天女木兰叶斑病病菌生物学特性研究

刘波

摘要：以天女木兰叶斑病病菌为试材，研究不同碳、氮源对天女木兰叶斑病病菌生长的影响；试验结果表明：适合菌丝生长碳源是乳糖与葡萄糖；适合菌丝生长的氮源是硝酸铵；最适合孢子萌发的碳源是葡萄糖；适合孢子萌发的氮源是硝酸铵；25℃适宜菌丝的生长，适宜孢子萌发的温度是20～25℃；全光适宜菌丝的生长和孢子萌发。适合菌丝的生长和孢子萌发PH8与PH7。

关键词：天女木兰，天女木兰叶斑病，生物学特性

天女木兰（Magnolia sieboldii）自然分布于长江以南和长城以北，是中国东北地区惟一的野生木兰属植物，近几年吉林省进行了人工栽培研究，发现了天女木兰叶斑病。天女木兰叶斑病发病初期，叶面产生暗红色点状斑点，当湿度适当时迅速扩展，病斑2～5厘米，可相连，叶片枯萎易脱落，经查该病害由交链孢属（Alternariasp.）引起，国内尚未报道。

1 材料与方法

1.1 供试材料：天女木兰叶斑病病菌由吉林农业科技学院植物病理实验室提供。

试验仪器：恒温培养箱、无菌操作台、高压灭菌锅、培养皿等。

供试碳源、氮源：葡萄糖、果糖、蔗糖、乳糖、麦芽糖；硝酸钙、硝酸铵、氯化铵、尿素、硝酸钾以上均为化学分析纯试剂，均由实验室提供。

0.1%NaOH溶液、0.1%HCl溶液、75%酒精等。

1.2 试验方法：在无菌条件下将天女木兰叶斑病病菌接种在经高温无菌操作的马铃薯半组合培养基为基础培养基（马铃薯200克、琼脂20克、葡萄糖20克、蒸餾水1000毫升）培养皿中，恒温25℃暗培养，取纯化良好的菌丝及孢子待用。

不同碳源与氮源对菌丝生长的影响研究。

碳源：分别以含碳量相等的葡萄糖、麦芽糖、乳糖、果糖和蔗糖做基础成分取代培养基中的葡萄糖的成分来配制培养基并分别标记好，每种处理4次重复。用无菌打孔器打取6毫米直径的菌饼接种后置于25℃恒温箱内暗培养，每24小时观察一次，利用“十”字交叉法定期测量菌落直径并记录。

氮源：分别以含氮量相等的硝酸铵、硝酸钙、氯化铵、尿素、硝酸钾添加到查氏培养基（磷酸氢二钾1.00克、硫酸镁0.50克、氯化钾0.50克、硫酸亚铁0.01克、蔗糖30.00克、琼脂20.00克和蒸馏水1升）为基础培养基的平板上培养基置换氮源并标记好，测量方法同上。

不同碳源与氮源对孢子生长的影响研究。

当菌种在培养基内长到一定时间可用显微镜观察，在产孢条件下对孢子萌发率的影响的试验；在预试条件下进行如下研究。碳源：用含碳量相同的葡萄糖、麦芽糖、乳糖、果糖、蔗糖为溶液并调匀作为碳源的孢子悬浮液，将等量孢子悬浮液放入其中，25℃恒温暗培养，按预试记录的孢子萌发的时间开始观察，并开始定时统计孢子萌发率，同时记录当有一处理接近或达到90%以上萌发时试验结束，共5组处理4次重复。

氮源：以葡萄糖为基础培养基，用含氮量相同的硝酸铵、硝酸钙、氯化铵、尿素、硝酸钾溶液并调匀作为氮源的孢子悬浮液，将等量孢子悬浮液放入其中，25℃恒温暗培养，测量不同氮源条件下孢子萌发率，共5个处理，重复4次测量方法同上。

不同温度对菌丝和孢子的影响研究。

以PDA培养基为基础材料，在无菌条件下，用已灭菌的直径为7毫米的打孔器打入先前培养好的病菌菌种，并将直径7毫米的菌丝片移入PDA培养基平板上中央处。然后分别培养于5℃、10℃、15℃、20℃、25℃、30℃、35℃的不同温度梯度里，培养3天后测量菌落形成的直径大小，共7个处理，每处理重复4次。配制以葡萄糖为溶液的孢子悬浮液，然后将适量的孢子悬浮液分装在灭完菌的培养皿中并盖上盖，分别放置在5℃、10℃、15℃、20℃、25℃、30℃、35℃不同温箱里，并在7种温度下进行孢子萌发试验。经12、24小时后，在显微镜下观察其孢子萌发率（每次观察时用胶头滴管将孢子悬浮液滴在载玻片上进行观察）。观察不同温度对孢子萌发的影响，共7个处理，3次重复。

不同光照对菌丝和孢子生长的影响。

在PDA培养基上接菌后分别置于3种不同光照条件下进行培养：①完全黑暗；②连续日光灯照射；③光暗交替：12小时光照：12小时暗处理，温度是25℃恒温，经4天后取出测量菌落直径，共3个处理，4次重复。

不同酸碱度对菌丝和孢子的影响。

经高压灭菌后的PDA培养基，用0.1%NaOH溶液、0.1%HCl溶液，在无菌条件下进行不同pH值调节，配制PH值分别为4、5、6、7、8、9、10培养基。用上述的方法接菌后，置于25℃温箱中培养，经4d后测量菌落直径，共7个处理，4次重复。

用0.1%NaOH溶液、0.1%HCl溶液、葡萄糖溶液调节PH值，配制PH值分别为4、5、6、7、8、9、10的孢子悬浮液，观察记录方法同上。

2 结果与分析

由表1可见，不同碳源处理分析乳糖与葡萄糖之间无显著差异，但乳糖与葡萄糖处理与果糖、蔗糖、麦芽糖之间差异极显著，乳糖与葡萄糖适合菌落生长；不同氮源处理分析硝酸铵与其他处理之间差异极显著，所以最适合菌落生长的氮源是硝酸铵。

由表2可见，不同碳源处理分析葡萄糖与其它处理间达到极显著水平，所以最适合孢子萌发的碳源是葡萄糖；不同氮源处理分析硝酸铵与差异极显著，所以最适合孢子萌发的氮源是硝酸铵。

由表3可见，不同温度对菌丝生长的影响分析25。c处理与其他处理之间差异显著，可见25℃适宜菌丝的生长；不同温度对孢子萌发的影响分析，20%与25℃处理间差异不显著，20℃、25℃与其他处理间差异极显著，所以适宜孢子萌发的温度是20～25℃。

由表4可见，不同光照对菌丝生长的影响，全光与全暗、光暗交替处理间极显著，所以全光适宜菌丝的生长；不同光照对孢子萌发的影响，全光与全暗、光暗交替差异极显著，说明全光更适合孢子萌发。

由表5可见，PH8与PH7处理间无差异，所以偏碱更适合菌丝的生长和孢子萌发。

3 小结与讨论

以天女木兰叶斑病病菌为试材，研究不同碳、氮源对天女木兰叶斑病病菌生长的影响；试验结果表明：适合菌丝生长碳源是乳糖与葡萄糖；适合菌丝生长的氮源是硝酸铵；最适合孢子萌发的碳源是葡萄糖；适合孢子萌发的氮源是硝酸铵；25℃适宜菌丝的生长，适宜孢子萌发的温度是20～25℃；全光适宜菌丝的生长和孢子萌发。适合菌丝的生长和孢子萌发PH8与PH7。