OCT4及BIM蛋白在卵巢浆液性肿瘤中的表达及其相关性研究

张永琦　王　敏　朱艳丽　史　聪　闫效宇　卓玉莲

110004 中国医科大学附属盛京医院



OCT4及BIM蛋白在卵巢浆液性肿瘤中的表达及其相关性研究

张永琦王敏朱艳丽史聪闫效宇卓玉莲

110004 中国医科大学附属盛京医院

【摘要】目的研究OCT4及Bim蛋白在卵巢浆液性肿瘤中的表达及其相关性，并探讨两者在化疗耐药中的影响。方法采用免疫组化sp法，对67例卵巢浆液性囊腺癌(化疗耐药30例，敏感37例)、卵巢浆液性囊腺瘤石蜡标本10例、卵巢交界性浆液性囊腺瘤者石蜡标本10例及正常卵巢组织石蜡标本10例，进行OCT4及Bim蛋白表达情况检测。结果OCT4蛋白阳性表达率在恶性、交界性、良性、正常组织中依次递减，差异有统计学意义(P=0.002)；在耐药组与敏感组阳性表达率分别为83.33%和45.95%,差异有统计学意义(P=0.002)。Bim蛋白阳性表达率在恶性、交界性、良性、正常组织中依次递增，差异有统计学意义(P=0.002)；在耐药组与敏感组阳性表达率分别为43.33%和70.27%,差异有统计学意义(P=0.026)。在化疗耐药卵巢浆液性癌中，OCT4蛋白与Bim蛋白表达无明显相关性(γ=0.03;P=0.875)；在化疗敏感卵巢浆液性癌中，OCT4蛋白与Bim蛋白表达亦无明显相关性(γ=0.006;P=0.97)。OCT4蛋白与Bim蛋白表达与卵巢浆液性癌的发展呈负相关(P<0.01)。OCT4蛋白与Bim蛋白与卵巢浆液性癌临床病理因素无关。结论OCT4及Bim蛋白与卵巢浆液性癌的发生与发展有关.OCT4蛋白与Bim蛋白表达在卵巢浆液性癌的发展呈负相关。OCT4与Bim蛋白在卵巢浆液性肿瘤的发生、发展相互作用。OCT4基因高表达，Bim基因低表达可能是造成卵巢浆液性癌对紫杉醇+铂类化疗耐药的因素之一。

【关键词】OCT4;Bim;免疫组化；卵巢癌;化疗;耐药;敏感

(ThePracticalJournalofCancer,2016,31:723～726)

卵巢癌是妇科常见的恶性肿瘤,死亡率居妇科恶性肿瘤之首。化疗是治疗卵巢癌重要手段之一,患者在预后方面主要取决于对化疗的敏感性。但是由于原发性与继发性耐药的关系，化疗耐药是成为卵巢癌治愈率的关键因素。

OCT4是1种全能性或多能性干细胞标记物，与多种肿瘤的形成与发展及化疗耐药相关。相关研究表明，在卵巢癌的发展机制中OCT4基因是一影响因素。Bim是Bel-2家族中仅含有一个BH3结构域的蛋白，广泛分布在机体各种组织，对防御自身免疫、维持造血细胞稳态有重要意义，并具有肿瘤抑制因子活性[1]近年研究发现，OCT4基因在多种恶性上皮性肿瘤高表达，并与恶性肿瘤的发生、发展和预后呈高度正相关[2-7]。Bim基因具有助凋亡活性，对防御自身免疫、维持造血细胞稳态有重要意义，并具有肿瘤抑制因子活性。有研究显示在Bim蛋白表达的改变促使多种癌症的发生[8-9]。本研究采用免疫组织化学方法(S-P免疫组化法)，检测OCT4、Bim蛋白在卵巢浆液性肿瘤中的表达，讨论OCT4及Bim蛋白与卵巢浆液性肿瘤的发生与发展之间的关系。通过研究我们可以控制OCT4、Bim蛋白的表达情况，将对卵巢癌治疗有重要意义。

1材料与方法

1.1资料来源

选择于2004年1月至2010年10月期间在中国医科大学附属盛京医院妇科行卵巢癌分期术或肿瘤细胞减灭术的卵巢浆液性囊腺癌初发患者手术的石蜡标本共90例，经病理学检查确诊、经随访后，确定术后TP化疗最少6次且化疗期间未使用其它化疗药物或放疗的患者，排除不符合条件者，术后单纯行紫杉醇+铂类方案化疗最少6次者为67例，23例不符合条件排除。67例患者根据2011年版美国NCCN分为化疗敏感组37例，化疗耐药组30例。同时选取卵巢浆液性囊腺瘤石蜡标本10例、卵巢交界性浆液性囊腺瘤者石蜡标本10例及正常卵巢组织石蜡标本10例。入选的患者年龄、 肿瘤大小、 位置差异无统计学意义(P<0.05)。

1.2试剂和仪器

兔抗人OCT4多克隆抗体、兔抗人AKT1多克隆抗体 (北京博奥森生物) ； SP免疫组化检测试剂盒及DAB显色试剂盒 (北京中杉金桥) ； PBS缓冲液 (武汉博士得) ； 其他试剂及仪器由本院中心实验室提供。

1.3方法

采用免疫组化SP法，严格按照SP试剂盒说明书进行。每批实验中均按比例选择每组切片，每批均设对照组。用PBS代替一抗作为阴性对照。DAB 显色后用苏木精复染，中性树胶封固后镜检。

1.4判断标准

OCT4蛋白主要表达于细胞核和细胞质内。Bim蛋白主要表达于细胞质内。以出现棕黄色或棕褐色颗粒为阳性染色。按半定量积分法判断蛋白表达。按染色强度评分： 0分为无色，1分为淡黄色，2分为棕黄色，3分为棕褐色。根据阳性细胞百分率评分： 0分为无阳性细胞，1分为阳性细胞数≤10%，2分为阳性细胞数>10%～50%，3分为>50%～75%，4分为>75%。上述两项评分≤3为阴性，>3为阳性。

1.5统计学分析

应用SPSS 17.0软件对数据进行统计，采用χ2检验、 Spearman 等级相关分析。P<0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1不同卵巢组织中OCT4蛋白和Bim蛋白的表达情况

OCT4蛋白阳性表达率在恶性、交界性、良性、正常组织中依次递减，差异有统计学意义(P=0.002)；在耐药组与敏感组其阳性表达率分别为83.33%和45.95%,差异有统计学意义(P=0.002)。Bim蛋白阳性表达率在恶性、交界性、良性、正常组织中依次递增，差异有统计学意义(P=0.002)；在耐药组与敏感组其阳性表达率分别为40.33%和70.27%,差异有统计学意义(P=0.026)，见表1。OCT4与Bim蛋白在正常卵巢、浆液性囊腺瘤、交界性浆液性囊瘤、浆液性囊腺癌中的表达呈负相关性(γ=-1.7，P<0.05)，差异有统计学意义。

表1　不同卵巢组织中OCT4蛋白和Bim蛋白的

2.2OCT4与Bim蛋白在卵巢浆液性腺癌化疗耐药和化疗敏感组织中的相关性

对耐药组与敏感组免疫组织化学结果进行半定量分析积分，绘制出OCT4与Bim蛋白之间的散点图,并进行 Spearman 等级相关分析，两组比较差异无统计学意义(P>0.05)，在化疗耐药卵巢浆液性癌中，OCT4蛋白与Bim蛋白表达无明显相关性(γ=0.03;P=0.875)；在化疗敏感卵巢浆液性癌中，OCT4蛋白与Bim蛋白表达亦无明显相关性(γ=0.006;P=0.97)，见图1～3。

2.3OCT4蛋白和Bim蛋白与卵巢浆液性腺癌临床病理特征的关系

OCT4蛋白与Bim蛋白在卵巢浆液性腺癌的临床病理特征无明显相关 (P>0.05)，见表2。

表2　OCT4及Bim 蛋白与卵巢浆液性癌临床病理学特征的关系/例

图1　OCT4、Bim蛋白在正常卵巢、浆液性囊腺瘤、交界性浆

图2　OCT4与Bim蛋白在卵巢浆液性癌化疗

3讨论

OCT4是1种全能或多能性干细胞标记物，属于V

图3　OCT4与Bim蛋白在卵巢浆液性癌化疗

类蛋白。OCT4 蛋白定位于胚胎细胞和胚泡的细胞核内，在维持干细胞的多能性以及自我更新能力上起到重要作用[10]。研究表明，OCT4具有双重调节作用，既能维持干细胞的未分化状态，又能控制干细胞向某一种细胞类型分化。OCT4是1种全能性或多能性干细胞标记物，与多种肿瘤的形成与发展及化疗耐药相关。OCT4促进癌细胞生长、增值的机制可能是通过激活PI3K通路完成的[11]。PI3K通调控肿瘤生长的关键分子[12]。Bim 是1种重要的凋亡调节蛋白,在造血细胞的内环境稳定、 防止自身免疫及肿瘤的发生中有着重要的作用。一定的凋亡刺激能通过各种信号途径激活Bim分子,活化的 Bim 分子通过与 Bcl-2/Bax 的相互作用激活 Bax,引起细胞凋亡[13-15].Bim蛋白是PI3K/AKT信号转导通路中最重要的蛋白。AKT分子包含pH结构域、 中心催化结构域和羧基端调AKT1是AKT的亚型之一，定位于染色体14q32，具有广泛组织分布性，能在胚胎发育和生长方面起决定性作用[16]。激活的AKT能对其下游多种底物进行调控，主要发挥抑制凋亡的作用，进而促进耐药性的产生[17]。近年研究的表明，它在血管再生、 新陈代谢、 肿瘤迁移中的作用逐步被发现[18]。

本研究发现OCT4基因为癌基因，Bim基因为抑癌基因。OCT4与Bim蛋白在卵巢浆液性肿瘤的发生、发展中成负相关。说明在OCT4与Bim蛋白表达通路上，存在某一基因共同调节它们的表达。为临床预测和防止肿瘤的发生提供依据。OCT4基因高表达，Bim基因低表达可能是造成卵巢浆液性癌对紫杉醇+铂类化疗耐药的因素之一，为临床耐药性提供预测指标。

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(编辑：吴小红)

Studying of the Expression of OCT4 and BIM Protein in Ovarian Cancer and Their Correlation

ZHANGYongqi,WANGMin,ZHUYanli,etal.

ShengjingHospitalofChinaMedicalUniversity,Shenyang,110004

【Abstract】ObjectiveTo study the expression of the OCT4 and BIM protein in ovarian cancer and their relation，and to explore its effect on the chemotherapy drug resistance.MethodsOCT4 and BIM protein expression of 67 cases of ovarian serous cystadenocarcinoma(chemotherapy drug resistance 30 cases,sensitive 37 cases)and 10 cases of ovarian serous cystic adenoma paraffin specimens,10 cases of ovarian serous border pouch adenoma paraffin specimens and 10 cases of normal ovarian tissue paraffin specimens were det ected.ResultsThe positive expression rate of OCT4 protein decreased progressively in ovarian serous tumors,the junction of ovarian serous tumors,benign ovarian tissues,and normal ovarian tissues,the difference was statistically significant(P=0.002);The positive expression rates of OCT4 protein in the resistant group and sensitive group were 83.33% and 45.95%,respectively,the difference was statistically significant(P=0.002).The positive expression rate of BIM protein increased progressively in ovarian serous tumors,the junction of ovarian serous tumors,benign ovarian tissues,and normal ovarian tissues,the difference was statistically significant(P=0.002).In the resistant group and sensitive group,the positive expression rate of BIM protein were 43.33% and 70.27%,respectively,the difference was statistically significant(P=0.026).In the chemotherapy drug-resistant ovarian serous carcinoma,OCT4 protein expression had no significant correlation with Bim protein expression(γ=0.03;P=0.875);In chemotherapy sensitive ovarian serous carcinoma,OCT4 protein expression and Bim protein expression had no obvious correlation(γ=0.006;P=0.97).OCT4 protein expression and Bim protein expression in ovarian serous carcinoma had negative correlation(P<0.01).OCT4 and Bim protein expression had no correlation with clinical factors.ConclusionOCT4 and BIM protein expression are associated with the occurrence and development of ovarian serous carcinoma.Bim and OCT4 protein expression are negatively correlated with the development of ovarian serous carcinoma.OCT4 and Bim protein expression are interacted in ovarian serous tumor occurrence and development.High OCT4 gene expression and low Bim gene expression may be factor of resistance of ovarian serous carcinoma to paclitaxel plus platinum chemotherapy.

【Key words】OCT4;Bim;Immunohistochemical;Ovarian cancer;Chemotherapy;Drug resistance;Sensitive

DOI：10.3969/j.issn.1001-5930.2016.05.008

中图分类号：R737.31

文献标识码：A

文章编号：1001-5930(2016)05-0723-04

(收稿日期2015-07-15修回日期 2016-01-05)