饲料中维生素C添加量对黄姑鱼体组成成分和组织中抗氧化酶活力的影响

陈东星，王立改,，楼宝,，詹炜，陈睿毅，刘峰,

（1.浙江海洋大学海洋与渔业研究所，浙江舟山316022；2.浙江省海洋水产研究所，浙江省海水增养殖重点实验室，浙江舟山316021）

饲料中维生素C添加量对黄姑鱼体组成成分和组织中抗氧化酶活力的影响

陈东星1，王立改1,2，楼宝1,2，詹炜2，陈睿毅2，刘峰1,2

（1.浙江海洋大学海洋与渔业研究所，浙江舟山316022；2.浙江省海洋水产研究所，浙江省海水增养殖重点实验室，浙江舟山316021）

以鱼粉、豆粕、玉米蛋白粉为蛋白源，鱼油、豆油、大豆卵磷脂为脂肪源，配制成6种维生素C水平分别为2.1、45.3、89.6、132.4、178.6和547.1 mg/kg的等氮等能的试验饲料，对初始体重为（33.26±0.05）g的黄姑鱼进行为期9周的养殖试验。结果显示：饲喂132.4和547.1 mg/kg组的黄姑鱼全鱼和肌肉脂肪含量显著高于对照组（2.1 mg/kg）；肝脏中T-SOD和CAT活力在547.1 mg/kg组最高；血清中T-SOD随VC添加水平的升高而波动下降，但GSH-PX随VC添加水平的升高而升高；饲料中添加89.6 mg/kg以上VC能使肝脏和血清中的MDA处于较低水平。综合得出，饲料中添加132.4 mg/kg的VC能满足黄姑鱼基本需求，但VC添加量提高到547.1 mg/kg时，能获得更好的抗氧化性能。

黄姑鱼；维生素C；抗氧化；体组成成分

维生素C（VC）又名抗坏血酸（Ascorbic Acid），是一种重要的抗氧化维生素，在动物体内以氧化或还原型形式存在，它既可以作为氢受体，也可以作为氢供体，为羟基和超氧化物自由基等提供电子，从而终止自由基（ROS）活性，减轻自由基对机体氧化损伤[1]。

自由基（Reactive oxygen species，ROS）是动物体新陈代谢的产物，通常情况下机体自由基产生和抗氧化过程处于动态平衡，而受到环境胁迫后机体自由基会迅速增多，过多的自由基会抑制抗氧化酶的活性，导致蛋白质、脂质被氧化，从而造成机体细胞氧化损伤[2-3]。

VC是动物必须的营养素，但大部分鱼类自身不能合成VC或合成能力有限，这就需要食物中添加获得[4]，VC除了抗氧化作用以外，还在鱼类促进生长发育、抗应激、增强免疫等方面具有重要作用[5]。

黄姑鱼Nibea albiflora属于石首鱼科，黄姑鱼属，俗称黄婆鸡，是一种温水性近海中下层鱼类，广泛分布于中国沿海、朝鲜及日本南部海域[6-7]。其肉味鲜美，是东海主要经济鱼类之一，近年来由于过度捕捞、环境问题等原因自然资源明显减少，人工养殖黄姑鱼日益受到重视[8]，目前在浙江、福建已经开展了黄姑鱼的人工育苗和养殖，并取得了较好的经济效益[9-10]。然而，目前黄姑鱼的养殖主要依靠小杂鱼和其他鱼饲料，有关黄姑鱼的营养需求及饲料开发尚处于起步阶段，鲁琼等[11]和WANG等[12]已对黄姑鱼蛋白质需求和脂肪需求进行了相关研究，而维生素方面的相关研究尚未见报道。鉴于此，本文将通过体成分分析和组织中过氧化氢酶（CAT）、总超氧化物歧化酶（T-SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）三种抗氧化酶和丙二醛（MDA）的含量综合分析探讨VC对黄姑鱼幼鱼体成分和抗氧化性能的影响，为黄姑鱼幼鱼配合饲料研发提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 试验饲料

以鱼粉、豆粕和玉米蛋白粉为蛋白源，以鱼油、豆油和大豆卵磷脂为脂肪源配置基础饲料，在此基础上分别添加0、50、100、150、200、和600 mg/kg的VC，制成6种等氮等能的试验饲料（实验梯度的设置参考了日本黄姑鱼、大黄鱼等海水鱼类的维生素C需求量）。6组饲料中VC实测值分别为：2.1、45.3、89.6、132.4、178.6和547.1 mg/kg，分别记为VC1～VC6。试验饲料营养水平见表1。饲料的制作过程包括过筛、称重、混合、搅拌、挤条、制粒，制成直径2 mm和4 mm颗粒料。经过90℃烘箱熟化30 min，阴凉处风干，自封袋封装后放于-20℃冰箱保存待用。

1.2 试验鱼及养殖管理

试验鱼为浙江省海洋水产研究所西轩岛试验场培育的苗种，养殖试验位于西轩岛中挪海水鱼营养与饲料联合实验室，选取规格均匀、健康、活力好初始体重为（33.26±0.45）g的幼鱼360尾，随机分为6组，每组3个重复，分别饲养于300 L塑料桶中，采用流水养殖方式，每天分别在07:00和15:00各投饲料1次，养殖试验期为9周。养殖期间水温（26±2）℃，pH为7.0～8.0，盐度38～29，溶解氧>5.5 mg/L，氨氮浓度<0.05 mg/L。

1.3 样品采集

饲养试验结束，停食1 d后，每桶随机取4～6尾鱼置于冰袋上尾静脉抽血并取其肝脏，血置于2 mL离心管4 000 r/min离心10 min，取血清于2 mL离心管置于液氮罐保存；肝脏放置于2 ml离心管液氮罐保存，肝脏和血清备测抗氧化酶活力；再取其背部肌肉置-20℃冰箱，每桶取3～4尾鱼做全鱼置-20℃冰箱保存，全鱼和背部肌肉备测常规体成分。

表1 基础饲料组成及营养水平（干物质基础）Tab.1Composition and nutrient levels of experimental diets(DM basis)%

1.4 样品分析与数据处理

试验饲料、全鱼和肌肉中的常规营养成分采用AOAC法（1995）测定，其中采用105℃烘箱烘干法测定样品水分，采用凯氏定氮法（BUCHI，KjeIFIex K-360，瑞士）测定粗蛋白，采用索氏抽提仪（FOSS SoxtecTM 2055，瑞典）测定粗脂肪，采用马弗炉550℃灼烧法测定粗灰分。

肝脏和血清中的相关酶活（CAT、T-SOD、GSH-PX）以及MDA的含量均采用南京建成生物工程研究所试剂盒测定，其中蛋白定量采用考马斯亮蓝法测定，CAT采用紫外比色法，T-SOD用羟胺法，MDA用BAT法。

1.5 数据处理与分析

数据处理采用SPSS 19.0软件进行单因素（ANOVA）方差分析，Duncan’s多重检验，P<0.05即认为差异显著，数据用均值±标准误表示。

2 结果

2.1 饲料中维生素C对黄姑鱼体组成成分的影响

统计分析结果显示饲料中不同维生素C水平对黄姑鱼全鱼和肌肉中的水分、粗蛋白、粗灰分均无显著性影响（P>0.05），但对全鱼和肌肉中的粗脂肪影响均显著（P<0.05），全鱼和肌肉中的粗脂肪在VC4和VC6组最高，全鱼粗脂肪VC4和VC6组显著高于VC1、VC2和VC3组，肌肉粗脂肪VC4和VC6组显著高于对照组VC1组。

表2 添加不同水平的维生素C在黄姑鱼幼鱼全鱼和肌肉中的体成分Tab.2Proximate composition in whole body and muscle of juvenile N.albiflora fed different levels of vitamin C diets

2.2 饲料中不同维生素C水平对黄姑鱼组织中抗氧化能力的影响

2.2.1 对肝脏和血清中抗氧化酶活力的影响

由表3可知，肝脏中的T-SOD活力VC6组最高且与VC5组有显著性差异，其他各组差异不显著（P> 0.05），CAT活力有随VC水平的增加而逐渐升高的趋势，且VC6组显著高于对照组，其他各组间差异不显著（P>0.05），GSH-PX活力有先下降后升高的趋势，但差异性不显著（P>0.05）。

血清中T-SOD活力有波动式下降的趋势，VC2组显著高于VC6组，但其他各组差异不显著（P> 0.05），CAT活力有先下降后升高的趋势，但各组间差异性不显著（P>0.05），GSH-PX有逐渐升高的趋势，且VC6和VC5组均显著高于对照组，但其他组间差异不显著（P>0.05）。

2.2.2 对肝脏和血清中丙二醛含量的影响

肝脏中的丙二醛有随饲料中VC添加水平的增加逐渐下降的趋势，但各组间差异性不显著（P>0.05），血清中的丙二醛随VC添加水平的提高而逐渐降低，饲喂VC3～VC6饲料组的黄姑鱼血清中MDA含量显著低于VC1～VC2组（P<0.05）。

表3 饲料中添加不同水平的维生素C对黄姑鱼幼鱼肝脏和血清中总超氧化物歧化酶（T-SOD）、过氧化氢酶（CAT）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）和丙二醛（MDA）的影响(均值±标准误)Tab.3 Effects of dietary vitamin C levels on total superoxide dismutase(T-SOD),catalase(CAT), glutathione peroxidase(GSH-PX)activities and malonaldehyde(MDA)contents in hepatic and serum of juvenile N.albiflora(Means±S.E.)

3 讨论

相关研究表明，饲料中添加不同水平的维生素C对鱼体全鱼中粗蛋白、粗脂肪、粗灰分和水分含量没有显著性影响[13-15]，对肌肉中粗蛋白、粗脂肪和粗灰分含量也没有显著影响[16]。然而本试验结果显示，不同的VC水平对黄姑鱼全鱼和肌肉粗脂肪影响显著这与上述研究结果不同，本试验中，全鱼和肌肉粗脂肪在132.4和547.1 mg/kg组显著高于对照组，推测可能是由于一定水平的维生素C提高了鱼体抗氧化能力，减少了脂质过氧化程度，进而一定程度上增加了脂肪沉积量，这与本研究中132.4和547.1 mg/kg组肝脏的总抗氧化酶活力较高相吻合。另外，对猪和人体的相关研究显示VC还能促进脂肪细胞增殖和分化，从而促进细胞合成脂肪[17-18]，这进一步说明一定水平的VC有利于鱼体脂肪的沉积。

维生素C是一种天然的抗氧化剂，其具有非常强的清除自由基的作用[19]，T-SOD、CAT、GSH-PX是三种主要的抗氧化酶，其中SOD酶首先作用于活性氧自由基[20]，它能催化超氧阴离子自由基（O2-）转化为H2O2和O2[21]，而产生的H2O2可以在CAT的催化作用下生成H2O和O2[2]，GSH-PX也能催化还原型谷胱甘肽（GSH）与H2O2还原反应，从而达到去除H2O2，保护细胞膜结构和功能完整的作用[22]，多数动物体内产生的H2O2主要由CAT和GSH-PX消除[23]。

本实验中，虽然肝脏中VC5组的T-SOD活力显著低于VC6组，但总体上132.4 mg/kg及以上的VC水平显著提高了肝脏中的T-SOD活力，这与WAN等[24]对团头鲂Megalobrama amblycephala的研究结果类似。血清中T-SOD活力随VC添加量增高呈波动下降的趋势，这与谢一荣等[27]、万金娟等[20]的研究结果不同，这可能是由于较低VC水平试验组黄姑鱼机体内自由基过多，需要机体动员体内的SOD酶，从而造成该酶在低水平VC添加组的黄姑鱼血清中较高，而随着VC添加水平的提高，机体抗氧化能力总体增强，故其血清中T-SOD活力有下降趋势。肝脏中的CAT活力随VC添加水平的提高而呈现升高的趋势，且差异显著，这与CHEN等[25]和袁瑞敏[26]对大口黑鲈Micropterus salmoides的研究结果一致，说明在一定范围内，饲料中VC添加量升高可提高鱼体肝脏的抗氧化能力，至于肝脏中GSH-PX随VC添加水平的增加先下降后升高，可能是由于CAT酶的协同作用所致。血清中的GSH-PX有随VC浓度提高而活力上升的趋势，说明其清除H2O2的能力逐渐增强，而血清CAT活力相应地也出现了先下降后升高的趋势，这与肝脏中的情况类似，结合肝脏中CAT和GSH-PX酶活力变化情况，推测黄姑鱼肝脏中的H2O2可能率先由CAT酶清除，GSH-PX辅助，而血清中的H2O2可能率先由GSH-PX酶清除，CAT辅助，但具体的作用机理尚需要进一步研究和考证。

在生物体内，自由基作用于脂质产生的氧化产物就是MDA，MDA的水平可以直接反应生物膜受氧化损伤的程度，间接反映自由基对机体的损伤程度[28-29]。彭士明等[30]对银鲳Pampus argenteus的研究结果表明随着饲料中VC添加量的增加，肝脏和肌肉中MDA水平呈明显下降趋势，这与本试验结果类似。本试验血清中的MDA含量也有随VC水平增加而明显下降的趋势，这与郭春阳[31]对黄颡鱼Pelieobagrus fulvidraco和何蓝波对黄鳝Monopterus albus的研究结果一致。本试验中肝脏和血清中MDA含量在VC添加水平≥89.6 mg/kg后下降缓慢，这表明饲料中添加89.6 mg/kg及以上水平的维生素C能显著降低黄姑鱼机体脂质过氧化程度，减轻氧化损伤。

4 结论

在本实验条件下，饲料中添加89.6 mg/kg以上VC能使黄姑鱼肝脏和血清中的MDA处于较低水平，但添加547.1 mg/kg的VC时鱼体抗氧化性能最强。饲料中添加132.4 mg/kg以上VC有利于保护鱼体脂肪水平。综合得出，满足黄姑鱼幼鱼基本需求的VC添加量为132.4 mg/kg，但要获得更好的抗氧化性能，其VC添加量得达到547.1 mg/kg。

[1]许友卿,易波,丁兆坤.维生素E和维生素C的协同抗氧化作用及对水产动物的影响[J].饲料工业,2011,32(14):59-62.

[2]孙鹏,尹飞,彭士明,等.盐度对条石鲷幼鱼肝脏抗氧化酶活力的影响[J].海洋渔业,2010,32(2):154-159.

[3]孙鹏,柴学军,尹飞,等.运输胁迫下日本黄姑鱼肝脏抗氧化系统的响应[J].海洋渔业,2014,36(5):469-474.

[4]龚勋,牛翠娟.饲料中添加维生素C对水产动物的影响[J].安徽农业科学,2013,41(6):2 505-2 507.

[5]张辉,牟振波,单安山,等.鱼类的维生素C营养[J].饲料工业,2009,30(8):48-51.

[6]朱元鼎,张春霖,成庆泰.东海鱼类志[M].北京:科学出版社,1963:274-275.

[7]楼宝,史会来,毛国民,等.黄姑鱼全人工繁育及大规模苗种培育技术研究[J].现代渔业信息,2011,26(3):20-23.

[8]吴常文,赵淑江,胡春春.东海黄骨鱼年龄与生长的初步研究[J].海洋渔业,2005,27(3):193-199.

[9]蔡厚才,林岿璇,陈传再.南麂海区黄姑鱼网箱养殖技术研究[J].浙江海洋学院学报:自然科学版,2001,20(1):66-69.

[10]陈高峰,余海,褚茂兵,等.黄姑鱼网箱养殖技术研究[J].科学养鱼,2012(9):46-46.

[11]鲁琼,王立改,楼宝,等.饲料蛋白质水平对黄姑鱼幼鱼、生长性能、体组成和消化酶活性的影响[J].动物营养学报, 2015,27(12):3 763-3 771.

[12]WANG L,LU Q,LUO S,et al.Effect of dietary lipid on growth performance,body composition,plasma biochemical parameters and liver fatty acids content of juvenile yellow drum Nibea albiflora[J].Aquaculture Reports,2016,4:10-16.

[13]李华,王小洁,麦康森,等.饲料维生素C添加量对半滑舌鳎幼鱼存活、生长及组织中抗坏血酸含量的影响[J].中国海洋大学学报:自然科学版,2012,42(Z1):75-80.

[14]陈建明,叶金云,潘茜,等.饲料中添加维生素C对翘嘴鲌鱼种生长及组织中抗坏血酸含量的影响[J].中国水产科学, 2007,14(1):106-112.

[15]何蓝波.维生素C对黄鳝生产性能、营养成分、抗氧化能力和免疫功能的影响[D].成都:四川农业大学,2010.

[16]王文辉,王吉桥,程鑫,等.不同剂型维生素C对黄颡鱼生长和几种免疫指标的影响[J].中国水产科学,2006,13(6): 951-958.

[17]庄合林,林亚秋,杨公社,等.维生素C通过调控脂肪形成相关基因的转录促进猪前体脂肪细胞的增殖与分化[J].中国生物化学与分子生物学报,2007,23(6):499-507.

[18]朱晓海,何清濂,林子豪,等.常用维生素对人前脂肪细胞增殖和分化的作用[J].中华医学美学美容杂志,2003,9(6): 356-359.

[19]葛颖华,钟晓明.维生素C和维生素E抗氧化机制及其应用的研究进展[J].吉林医学,2007,28(5):707-708.

[20]万金娟,刘波,戈贤平,等.日粮中不同水平维生素C对团头鲂幼鱼免疫力的影响[J].水生生物学报,2014,38(1):10-18.

[21]ZHOU Q,WANG L,WANG H,et al.Effect of dietary vitamin C on the growth performance and innate immunity of juvenile cobia(Rachycentron canadum)[J].Fish&Shellfish Immunology,2012,32(6):969-975.

[22]刘洋,凌去非,于连洋,等.氨氮胁迫对泥鳅不同组织SOD和GSH-PX活性的影响[J].安徽农业科学,2011,39(2):1 069-1 072.

[23]DE Z M,WHANG I,LEE Y,et al.Transcriptional analysis of antioxidant and immune defense genes in disk abalone(Haliotis discus discus)during thermal,low-salinity and hypoxic stress.[J].Comparative Biochemistry&Physiology Part B Biochemistry &Molecular Biology,2009,154(4):387-395.

[24]WAN J,GE X,LIU B,et al.Effect of dietary vitamin C on non-specific immunity and mRNA expression of three heat shock proteins(HSPs)in juvenile Megalobrama amblycephala,under pH stress[J].Aquaculture,2014,434:325-333.

[25]CHEN Y J,YUAN R M,LIU Y J,et al.Dietary vitamin C requirement and its effects on tissue antioxidant capacity of juvenile largemouth bass,Micropterus salmoides[J].Aquaculture,2015(435):431-436.

[26]袁瑞敏.大口黑鲈饲料添加维生素C对其生长及抗氧化能力的影响[D].广州:中山大学,2013.

[27]谢一荣,吴锐全,谢骏,等.维生素C对大口黑鲈生长与非特异性免疫的影响[J].南方水产科学,2006,2(3):40-45.

[28]杨涛,陈海刚,蔡文贵,等.菲和苯并(b)荧蒽曝露对翡翠贻贝外套膜的氧化胁迫及损伤[J].南方水产科学,2011,7(4): 24-29.

[29]黄志斐,马胜伟,张喆,等.BDE3胁迫对翡翠贻贝(Perna viridis)SOD、MDA和GSH的影响[J].农业环境科学学报,2012, 8(6):25-30.

[30]彭士明,施兆鸿,高权新,等.增加饲料中Vc质量分数对银鲳血清溶菌酶活性及组织抗氧化能力的影响[J].南方水产科学,2013,9(4):16-21.

[31]郭春阳,邱红,梁雄培,等.黄颡鱼幼鱼对饲料中维生素C的需要量[J].动物营养学报,2015,27(10):3 067-3 076.

Effect of Dietary Vitamin C on Body Composition and Antioxidase Activity in Tissues of Yellow Drum Nibea albiflora

CHEN Dong-xing1,WANG Li-gai1,2,LOU Bao1,2,et al
(1.Marine and Fishery Research Institute of Zhejiang Ocean University,Zhoushan316022;2.Zhejiang Marine Fisheries Research Institute,Zhejiang Key lab of Mariculture&Enhancement,Zhoushan316021,China)

A 9-week feeding trial was conducted to determine the effect of dietary vitamin C on body composition and tissue antioxidant enzyme activities(initial weight 33.26±0.05 g).Six practical diets were formulated containing vitamin C 2.1,45.3,89.6,132.4,178.6,and 547.1 mg/kg diet supplied as L-ascorbyl-2-monophosphate.The results showed that the contents of whole body and muscle crude lipid in the fish fed 132.4 and 547.1 mg/kg diets were significantly higher than those in the control group(2.1 mg/kg).The activities of T-SOD and CAT in the liver were the highest in the fish fed 547.1 mg/kg diet.The activity of TSOD in serum decreased with the increase of vitamin C level,but the serum GSH-PX activity was positively correlated with dietary vitamin C.Fish fed 89.6 to 547.1 mg/kg diet had lower MDA contents in the liver andse rum.It was concluded that the vitamin C addition of 132.4 mg/kg in the feed could meet the basic requirements of the yellow drum Nibea albiflora,but the better antioxidant performance was obtained when the vitamin C addition was increased to 547.1 mg/kg.

Nibea albiflora;vitamin C;antioxidant enzymes;body composition

S963.71

A

1008－830X(2016)06－0472－06

2016-09-10

浙江省科技厅协同创新项目（2016F50038）；舟山市科技局项目（2015C31010）；浙江海洋大学博士启动金项目（2014Q1434）

陈东星（1991-），男，甘肃兰州人，硕士研究生，研究方向：安全养殖技术.E-mail:cdx1118@yeah.net

楼宝（1969-），男，浙江义乌人，教授，研究方向：海水鱼类繁殖及遗传育种.E-mail:loubao6577@163.com