新疆昌吉地区规模化猪场猪瘟免疫抗体水平检测与分析

栾廷波伏寅峰，李蓓蓓（1．新疆农一师一团畜牧科，新疆　阿克苏　84000；.新疆生产建设兵团第七师16团，新疆　奎屯800；.石河子大学动物科技学院，新疆　石河子　8000）



新疆昌吉地区规模化猪场猪瘟免疫抗体水平检测与分析

栾廷波1，3，伏寅峰2，李蓓蓓3
（1．新疆农一师一团畜牧科，新疆阿克苏843000；2.新疆生产建设兵团第七师136团，新疆奎屯833200；3.石河子大学动物科技学院，新疆石河子832000）

摘要：为了掌握昌吉地区5个规模化猪场猪瘟免疫抗体水平的高低及消长规律，同时为养殖户提供一个科学合理的免疫程序，本试验选择昌吉地区5个规模化猪场，收集2012～2013年不同年龄阶段的猪血清共1 350份，采用间接ELISA方法检测其抗体水平并进行分析。经过对昌吉地区5个规模化猪场共1 350份血清采用间接ELISA方法进行了检测，结果总抗体阳性率为80.07%（1 081/1 350），平均抗体滴度为8log2，标准差为0.856。其中A、B、C、D、E 5个规模化猪场猪瘟抗体阳性率分别为92.22%、82.59%、74.44%、88.51%、62.59%，通过对不同阶段猪群抗体阳性率结果统计可知公猪、后备母猪、哺乳母猪、妊娠母猪、7日龄仔猪、14日龄仔猪、21日龄仔猪、30日龄仔猪、40日龄仔猪、55日龄仔猪等不同阶段猪群的血清抗体阳性率分别为92%、69%、86%、93%、72%、82%、88.67%、80.67%、72.66%、82.67%。结合检测结果、临床生产数据及猪场已采用CSF的免疫程序，建议试验区仔猪猪瘟免疫程序为23～25日龄进行首免疫，60日龄时进行第二次免疫，生产公、母猪每年春秋两秋各普免一次，经产母猪每次断奶前跟胎免疫一次。

关键字：猪瘟；ELISA；抗体水平

猪瘟（CSF）又称经典猪瘟，是由猪瘟病毒（CSFV）引起的一种的急性、烈性、高度接触性传染病，给我养猪业带来了极大的损失，该病具有流行广泛,发病率高,死亡率高等特点，由于其危害严重，所以该病历来是各国家关注的焦点，1984年世界动物卫生组织（OIE）将该病划分为A类传染病，我国作为养猪大国，同时也是猪瘟流行严重的国家之一［1-5］,猪瘟病毒目前已成为影响我国养猪业发展的主要传染病之一。

CSFV在潮湿环境和新鲜的肉食产品中都是非常稳定的［2-10］，但CSFV不耐热，56℃60 min或60℃10 min即可完全灭活病毒，该病在pH值为5～10范围内稳定，但在pH值低于3的环境下病毒力会下降，易被高温、高压、紫外线、乙醚、甲醛、来苏儿、烧碱所杀死杀死［3］。

新疆地广人稀，拥有丰富的土地资源，饲料种类广泛、产量充裕，养殖成本具有明显的优势。根据2004～2008年我国猪瘟国家强制免疫疾病的流行病学数据可知［11-12］，新疆是猪瘟严重流行区，猪瘟是我国农业部规定的必须强制免疫的疾病，但是由于新疆的养殖水平与养殖观念相对落后，疫苗免疫程序的不规范，导致该三种病在新疆时有散在的发生，专家推测该地区的流行之所以这么严重，主要跟以下三个原因：一是新疆地区最早为古老的放牧的方式，传统的养殖观念根深蒂固，同时新疆地广人稀，人们接受新理念的机会少，有的养猪场到现在为止还以十几年前的养殖观念在养猪。二是新疆和苏联蒙古国等邻近，由于我国建国以前，兽医管理制度不完善，人们的盲目引种，导致国外许多新的流行病毒株流入新疆。三是国内畜产品和畜禽交易频发，管理部门管理不严格，检疫检测技术落后，给该三种病制造了可乘之机。

为了解新疆昌吉地区部分规模化猪场猪瘟抗体水平的高低和消长规律，本研究以昌吉地区部分规模养猪场（母猪＞300头）为研究对象，采集不同阶段的猪群的血清，采用间接ELISA检测方法对血清抗体进行测定和分析。从而了解该地区猪瘟的抗体水平，为加强和改进免疫措施，有效防控三种疾病的流行，提高养殖效益提供了一定的科学依据。

1　材料与方法

1.1试剂与实验设备

武汉某动物生物制品公司生产的猪瘟病毒ELISA抗体检测试剂盒，预防兽医实验室提供自动酶标仪（美国BioTek仪器有限公司），微量移液器（eppendorf公司），恒温培养箱（北京市光明医疗仪器厂）,无菌操作台，振荡器，灭菌高压锅，高速离心机等实验所需仪器设备。

2　实验样品

2.1血清样品的准备

血清：由新疆昌吉地区A、B、C、D、E5个规模化猪场（种母猪＞300头）共采集血清数共1 350份，采集公猪血清共50份、后备母猪共200份、哺乳母猪共100份、妊娠母猪100份、7日龄仔猪150份、14日龄仔猪150份、21日龄仔猪150份、30日龄仔猪150份、40日龄仔猪150份、55日龄仔猪150份。

2.2样品采集时间、方法及样品储存

血清共分4次均等采集，分别为2012年7月、2012年10月、2013年1月、2013年4月；主要采集方法为前腔静脉采血法（对与成年猪只个别采取耳缘静脉采血），血液采集后用高速离心机提取血清即样品，置于- 20℃冰箱储存备用。

3　试验方法与判定

3.1血清稀释

样品：按照1:40的体积在血清稀释板进行稀释对照:按照1:40的体积分别将阳性对照和阴性对照稀释

3.2试验方法步骤

（1）加样取抗原包被板，将稀释好的样品血清和对照血清分别按照100 μL对应从稀释板转入抗原包被板中，待检样品每份加一个孔，对照样品每份加2个孔，在振荡器上微微振匀孔中的样品，然后置37℃温育30 min。

（2）洗板甩掉板孔中的溶液，每孔加入稀释好的洗涤液200 μL，静置3 min倒掉，再在吸水纸上拍干，共计洗涤5次。

（3）加酶每孔加羊抗猪酶标二抗100 μL，置37℃再温育30 min。

（4）洗涤同（2）。

（5）显色每个孔分别加入底物A和B（50 μL）混匀，室温避光显色10 min。

（6）终止反应加终止液50 μL利用酶标仪检测。

3.3结果判定

在酶标仪上测各孔的OD630nm值。试验成功的条件是阳性对照孔的平均OD630nm值均≥0.8，阴性对照孔的平均OD630nm值均＜0.3。

样品OD630nm值≥0.35，为阳性；样品OD630nm值＜0.35，为阴性。

4　数据处理与统计分析

用EXCEL软件进行原始数据处理，用SPSS11.5对试验数据进行t检验。

5　结果与分析

5.1各猪场CSF血清抗体水平

从表格可以看出（表2）：通过对昌吉地区5个规模化猪场共1350份血清的检测，结果阳性总数为1 081，阳性率为80.07%，平均OD值为1.121，标准差为0.856，其中A、B、C、D、E5个规模化猪场阳性率分别为92.2%、82.59%、74.44%、88.51%、62.59%、80.07%，各个规模化猪场之间阳性率差异均为极显著（P≤0.1），其中A场和D场差异不显著（P≥0.1）,B场和D场差异不显著（P≤0.1），其他之间差异均为显著（P≤0.5）。

通过统计可知，A、B、C、D、E各场的OD值分别1.215、0.901、1.115、1.254、0.904、总体OD值为1.121，其中A场和D场差异不显著（P≥0.1）,B场和D场差异不显著（P≥0.1），其他之间差异均为显著（P≤0.5）。

图1　昌吉地区5个规模化猪场各场CSF血清抗体阳性率

图2　昌吉地区5个规模化猪场各场CSF血清抗体平均OD值

5.2各猪场CSF不同血清抗体效价水平

从表格（表3）可以看出：抗体效价＜5log2血清数共269份，占总血清数的19.93%，抗体效价为5log2血清数共97份，占总血清数的7.2%，抗体效价为6log2血清数共169份，占总血清数的12.5%，抗体效价为7log2血清共289份，占总血清数的21.4%，抗体效价≥8log2血清数共526份，占总血清数的38.97%。

图3　不同抗体效价的样本数及所占比率统计表

5.3不同阶段猪群CSF血清抗体水平

从表格（表4）可以看出：公猪、后备母猪、哺乳母猪、妊娠母猪、7日龄仔猪、14日龄仔猪、21日龄仔猪、30日龄仔猪、40日龄仔猪、55日龄仔猪抗体阳性率分别为92%、69%、86%、93%、72%、82%、88.67%、80.67%、72.66、82.67%，通过统计可知各阶段的猪群抗体阳性率差异很大，阳性率最高为妊娠母猪和公猪，抗体阳性率最低为后备母猪和40日龄仔猪。从仔猪阳性率结果可以看出，仔猪在7日龄猪瘟抗体阳性率最低为72%，从7日龄到21日龄在逐渐升高，21日龄抗体阳性率最高为88.67%，30日龄抗体阳性率降到最低为72.66%。

表1　CSF血清抗体ELISA检测与HIA的转换

表2　昌吉地区5个规模化猪场各场CSF血清抗体水平及阳性率汇总表

表3　不同抗体效价的样本数及所占比率统计表

表4　昌吉地区5个规模化猪场不同阶段猪群CSF血清抗体水平及阳性率汇总表

图4　昌吉地区5个规模化猪场不同阶段猪群血清抗体阳性率

6　分析与讨论

6.1各猪场总体检测结果分析

从结果分析可知，昌吉地区5个规模化猪场共1 350份血清，阳性总数为1 081，该地区的总体阳性率为80.07%，平均OD值为1.121，标准差为0.856。与国家规定的70%水平对比相对较高，血清的整体效价较好，本次结果与马晓艳等2012年对新疆地区的猪瘟抗体合格率为75.3%结果相近，本次结果显示猪瘟抗体阳性率比张继红等2009利用猪瘟正向间接血凝试验对新疆地区12个地（州、市）采集的1 749份血清样品总体免疫合格率为71.3%较高。刘建营等（2012）对广东地区2012年猪瘟抗体水平进行了检测，结果显示广东地区猪瘟抗体阳性率为76.5%,程汉等（2012）对江苏泰州地区的猪瘟抗体水平进行检测，结果显示阳性率为79.3%。但是部分猪场猪瘟抗体阳性率低于70%，这与猪场防疫管理有不可推卸的责任，应加强猪瘟的免疫抗体水平监测。

图5　昌吉地区5个规模化猪场不同阶段猪群血清抗体平均OD值

6.2不同阶段仔猪CSF血清抗体阳性率水平分析

从上图（图6）我们可以看出：从仔猪阳性率结果可以看出，仔猪在7日龄猪瘟抗体阳性率最低为72%，从7日龄到21日龄在逐渐升高，21日龄抗体阳性率最高为88.67%，30日龄抗体阳性率降到最低为72.66%。这与曹建等（2012）用HIA法对仔猪母源抗体效价检测的结果15～21日龄达到最高值，21日龄后逐步降低，于35日龄达到抗体保护临界值基本相符，结合临床可知，哺乳初期抗体阳性率有所上升，与母乳中充足的母源抗体有直接关系，但随着日龄增大，仔猪抗体阳性率降低，断奶后抗体阳性率急剧降低，都是因为母源抗体摄入不足引起的。经过第一次免疫，仔猪猪瘟抗体阳性率在35～50日龄开始回升。因此在仔猪母源抗体摄入不足时及时进行免疫接种是必要的。

参考文献：

图6　不同阶段仔猪的CSF血清抗体水平分析

从试验结果来看，昌吉地区猪瘟免疫后保护力目前比较稳定，达到了国家规定要求，但是有个别猪场免疫效果不理想，这与不健全的防疫制度有很大的关系，通过现场调查可知：昌吉地区猪瘟首免日龄多数在30 d左右，二免日龄在60 d左右。部分猪场进行超前免疫，并于50日龄进行二免。

结合对本次实验结果的分析与国内外相关文献报道，对昌吉地区猪瘟免疫程序提出以下建议：后备公、母猪使用前进行两次猪瘟免疫接种，间隔一个月；生产公、母猪每年春秋两秋各普免一次；经产母猪每次断奶前跟胎免疫一次；仔猪23～25日龄进行首免疫，60日龄时进行第二次免疫。

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中图分类号：S852.65+1

文献标识码：A

文章编号：1006- 799X（2015）03- 0040- 04

作者简介：栾廷波（1984-），男，新疆阿拉尔人，助理兽医师，主要从事畜牧兽医工作。