白芷总香豆素和挥发油镇痛抗炎作用的比较研究

薛艳萍+秦旭华+胡黄婉莹+许玲+钱娜+张咏梅+唐兰

【摘要】目的：研究白芷总香豆素和挥发油的镇痛抗炎作用。方法：采用热板法、醋酸扭体法、甲醛致痛法观察白芷总香豆素、挥发油及复合成分组的镇痛作用；采用二甲苯致耳肿胀、腹腔毛细血管通透性亢进及棉球肉芽肿3种炎症模型考察白芷总香豆素、挥发油及复合成分组的抗炎作用。结果：镇痛实验结果显示：白芷总香豆素、挥发油对醋酸及甲醛所致小鼠或大鼠的疼痛反应具有明显抑制作用（P<0.05），复合成分组对3种疼痛模型均具有抑制效应（P<0.05或P<0.01）；抗炎实验结果显示：白芷总香豆素、挥发油能明显减轻二甲苯所致小鼠耳廓肿胀度、抑制小鼠腹腔毛细血管通透性亢进（P<0.05）；而复合成分组对3种炎症模型均有明显抑制作用（P<0.05或P<0.01）。结论：白芷总香豆素及挥发油均具有一定的镇痛和抗炎作用，其作用特点和强度差异不明显，而白芷总香豆素、挥发油联合使用可明显增强镇痛抗炎作用，提示白芷总香豆素和挥发油具有“相须”的抗炎止痛作用。研究提示在中药新药的开发和利用中，从传统中药中分离的多种有效成分及有效成分的组合，应成为今后中药新药开发考虑的方法和方向。

【关键词】白芷总香豆素和挥发油；抗炎；镇痛；实验研究

【中图分类号】R285.5 【文献标志码】 A 【文章编号】1007-8517（2016）08-0020-03

Abstract：Objective To compare analgesic and anti-inflammatory effects of total coumarin and volatile oil of radix angelicae dahuricae. Methods The pain animal models induced by temperature and acetic acid and formaldehyde were adopted in the research of analgesic effect， and the degrees of the swelling of ears and the weight of cotton ball granuloma and the capillary permeability of abdominal cavity on the inflammation animal models were observed in the study of anti-inflammatory effect. Results The experiments of analgesic effect showed that the total coumarin and volatile oil of radix angelice dahuricae had an obvious analgesic effect on the pain animal models induced by acetic acid and formaldehyde（P<0.05）.but the composite component had an obvious analgesic effect on the 3 kinds of pain animal models（P<0.05；P<0.01）；The experiments of anti-inflammatory effect showed that the total coumarin and volatile oil of radix angelice dahuricae had an obvious anti-inflammatory effect， reducing the degree of swelling ear and the capillary permeability of abdominal cavity on the inflammation animal models（P<0.05）.but the composite component had an obvious anti-inflammatory effect on the 3 kinds of inflammation animal models（P<0.05；P<0.01）.Conclusion Both the total coumarin and volatile oil of Radix Angelicae dahuricae have obvious analgesic and anti-inflammatory effects， and there are no significant difference between them， but the total coumarin combining with volatile oil shows more analgesic and anti-inflammatory effects，the means that the total coumarin maybe has synergistic effect with volatile oil on analgesic and anti-inflammatory effects. In the same time， the researchers of developing new medicine from traditional herbs maybe consider more about the composite component of herbs in the future.

Keywords：Total Coumarin and Volatile oil of Radix Angelicae Dahuricae；Anti-inflammatory； Analgesic；Experimental Study

白芷为伞形科植物的根，为中医临床“祛风止痛”的常用中药。既往研究发现，白芷的镇痛抗炎成分主要与总香豆素和挥发油类成分有关。本研究选择川产道地药材白芷（Angelica dahuriea （Fisch. ex Hoffm. ） Benth. et Hook. f. var. formosana（Boiss.）Shan et Yuan）的提取物-总香豆素和挥发油为研究对象，对其镇痛抗炎作用进行比较研究，为进一步开发和利用白芷资源进行有益的探索。

1材料

1.1药物白芷购于四川遂宁白芷GAP生产基地，白芷总香豆素浸膏及挥发油（由成都中医药大学中药制剂教研室制备），复合组以总香豆素及挥发油按1∶1比例混合组成，实验时用蒸馏水（含0.5%吐温-80助溶）配成所需浓度的混悬液备用。

1.2试剂曲马多，石药集团欧意药业有限公司生产，批号012100901；地塞米松：浙江仙居有限公司，批号：111075。

1.3动物昆明种小鼠，雌雄兼用，体重18～22g，由成都中医药大学动物实验中心提供， SD大鼠，雌雄兼用，体重180～220g，由成都中医药大学动物实验中心提供，合格证号：scxk（川）2008-11。

1.4仪器YLS-6B智能热板仪，山东省医学科学院设备站。

1.5统计学方法数据以均数±标准差（x±s） 表示，采用《中国医学百科全书·医学统计学》统计软件包PEMS3.1进行统计分析。方差齐性检验后，各实验组与对照组比较用 Dunnett法检验，均数间两两比较采用 Student-Newman-Keuls法检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2方法

2.1镇痛作用研究

2.1.1对热板所致疼痛模型的影响取健康雌性昆明种小鼠80只，放入温度已控制好的热板上（55±0.5）℃，立即触摸“计时”按钮开始计时，并盖上有机玻璃罩避免小鼠跃出，仔细观察，待小鼠舔后足时马上再次触摸“计时”按钮而锁定时间，该时间为小鼠的痛阈值。（凡是在5s内出现舔后足及超过30s不舔后足，或逃避跳跃的小鼠弃置不用。）取筛选合格的小鼠（雌性）80只，再次测定痛阈值，以两次的平均值作为小鼠给药前的正常痛阈值，按照小鼠的正常痛阈值随机分为8组，分别为空白组、曲马多组、白芷总香豆素、挥发油及复合成分高剂量组、低剂量组，每组10只小鼠。实验各组分别灌胃给予各受试药物，0.2ml/10g（具体给药剂量见表1）；空白组给予等量蒸馏水，分别测定给药后30min、60min、90min、120min时小鼠的痛阈值。若小鼠放入热板仪中60s仍无反应，应将小鼠取出，痛阈值按60s计。实验结果见表1。

2.1.2对醋酸所致疼痛模型的影响取健康昆明种小鼠80只，雌雄各半，按体重分层随机分为8组，分别为空白组、曲马多组、白芷总香豆素、挥发油及复合成分高、低剂量组，每组10只小鼠。实验各组分别灌胃给予各受试药物，0.2ml/10g（具体给药剂量见表2）；空白组给予等量蒸馏水。于末次给药30min后，每只小鼠腹腔注射0.5%冰醋酸0.1ml/10g，立即将小鼠单只放入小鼠笼内，观察15min内各鼠出现扭体反应的潜伏期（注射醋酸后至第一次扭体反应出现的时间）和扭体次数。实验结果见表2。

2.1.3对甲醛所致疼痛模型的影响取健康SD大鼠80只，雌雄各半，称重，按体重分层随机分为8组，分别为空白组、曲马多组、白芷总香豆素、挥发油及复合成分高、低剂量组，每组10只大鼠。实验各组分别灌胃给予各受试药物，0.2ml/10g（具体给药剂量见表3）；空白组给予等量蒸馏水。于末次给药30min后，每只大鼠左侧足跖处注射2%甲醛100μl/只，立即观察大鼠0～5min内的舔足次数、15～30min的舔足次数。实验结果见表3。

2.2抗炎作用研究

2.2.1对二甲苯所致炎症模型的影响取健康雄性昆明种小鼠80只，称重，按体重分层随机分为8组，分别为空白组、地塞米松组、白芷总香豆素、挥发油及复合成分高、低剂量组，每组10只小鼠。实验各组分别灌胃给予各受试药物，0.2ml/10g（具体给药剂量见表4）；空白组给予等量蒸馏水。给药后30min将30μl二甲苯均匀涂抹于每只小鼠的右耳两面。致炎60min后，小鼠脱颈椎处死，分别剪下左右耳片，打孔器取相同部位打孔，电子天平称量。

耳肿胀度的计算公式为：肿胀度（mg） = 肿胀耳片质量-未肿胀耳片质量

肿胀抑制率计算：空白对照组平均肿胀度与用药组平均肿胀度的差值除以空白对照组平均肿胀度，再乘以100%。实验结果见表4。

2.2.2对小鼠腹腔毛细血管通透性亢进的影响取健康雄性昆明种小鼠80只，按体重随机分成8组，分别为空白组、地塞米松组、白芷总香豆素、挥发油及复合成分高、低剂量组，每组10只小鼠。各组动物每日灌胃给药一次，每次0.2ml/10g（具体给药剂量见表5），模型对照组给相同体积的0.5%吐温溶液），连续灌胃3d，地塞米松组实验当天腹腔注射给药1次。末次给药后1h，各组动物尾静脉注射1%伊文思蓝0.1ml/10g体重，同时腹腔注射0.6%醋酸溶液0.2ml/只，20min后处死小鼠，用5ml蒸馏水冲洗腹腔，收集冲洗液，离心，取上清液于分光光度计590nm处比色，以吸光度（OD）值表示小鼠腹腔毛细血管通透性。结果见表5。

2.2.3对小鼠棉球肉芽肿的影响取健康雄性昆明种小鼠80只，按体重随机分成8组，每组10只。分组见表6。实验时各动物于右腹部消毒后剪开1cm长小口，以血管钳扩松皮下组织，用镊子将重量为10mg的灭菌干棉球植入腋部皮下，切口涂红霉素软膏，手术后2天每天注射硫酸庆大霉素0.05ml/只以防感染。由手术当天起每日灌胃给药一次，每次0.2ml/10g（具体给药剂量见表6）；空白组给予等量蒸馏水，连续灌胃7d。第8天处死小鼠，打开原切口，将棉球连同周围结缔组织一起取出，剔除脂肪组织，放烘箱60℃6h烘干称重，减去原棉球重量即为肉芽肿干重。实验结果见表6。

3结果

镇痛实验结果显示：白芷总香豆素和挥发油能明显延长醋酸致小鼠扭体反应的潜伏期，减少其扭体反应次数，并抑制甲醛致大鼠的疼痛反应（P<0.05），但对热板致小鼠疼痛反应则无明显影响（P>0.05）；而其复合成分组对三种疼痛模型均表现出明显抑制作用（P<0.05或P<0.01）。抗炎实验结果显示：白芷总香豆素和挥发油能明显减轻二甲苯所致小鼠耳廓肿胀度，抑制小鼠腹腔毛细血管通透性亢进（P<0.05），但对小鼠棉球肉芽肿干重则无明显抑制效果（P>0.05）；而复合成分组不仅对二甲苯致炎症模型和小鼠腹腔毛细血管通透性亢进表现出明显抑制（P<0.05或P<0.01），还能明显减轻小鼠棉球肉芽肿干重（P<0.05）。

4讨论

白芷药用始载于我国现存最古的医学方书《五十二病方》，至今已有2000余年药用历史。白芷为中医临床常用止痛药物，常用于头痛，牙痛，风湿痹痛等多种疼痛病症[1]。同时，我国作为白芷的主产地，白芷产量占世界总产量的95%以上，药材资源得天独厚。目前我国的商品白芷主要有川、杭、祁、禹四种，川产白芷是著名的道地药材，产量约占全国商品白芷的70%。如何开发和利用丰富的白芷资源，是我们当前中医药研究者的重要课题。有文献研究显示白芷中的挥发油及香豆素类物质均为其抗炎、镇痛的活性成分[2-4]，但挥发油和香豆素在抗炎和镇痛作用上有何特点，是否具有协同作用，未见文献报道。本课题正是基于此，以白芷挥发油、总香豆素以及两者按1∶1比例的复合物为研究对象，采用多种炎症和疼痛动物模型较为系统的对比研究，以期为白芷抗炎镇痛类新型药物的开发提供一定的药效学实验依据。

本次实验研究结果显示：白芷总香豆素、挥发油对醋酸及甲醛所致小鼠疼痛反应具有明显抑制作用（P<0.05），但对热板所致小鼠的疼痛反应无明显影响；白芷总香豆素、挥发油能明显减轻二甲苯所致小鼠耳廓肿胀度、抑制小鼠腹腔毛细血管通透性亢进（P<0.05），但对小鼠棉球肉芽肿干重无明显抑制作用；而白芷总香豆素、挥发油复合成分高低剂量组对实验中采用的3种动物疼痛模型和3种炎症动物模型均有明显抑制作用（P<0.05或P<0.01），两成分表现出明显协同增效的结果。研究表明：白芷总香豆素、挥发油均具有一定的镇痛和抗炎作用，同时白芷总香豆素、挥发油联合使用可明显增强镇痛抗炎作用，白芷总香豆素和挥发油可能具有协同增效作用。综上，本次研究结果提示白芷中的香豆素和挥发油均为白芷传统“祛风止痛”作用的物质基础，其抗炎镇痛作用特点和强度差异不明显，仍需进一步研究，而白芷总香豆素、挥发油联合使用可明显增强镇痛抗炎效果，两种成分可能具有“相须”的作用。研究再次提示在中药新药的开发和利用中，从传统中药中分离的多种有效成分及有效成分的组合，可能是今后中药新药开发应考虑的方法和方向。

参考文献

[1] 王建，张冰. 临床中药学[M].北京：人民卫生出版社，2012：45.

[2]张富强，聂红，韦艺，等.白芷的化学与药理研究进展.南京中医药大学学报（自然科学版） [J].2002，3（18）：190-192.

[3] 张韶瑜，孟林，高文远，等.香豆素类化合物生物学活性研究进展[J].中国中药杂志，2005，30（6）：410-414.

[4]聂红，沈映君，吴俊梅，等.白芷挥发油镇痛、镇静作用和身体依赖性研究 [J].中药新药与临床药理， 2002， 13 （ 4）： 221-223.

（收稿日期：2016.03.01）