藿芪灌注液局部刺激性试验

王东升+张世栋+苗小楼+董书伟+魏立琴+邝晓娇+那立冬+闫宝琪+严作廷

摘要：为了评价藿芪灌注液的刺激性，为临床安全用药提供依据，采用眼睛刺激性和阴道黏膜刺激性试验进行局部刺激性研究。眼睛刺激性试验选择家兔5只，以左眼为对照结膜囊内滴入生理盐水0.1 mL，右眼结膜囊内滴入藿芪灌注液0.1 mL，给药后观察7 d，考察藿芪灌注液对家兔眼睛的刺激性。阴道黏膜刺激性试验选择家兔10只，随机分为试验组和对照组，试验组家兔阴道灌注藿芪灌注液2 mL，对照组家兔阴道灌注生理盐水2 mL，给药后24 h处死家兔，对家兔阴道进行病理组织学检查，评价其对家兔阴道黏膜的刺激性。结果表明，藿芪灌注液对家兔眼睛和阴道黏膜无刺激性，说明藿芪灌注液无刺激性。

关键词：藿芪灌注液；刺激性；阴道；眼睛；家兔

中图分类号： S858.237.2

文献标志码： A

文章编号：1002-1302（2016）04-0303-02

不孕症是奶牛常见的四大疾病之一，由卵巢疾病引起的不孕症占35%～55%[1]，有些地区高达78.5%，而且57.3%为持久黄体和卵巢静止[2]。近年来，奶牛不孕症尤其是由卵巢疾病引起的不孕症的发病率呈上升趋势[3-4]。奶牛卵巢疾病常引起奶牛受胎率下降，造成的经济损失巨大[5]。目前，治疗奶牛卵巢疾病引起的不孕症主要以激素为主，中药具有疗效确切、无残留、毒副作用小等优点，对卵巢性不孕症的疗效好，值得开发利用[6]，虽然我国学者已研制出许多中药制剂，但广泛用于兽医临床的却甚少[7-9]。藿芪灌注液，别称催情助孕液，是由淫羊藿、阳起石、丹参等中药组成的子宫灌注剂，临床上主要用于治疗奶牛卵巢静止和持久黄体。研究表明，该制剂工艺稳定[10]，能提高雌性小鼠机体雌激素水平和雌孕激素受体基因的表达量，能增强动物发情调节作用[11]。为了研究制剂的局部刺激性，进行藿芪灌注液的家兔眼睛和阴道黏膜刺激性试验，为该制剂在临床上的安全应用奠定基础。

1 材料与方法

1.1 试验动物

健康新西兰家兔，15只，无任何眼部疾病，体质量1.7～2.3 kg，由中牧实业股份有限公司兰州生物制药厂提供。

1.2 试验药品

藿芪灌注液，北京中农劲腾生物技术有限公司生产的中试产品，规格为1 mL相当于原生药1 g，批号为20121001。

1.3 试验方法

1.3.1 眼睛刺激性试验 选取眼睛无异常的家兔5只，右眼结膜囊内滴入0.1 mL藿芪灌注液，左眼结膜囊内滴入 0.1 mL 生理盐水作为对照，轻轻拉动下眼睑，使药液与眼球充分接触8～10 s，于滴眼前和滴眼后30、60、90、120 min，24、48 h和第7天，观察记录双眼的局部反应情况，主要观察家兔双眼角膜是否混浊，虹膜有无充血、出血和肿胀，瞳孔对光有无反应，结膜有无充血、水肿和流分泌物等。按眼刺激反应评分标准对角膜、虹膜及结膜分别进行评分，总和作为综合评分，计算平均值，对家兔的左右眼评分进行比较，按眼刺激性评价标准作出判定。即0～3.9分为无刺激性，4～8.9分为轻度刺激性，9～12.9分为中度刺激性，13～16分为强度刺激性[12]（表1）。

1.3.2 阴道黏膜刺激性试验 参照文献[13]方法。试验前先检查家兔阴道口有无充血、水肿、炎症、分泌物或其他损伤，选取阴道无异常雌性家兔10只，随机分为2组，每组5只。试验组将2 mL藿芪灌注液轻轻注入家兔阴道内，保持家兔倒立5 min，使药液与阴道黏膜充分接触；对照组同法灌注生理盐水。24 h后处死家兔，取出阴道组织，观察黏膜有无充血、出血、红肿等现象，将阴道组织在10%福尔马林中固定，做石蜡切片，HE染色，进行病理组织学检查。

2 结果与分析

2.1 眼睛刺激性试验

从表1可见，给药后30、60、90 min家兔眼刺激性反应得分右眼分别为0.6、0.4、0.2，左眼分别为0.4、0.2、0，左、右眼分别在60、90 min内结膜有轻微充血现象，120 min 内恢复正常，按眼刺激性评价标准，藿芪灌注液对家兔眼睛无刺激性。

2.2 阴道黏膜刺激性试验

24 h后处死家兔，取出阴道组织观察，结果黏膜无充血、出血、红肿等现象。阴道组织病理学检查，黏膜上皮完整，黏膜层、肌层结构清晰，上皮细胞形态正常，无炎性细胞浸润，血管无充血和水肿，表明藿芪灌注液对家兔阴道黏膜无刺激性（图1至图4）。

3 结论与讨论

藿芪灌注液对家兔眼睛刺激性和阴道黏膜刺激性试验表明，藿芪灌注液无刺激性。刺激性是非口服给药制剂对给药部位产生的炎症反应或组织损伤。局部刺激性试验是考察动物的血管、肌肉、皮肤、黏膜等部位接触受试物后是否引起红肿、充血、渗出、变性或坏死等局部反应。目前，国际上最常用的家兔眼刺激性试验为Draize眼部刺激试验法，常以此为基础进行单次、多次和持续性刺激试验，以便全面研究滴眼剂等制剂的刺激性[14]。为此，本试验先进行了家兔的眼刺激性试验，通过对试验家兔7 d的观察和综合评分表明，藿芪灌注液对家兔眼睛无刺激性。阴道黏膜既是一道抵御病菌感染的天然屏障，又是长期与细菌、病毒等接触而成为多种致病因素进入体内的部位，通过阴道刺激性试验，对与阴道黏膜接触的物品进行安全性检验极其重要[15]。家兔阴道对刺激的敏感性高，符合安全性评价的试验目的，也是美国食品药品管理局确定的阴道刺激性试验的试验动物，而且操作相对简便、经济。试验中应以组织病理学检查结果为主要诊断依据进行综合判断。藿芪灌注液的给药方式是子宫灌注，子宫内膜是由黏膜组织构成的。因此，本试验在对家兔眼睛刺激性试验研究的基础上，利用阴道黏膜刺激性试验进一步评价藿芪灌注液的刺激性，考察阴道黏膜接触藿芪灌注液后黏膜的充血、炎症反应等情况，结果藿芪灌注液对家兔阴道黏膜无刺激性，这为该制剂的临床安全应用提供了依据。

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