平影响的实验研究[J]．上海中医药杂志，2012，46(8)：81-84．

[5]魏陵博，钟志欢，吉中强，等.冠心病热毒证危险因素筛选研究[J]．中国中医急症，2011，20(6)：885-887.

[6]沈振海，陆昀，方宁远.代谢综合症研究的新进展[J].中国心血管病研究杂志，2008(6)：466-467.

[7]张晓良.交感神经系统与代谢综合征[J].心血管病学进展，2012，33(3)：384-386.

[8]赵一楠，刘文娴.B 型氨基端尿钠肽原与肌钙蛋白 I联合GRACE 评分对非 ST 段抬高急性冠脉综合征的风险预测[J].广东医学，2014，35(10)：1564-1567.

[9]寇振媛，许毓英，杨丹丹，等.情志因素对不同年龄组心房纤颤患者血清中神经肽 Y 与心钠素的影响[J].辽宁中医杂志，2015，42(4)：680-682.

[10]杨斌，王有德，张兰抑，等.郁症患者血浆 P 物质含量变化及其相关性研究[J].中华精神科杂志，2006，39(2)：78-80.

[11]Tingberg E，Roijer A，Thilen U，et al．Neurohumoral changes in patients with left ventricular dysfunction following acute myocardi-al infarction and the effect of nitrate therapy：a randomized，double-blind，placebo controlled long-term study[J]．J Card-iovasc Pharmacol，2006，48(4)：166-172.

[12]魏陵博，辛辉，戎冬梅，等.解毒通络合剂对冠心病PCI患者MMP-9、ET-1、NO、hs-CRP 的影响[J].中国中医急症，2012，21(12)：1895-1896.

(本文编辑郭怀印)

基金项目：山东省中医药科技发展计划项目(No.2013ZDZK-104)

通讯作者：魏陵博，E-mail：w83776028@126.com

中图分类号：R542.2R289.5

文献标识码：A

doi：10．3969/j．issn．1672-1349．2016．02．007

文章编号：1672-1349(2016)02-0131-03

(收稿日期：2015-09-10)