应用药敏纸片法指导兽医临床用药体会

徐强

摘 要：药敏试验是指对敏感性不能预测的分离菌株进行试验，在体外测试病原微生物对抗菌药物的敏感程度，以指导兽医临床合理选择治疗药物的微生物学试验。药敏试验是兽医临床工作中的一项基本技能，而药敏纸片法是药敏试验中最普遍的方法。该文主要通过实例介绍了药敏纸片法在兽医临床上的应用及其指导意义，供同行参考。

关键词：药敏试验；药敏纸片法；耐药性；接种培养

中图分类号 S854.52 文献标识码 A 文章编号 1007-7731（2016）08-111-02

近年来，随着畜牧业的快速发展，畜禽养殖规模的不断扩大，动物疾病也随之增加，呈现出更加复杂化的特点。细菌性疾病作为危害畜牧业发展的一类重要疾病，目前呈现出了多种发病状态。大多养殖户由于饲养管理技术不高、动物疫病的预防意识不强，再加上缺乏动物临床诊疗知识，对临床发生的动物疾病很难进行准确诊断和针对性的治疗，一旦发病，不能对其发病原因进行有效分析，导致盲目滥用抗生素，不但没有控制病情，还造成了病情的延误，而且产生了大量的耐药菌株，不少耐药菌株对多种抗生素产生耐药性。笔者在临床诊疗中遇到过很多次应用抗生素治疗细菌性疾病无效的情况。为了提高抗生素对细菌性疾病的治疗效果，合理使用抗生素，兽医工作者常用到药敏试验来指导我们临床用药，而药敏纸片法是药敏试验中最普遍的方法，笔者常在临床中应用该方法收到了较为满意的效果。

1 实验方法

1.1 药敏纸片的制备 药敏纸片法中使用的药敏纸片市场上很容易购买到，但也可自制，具体方法如下：取定性滤纸，用打孔器打成直径6mm的圆形小纸片，根据实际需要制成相应数量。以制成100片为例，将100片圆片放入清洁干燥的小瓶或小平皿中，包扎，经15磅高压灭菌15～20min后，置37℃温箱中使其完全干燥。将供试验的抗菌药物按其有效浓度稀释成1mL，加入上述含有100片纸片的小瓶内，不时翻动，使滤纸片与药液充分混合，浸泡30min即可，置于37℃温箱过夜或阴凉处干燥备用。在温箱中的时间不宜过长，以免药物失效。干燥完成后密封，放置冰箱中保存，切勿受潮，一般能保存4～6个月。

1.2 接种培养 取发病动物的病料或组织（如心、血、脾、肝脏、淋巴结等）无菌接种到培养基中，在37℃温箱中培养24h，挑选典型菌落备用。在超净工作台中或酒精灯旁，用接种环挑取适量细菌培养物，以划线方式接种到固体培养基表面，或用无菌生理盐水稀释菌落，用蘸有菌悬液的无菌棉签均匀涂布到固体培养基表面，盖上平板，室温放置数分钟。然后用无菌镊子将纸片粘贴于固体培养基表面，一定要注意纸片与培养基表面要完全接触，各纸片中心间距应大于24mm，并记录每种药敏纸片的位置。贴完后放置15min，再置于37℃温箱中培养12～18h后观察结果。必要时，可做2组平行试验，以致实验结果更准确。

1.3 结果判定 用抑菌圈的直径（φ）表示，抑菌圈的直径越大，抑菌效果越好。即抑菌圈直径（φ）≥20mm者为高度敏感；抑菌圈直径16≤（φ）<20mm者为中度敏感；抑菌圈直径10≤（φ）<16mm者为低度敏感；抑菌圈直径（φ）<10mm者为耐药。

2 临床实例

贵池区梅龙街道某一养鸡场饲养肉鸡1 100余只，2013年4月12日开始发病，发病当日为36日龄，4月13日上午10：00许，笔者到现场时，约有15%发病，已经死亡8只，病鸡表现为采食量下降，体温升高，精神沉郁，羽毛松乱，离群呆立，缩颈闭眼，头常缩于翅下，不愿走动，排淡黄色或黄白色稀便，泄殖腔下方羽毛潮湿，污秽粘连，有的呼吸困难，张口伸颈，咳嗽、打呛。解剖症状明显的两只鸡，发现实质器官充血、淤血；气囊发炎，气囊壁浑浊，有黄白色纤维素性渗出物；肝肿胀，有灰白色坏死灶；肺充血淤血；脾、肾脏肿大；心包积液，心外膜有散在出血点；肠炎腹水等症状，笔者根据临床症状和病理变化怀疑是大肠杆菌感染（后经实验室培养和生化实验证实）。随后将解剖的两只鸡取其心肝组织，于当日上午11：00在贵池区动物疫病预防与控制中心实验室做了药敏试验（药敏纸片法），4月15日上午08：00，药敏试验结果显示该菌株对氟苯尼考和硫酸新霉素敏感，笔者随即告知养殖户把治疗药物更换为氟苯尼考和硫酸新霉素。治疗效果明显，4月13日10：00到15日08：00共死亡23只鸡，15日当天死亡9只鸡，15日之后共死亡7只鸡。

3 总结与体会

随着新型致病菌的不断出现，每种致病菌对不同的抗菌药物的敏感性不同，同种细菌的不同菌株对同一抗菌药物的敏感性也有差异，也就是说再好的抗菌药物和再好的兽医人员，都不能保证所用的抗菌药物是特效药物，因此药敏试验在兽医工作中有着日益重要的实际意义。药敏试验中的药敏纸片法因其操作简单、成本较低的特点，被大多数兽医工作者所青睐。该方法优点如下：一是能够经济、有效地测定细菌对抗菌药物的敏感程度，指导兽医临床合理用药，使兽医工作者能够及时准确的用药，避免了抗生素的滥用，既节约了药物的使用，又缩短了动物病程，给养殖户挽回了许多不必要的损失；二是可以及时选择敏感药物治疗动物疾病，规范了抗菌药物的使用，延长了新药的使用寿命，还可以为新研制药物性能评估提供有价值的信息；三是可以及时掌握各种菌种和菌株的耐药性，对流行病学调查建立监控，同时采取相应的措施预防和控制细菌性疾病的流行，为动物疫病预防与控制机构提供防治依据，有效控制区域性的细菌性疫病的发生。因此，兽医工作人员要重视药敏纸片法在兽医临床上的应用。 （责编：张宏民）