不同产地黄芪药材中毛蕊异黄酮葡萄糖苷含量的比较

滕红梅+昝亚玲+贾鹏+王玲丽+房敏峰+胡正海

摘要：通过高效液相色谱法（HPLC）测定不同产地黄芪药材中毛蕊异黄酮葡萄糖苷含量，以期为黄芪药材质量评定提供依据。采用Waters Symmetry C18 色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm ），流动相为乙腈-水（81 ∶19），流速：1.0 mL/min，柱温：30 ℃，进样量10 μL，检测波长260 nm。结果表明：毛蕊异黄酮葡萄糖苷的浓度在0.145 6～0.698 7 mg/mL 范围内与峰面积呈良好的线性关系，r=0.999 7，平均加样回收率为100.35%，RSD为1.98%，所建方法快速、简便、重现性好。4个省份16个产地药材中毛蕊异黄酮葡萄糖苷的含量差异较大，其中内蒙古自治区包头市所产黄芪中其含量最高。从各地平均值看，内蒙古自治区>山西省>甘肃省>黑龙江省，且内蒙古自治区与其他3个省份药材中毛蕊异黄酮葡萄糖苷含量差异显著。省内之间的差异显著性结果表明，内蒙自治区和山西省产地之间差异较大，甘肃省和黑龙江省产地之间差异较小。

关键词：黄芪；毛蕊异黄酮葡萄糖苷；HPLC

中图分类号： S567.01

文献标志码： A

文章编号：1002-1302（2016）04-0226-03

黄芪为著名滋补中药，是豆科植物蒙古黄芪[Astragalus membranaceus （Fisch.） Bge. var. mongholicus （Bge.） Hsiao]或膜荚黄芪[Astragalus membranaceus （Fisch.） Bge.]的干燥根。现代药理研究表明：黄芪具有敛疮生肌、延缓衰老、增强机体免疫等功能[1]。诸多研究证明，黄酮类作为黄芪中的主要成分之一，其抗炎、抗病毒、调节免疫等多方面的药理作用非常显著[2-6]。毛蕊异黄酮葡萄糖苷作为黄芪药材中黄酮类的主要成分，已被2010版《中国药典》作为黄芪药材的指标性成分[1]。

黄芪分布于华北、东北及西北地区。目前市场上的黄芪药材产地较广，品质差异较大[7-8]。本研究通过对黄芪4个主产省份山西省、内蒙自治区、黑龙江省、甘肃省16个不同产地药材中的毛蕊异黄酮葡萄糖苷进行测定，并运用SSR法比较不同产地黄芪药材中毛蕊异黄酮葡萄糖苷含量的差异大小，研究结果可为黄芪药材的品质评价提供基础和依据。

1 仪器、材料和试剂

1.1 仪器

Waters 2695高效液相色谱仪、2998 PDA检测器、RE-52AA 系列旋转蒸发器、KQ3200DE型数控超声波清洗器、SHZ-DIII循环水式多用真空泵、FZ102微型植物试样粉碎机、FA1004电子天平、DK-S24电热恒温水浴锅、GF-101型电热鼓风干燥箱。

1.2 材料

黄芪药材分别购于山西省、内蒙自治区、黑龙江省、甘肃省等当地药材市场，共4个省16个不同产地的黄芪，经运城学院滕红梅教授认定均为黄芪药材。将药材置于40 ℃电热鼓风干燥箱进行干燥，研成粉末过60目筛保存以备用。

1.3 试剂

毛蕊异黄酮葡萄糖苷对照品（购自中国药品生物制品检定所，批号：20141109）；水为二次重蒸水，甲醇和乙腈为色谱纯。

2 方法与结果

2.1 黄芪中毛蕊异黄酮葡萄糖苷测定方法的建立

2.1.1 色谱条件 Waters公司Symmetry C18 色谱柱 （250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相水-乙腈（81 ∶19）；柱温，30 ℃；流速，1.0 mL/min；检测波长，260 nm；进样量10 μL。色谱图见图1。

2.1.2 对照品溶液的制备 精确称取毛蕊异黄酮葡萄糖苷对照品6.950 mg置10 mL容量瓶中。加甲醇溶解、摇匀，即得。

2.1.3 供试品溶液的制备 将精确称取的2 g黄芪粉末置于具塞锥形瓶中，加入甲醇50 mL，于80 ℃水浴锅中加热回流4 h，待放凉后再摇匀过滤，滤渣用10 mL甲醇洗涤2～3次，之后将原液与洗涤液合并，减压回收溶剂后将残渣加甲醇溶解，再转移至5 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀后用微孔滤膜过滤，即得到供试品溶液。

2.1.4 标准曲线的绘制 吸取毛蕊异黄酮苷对照品溶液 1 000 μL，加入滤过的甲醇2 000 μL，再用微孔滤膜滤过，置于样品瓶中。按“2.1.1”节的色谱条件分别进样2、4、6、8、10 μL，以进样量为横坐标，峰面积为纵坐标绘制标准曲线，结果发现，在浓度范围内，标准品浓度与其峰面积呈现良好的线性关系。线性回归方程为y=3.80×107 x+1.06×106，r=0.999 7，线性范围0.145 6～0.698 7 mg/mL。

2.1.5 精密度试验 精确吸取山西省浑源市同一供试品溶液重复进样5次，测得毛蕊异黄酮葡萄糖苷峰面积的RSD为0.46%。

2.1.6 稳定性试验 取山西省浑源市同一供试品溶液，分别在0、2、4、8、16、24 h检测，显示毛蕊异黄酮葡萄糖苷峰面积的RSD为1.20%。

2.1.7 重现性试验 准确称取产自山西省浑源市的药材粉末平行样品5份，按“2.1.3”节的制备方法操作，显示毛蕊异黄酮葡萄糖苷峰面积的RSD为1.67%，平均含量为 0.234 mg/g，表明本法重现性良好。

2.1.8 回收率试验 称取含量已知的同一批样品5份，每份约0.5 g，依次加入浓度为0.133 mg/mL的毛蕊异黄酮葡萄糖苷对照品溶液4 mL。按“2.1.3”节方法配制样品溶液，并于“2.1.1”节色谱条件下进样，根据测量结果计算出各对照品的平均加样回收率。计算所得回收率为100.35%，RSD为 1.98%。

2.1.9 样品含量测定 精确量取样品溶液按照“2.1.1”节的色谱条件测定其峰面积，根据“2.1.2”节得出的回归方程计算不同产地黄芪毛蕊异黄酮葡萄糖苷的含量。

2.2 试验结果

2.2.1 不同产地黄芪药材毛蕊异黄酮葡萄糖苷含量比较 由表1可见，4省份16个不同产地的黄芪药材中内蒙古自治区包头市的毛蕊异黄酮葡萄糖苷含量最高，为 1.312 mg/g，山西省安泽市黄芪中含量最少，为 0.230 mg/g，包头市药材的含量是安泽市药材的5.7倍，差别较为悬殊。含量最少的安泽黄芪中毛蕊异黄酮葡萄糖苷含量也是《中国药典》中规定最低含量0.020%的10倍以上。

2.2.2 SSR法分析不同产地黄芪中毛蕊异黄酮葡萄糖苷含量差异 由图2可以看出，内蒙古自治区来源药材的毛蕊异黄酮葡萄糖苷平均含量最高，甘肃省药材含量最低，4个省份来源药材结果为：内蒙古自治区>山西省>甘肃省>黑龙江省，其含量平均值依次为：0.690、0.361、0.300、0.273 mg/g。运用DPS软件中SSR法分析4个省份不同产地黄芪药材中毛蕊异黄酮葡萄糖苷的差异，结果表明：内蒙古自治区来源药材和其他3个省份之间差异显著（P<0.05），其3个省份之间含量相对接近，山西省和黑龙江省间差异显著，山西省和甘肃省、甘肃省和黑龙江省间差异不显著。

由图3可以看出，内蒙古自治区的4个产地来源中，包头市药材含量最高，呼伦贝尔市药材含量最低：包头市和呼和浩特市与其他产地差异呈显著水平，赤峰市和呼伦贝尔市差异不显著。

由图4可以看出，在山西4个产地中，安泽的含量最低，应县的含量最高，表明不同产地药材的毛蕊异黄酮葡萄糖苷含量差异较为显著。

由图5可以看出，在甘肃的5个产地中，渭源的含量最低，宕昌的含量最高。宕昌与甘肃其他产地黄芪中毛蕊异黄酮葡萄糖苷的含量差异显著，其他几个产地的含量接近。

由图6可以看出，黑龙江的3个产地中大兴安岭和长白山、哈尔滨来源的药材差异呈显著水平，长白山和哈尔滨来源的药材差异不显著。

3 结论

毛蕊异黄酮葡萄糖苷已经被《中国药典》作为衡量黄芪质量优劣的一个标志性成分。当前，市场上的黄芪药材产地较为混杂，主要来源地有山西、内蒙古、甘肃及黑龙江等。本试验对4个黄芪主产省份16个产地的研究结果表明：产地不同黄芪中毛蕊异黄酮葡萄糖苷的含量差异明显，这一研究结果与刘杨等[7]及黄志勤等[9]对河北、河南、山西、内蒙古等地黄芪药材的研究结论相似，揭示毛蕊异黄酮葡萄糖苷含量差异是造成各地黄芪药材品质不同的主要原因之一。

4个黄芪主产省份中，内蒙古、山西、甘肃黄芪中毛蕊异黄酮葡萄糖苷含量整体较高，黑龙江平均含量较低，这与黄芪的道地产区为山西、内蒙古和甘肃的传统观念相符。 4个省份不同产地的黄芪中毛蕊异黄酮葡萄糖苷的差异显著性结果表明，山西和内蒙两省份内产地之间差异较大，甘肃和黑龙江两省份内产地之间差异较小。内蒙古包头和自治区内其他3个产地之间的含量相差悬殊。说明同为道地产区，黄芪药材中的黄酮类有效成分含量差异较大，启示我们评价药材不能笼统以道地产区而论，要客观评价药材的品质，需要科学合理地制定较为系统化的评价体系。

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