芩榆散的抑菌试验研究

朱广双， 季慕寅， 萧 晟， 王本忠， 张海燕

(芜湖职业技术学院生物工程学院，安徽芜湖 241003)



芩榆散的抑菌试验研究

朱广双， 季慕寅， 萧 晟， 王本忠， 张海燕

(芜湖职业技术学院生物工程学院，安徽芜湖 241003)

摘要[目的]研究芩榆散防治畜禽腹泻的机理。[方法]分组测定芩榆散及其各组方药对猪大肠杆菌、鸡大肠杆菌和鸡沙门氏菌3种细菌的体外抑菌效果，测定芩榆散对3种细菌的最小抑菌浓度(MIC)。[结果]芩榆散对3种细菌的平均抑菌圈直径为16.2～16.7 mm，方剂中的4味单方药对3种细菌的平均抑菌圈直径为8.4～9.6 mm，芩榆散对猪大肠杆菌、鸡大肠杆菌、鸡沙门氏菌的MIC均为7.8 mg/mL。[结论]芩榆散对3种细菌高度敏感，抑菌效果优于其组方药。

关键词芩榆散；腹泻；最小抑菌浓度；抑菌圈

大肠杆菌和沙门氏菌是引起畜禽腹泻的主要病原菌[1-2]，其防治手段主要是使用抗菌化学药物和抗生素，但耐药性问题使其疗效每况愈下。畜禽产品无公害化生产的要求，使抗生素的选择范围越来越小，而中药治疗效果受菌株耐药性的影响较小，且毒副作用小，几乎无残留[3]，因此研究中药防治大肠杆菌病、沙门氏菌病具有重要的现实意义。目前，关于单药的体外抑菌试验研究较多[4-7]，复方制剂黄连解毒散、白头翁散等对大肠杆菌、沙门氏菌等具有较好的治疗作用[6]，鉴于上述2个方剂组方药材较贵重，该试验选用黄芩、地榆、地锦草、老鹳草等价格低廉的中药组方为芩榆散，测定了芩榆散对猪大肠杆菌、鸡大肠杆菌和鸡沙门氏菌的体外抑菌作用和最小抑菌浓度(MIC)，旨在研究芩榆散防治畜禽腹泻的机理。

1材料与方法

1.1材料

1.1.1培养基。普通营养肉汤、普通营养琼脂按参考文献[8]制备后，4 ℃保存备用。

1.1.2中药。芩榆散汤剂，由正大(芜湖)有限公司提供，4 ℃保存备用。芩榆散的4味组方药如黄芩、地锦草、老鹳草、地榆，用去离子水煎煮2次，合并煎液，纱布过滤，滤液加热浓缩至含生药2 g/mL，100 ℃灭菌30 min，4 ℃保存备用。

1.1.3受试菌株。猪大肠杆菌(EscherichiacoliCVCC1521)、鸡大肠杆菌(O1)C83845株、鸡沙门氏菌(SalmonellagallinarumCVCC533)，均购自中国兽医药品监察所。

1.2抑菌试验方法取猪大肠杆菌、鸡大肠杆菌、鸡沙门氏菌菌株分别接种于普通营养肉汤，37 ℃培养24 h复壮，经预试验测定，稀释倍数分别为猪大肠杆菌1 200倍、鸡大肠杆菌700倍、鸡沙门氏菌600倍，稀释后，吸取200 μL于普通营养琼脂平板内，用“L”形涂布棒涂匀。用直径6 mm的打孔器在平板上打孔，酒精灯加热封底，孔内注满药液，每种药液重复6孔，对照孔注满生理盐水。37 ℃培养18 h后测量抑菌圈直径，试验重复3次[8]，根据文献[9]的标准判定各药的抑菌作用，即抑菌圈直径<10 mm为低敏，10～15 mm为中敏，15 mm以上为高敏。

1.3最小抑菌浓度(MIC)的测定先将复方汤剂用营养肉汤倍比稀释成10种不同浓度，分别为2 000.0、1 000.0、500.0、250.0、125.0、62.5、31.3、15.7、7.8、3.9 mg/mL;然后分别按1∶9的比例加入到熔化的营养琼脂中，100 ℃灭菌30 min，待温度降至40～50 ℃时倒入灭菌平皿。平板凝固后放于37 ℃的恒温箱干燥1 h，用划线法接种各细菌种，37 ℃培养24 h后观察平板上的菌落数，同时设不接种任何细菌作阴性对照，同种处理重复4次，以培养基内无菌落生长的最低药物浓度为最小抑菌浓度(MIC)。

2结果与分析

2.1抑菌效果由表1可见，芩榆散对猪大肠杆菌、鸡大肠杆菌和鸡沙门氏菌3种细菌的平均抑菌圈直径为16.2～16.7 mm，差异不显著(P﹥0.05)，属高度敏感。芩榆散方剂中的4味单方药对3种细菌的平均抑菌圈直径为8.4～9.6 mm，属低度敏感。芩榆散对3种细菌的平均抑菌圈直径显著大于方剂中单方药对3种细菌的平均抑菌圈直径，差异显著(P<0.05)，各单方药间差异不显著(P>0.05)。

2.2最小抑菌浓度(MIC)从表2可看出，芩榆散对猪大肠杆菌、鸡大肠杆菌和鸡沙门氏菌的MIC均为7.8 mg/mL，差异不显著(P>0.05)。

表1　芩榆散应用于3种细菌的抑菌圈直径

注：同列数据上标不同字母表示处理间差异显著(P<0.05)。

Note：Different letters in the same column stand for significant difference(P<0.05).

表2芩榆散对3种细菌的最小抑菌浓度

Table 2Minimum inhibitory concentration of Qinyu powder against three bacterias

mg/mL

注：同行数据上标相同字母表示差异不显著(P﹥0.05)。

Note：The same letters in the same column stand for no significant difference(P>0.05).

3讨论与结论

按中兽医辨证理论，大肠杆菌病为湿热壅积肠道而引起的里热症，宜清热解毒、燥湿止痢。方剂中黄芩[10]、地锦草[11]、老鹳草[12]和地榆[13]对大肠杆菌、痢疾杆菌和葡萄球菌等多种细菌均有较好的抑制效果。该试验结果表明，芩榆散对3种供试菌株均有较强的抑制作用，属高度敏感，可能与其以清热燥湿药为主的组方有关。由各单味药组成的方剂芩榆散抑菌效果显著，平均抑菌圈直径>16.2 mm，这与配伍后方剂中各单味药物之间产生了协同作用，以及彼此间的溶出度、生物碱的相互影响等因素有关。芩榆散对猪大肠杆菌、鸡大肠杆菌、鸡沙门氏菌的MIC均为7.8 mg/mL，抑菌效果均较好，对3种细菌的抑菌效果差异不显著。王建国等[14]研究也发现，由地锦草、黄芩、苦参、苍术、陈皮组成的复方，不仅能降低鸡的发病率，同时能减少死亡，对人工感染大肠杆菌雏鸡具有显著的保护作用。

传统中药是通过改善、调节机体细胞功能缓解细胞损伤，而非如抗生素一样直接杀灭细菌，中国传统医学认为，中药的治疗机理一方面是药物直接抑制或杀灭病原体。王妮等[5]研究发现，由石榴皮、黄芩、紫苏、丹皮、金银花5味中草药制备的提取物在使用剂量达1.0 mL/kg时，能够直接抑制禽大肠杆菌，达到较好的治疗效果。另一方面是中药可调节机体阴阳平衡，提高机体免疫力和抵抗力，起到免疫调节作用，即所谓的扶正祛邪，最终达到疾病的康复[15]。香莲芪中药制剂能够调动机体免疫细胞，刺激脾淋巴细胞增殖，对抗大肠杆菌的入侵[6]。银翘天甘制剂增强了动物自体免疫防御系统，改善了动物生理机能，进而发挥抗病作用[7]。

总之，防治畜禽腹泻的关键在于 “养大于防，防大于治”。一旦发生腹泻，应首先对分离的致病菌株进行药敏试验，再选择对致病菌株敏感的药物进行治疗。该试验中芩榆散对3种受试菌株均有较强抑菌效果，高度敏感，可能是该药防治畜禽腹泻的机制之一，并可以作为临床畜禽腹泻疾病用药的依据。

参考文献

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Study on Antibacterial Test of Qinyu Powder

ZHU Guang-shuang,JI Mu-yin,XIAO Sheng et al

(College of Bioengineering,Wuhu Institute of Technology,Wuhu,Anhui 241003)

Abstract[Objective] The mechanism of prevention and control of livestock and poultry diarrhea by Qinyu powder was studied.[Method] The antibacterial effect of Qinyu powder and its component drugs on swine Escherichia coli,chicken Escherichia coli and Salmonella gallinarum in vitro were determined,then the minimum inhibitory concentration(MIC) of Qinyu powder was measured.[Result] The average inhibition of Qinyu powder and its component drugs on 3 kinds of bacteria in diameter were between 16.2-16.7 mm,8.4-9.6 mm respectively.MIC of Qinyu powder on swine E.coli, chicken E.coli, Salmonella gallinarum was 7.8 mg /mL.[Conclusion] The antibacterial effect of Qinyu powder on 3 kinds of bacteria are highly sensitive,which was better than that of component drugs.

Key wordsQinyu powder; Diarrhea; Minimal inhibitory concentration; Bacteriostasis

基金项目安徽省质量工程项目食品技术人才实训中心校企合作实践教育基地项目(2013sjjd036)。

作者简介朱广双(1975- )，男，安徽芜湖人，讲师，硕士，从事中兽医学研究。

收稿日期2016-03-12

中图分类号S 853.72

文献标识码A

文章编号0517-6611(2016)10-166-02