苯并咪唑类杀菌剂对水稻纹枯病菌的室内毒力测定

袁梦思　李建文　孙文秀

摘要：采用菌丝生长速率法测定了多菌灵、苯甲多菌灵和甲基硫菌灵3种苯并咪唑类杀菌剂对不同抗性水稻纹枯病菌室内毒力。结果表明，多菌灵的抑菌效果最好，其对敏感菌株的EC在0.293 1～0.403 5 μg/mL之间，对抗性菌株的EC在0.414 7～0.645 7 μg/mL之间：甲基硫菌灵的毒力最低，其对敏感和抗性菌株的EC分别在12.039 7～26.597 1μg/mL和20.770 1～36.953 3 μg/mL之间。

关键词：杀菌剂；水稻纹枯病菌：毒力测定

水稻纹枯病又称云纹病，俗名花足秆、烂脚瘟、眉目斑，是当前水稻生产上的主要病害之一。该病由立枯丝核菌（Rhizoctonia solani）引起，在高温高湿条件下发生严重，导致水稻的产量和质量大幅下降，给中国及世界各国的粮食生产造成巨大经济损失。对于水稻纹枯病的防控，化学药剂防治是控制该病害发生的最有效途径之一。但由于常规化学药剂如井冈霉素的长期单一使用，使得水稻纹枯病菌表现出不同程度的抗药性，导致防治效果明显降低。苯并咪唑类杀菌剂是一类内吸性杀菌剂，常见的有多菌灵、甲基硫菌灵等，其能够与病原真菌的微管蛋白相结合，抑制细胞的有丝分裂，可用于水稻纹枯病的防治。本研究通过菌丝生长速率法，测定多菌灵、苯甲多菌灵和甲基硫菌灵3种苯并咪唑类杀菌剂对水稻纹枯病菌的室内毒力，为进一步科学合理用药、有效降低抗药性、减少环境污染及高效防治水稻纹枯病提供理论依据。

1.材料与方法

1.1供试菌株和培养基

供试水稻纹枯病菌由长江大学微生物学实验室分离鉴定。供试培养基为PDA培养基：马铃薯200 g、葡萄糖20g、琼脂15 g、去离子水1 000mL。

1.2供试药剂

25%多菌灵可湿性粉剂（山东禾益生物科技有限公司）、25%苯甲多菌灵可湿性粉剂（开封市浪潮化工有限公司）、70%甲基硫菌灵悬浮剂（徐州润泽化工有限公司）。

1.3水稻纹枯病菌的筛选

在湖北省荆州、武汉、宜昌等地的水稻田中采集水稻纹枯病病株，采用常规组织分离法分离其病原菌并进行鉴定。将所有菌株在含1.0μg/mL多菌灵的PDA平板上培养2 d，能在此培养基上生长的为抗性菌株，不能生长的为敏感菌株。

1.4室内毒力测定

随机选取各3个敏感和抗性菌株，采用菌丝生长速率法测定3种杀菌剂对水稻纹枯病菌的室内毒力。将多菌灵、苯甲多菌灵和甲基硫菌灵按浓度进行稀释后，配制成质量浓度为0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4、1.6、1.8μg/mL系列含药PDA平板，将水稻纹枯病菌菌块接种于平板中央。培养2 d后，十字交叉法测量各菌落的直径，分别测定敏感性和抗性水稻纹枯病菌的毒力，以不加药剂的空白平板作为对照，每一浓度设3次重复。

1.5数据处理

通过菌丝生长抑制率和各药剂的有效浓度对数值之间的线性进行回归分析，求出各药剂的EC、ECgo及相关系数。抑制率的计算公式如下。

菌丝生长抑制率=（对照菌落直径-处理菌落直径）/对照菌落直径×100%

2.结果与分析

2.1水稻纹枯病菌的筛选

从湖北省3个地区的稻田中共分离到134个水稻纹枯病菌菌株，对多菌灵的抗药性结果表明，其中103个菌株在1.0μg/mL多菌灵的PDA平板上不能生长，占76.87%，有31个菌株能较好地生长，说明有一部分菌株对多菌灵产生了抗药性。随机选取3个敏感菌株wka5、wkb3、wkc1和3个抗性菌株A111、wka3、wkb2进行杀菌剂的室内毒力测定。

2.2水稻纹枯病菌的室内毒力测定

由表1可以看出，3种苯并咪唑类杀菌剂对敏感水稻纹枯病菌都有一定的抑菌活性，其中多菌灵的毒力最高，其EC在0.293 1-0.403 5μg/mL之间，EC在0.525 3～0.735 6μg/mL之间：毒力最低的是甲基硫菌灵，其ECso在12.039 7-26.597 1μg/mL之间，EC在24.229 5～58.735 8 μg/mL之间。同样，3种杀菌剂对抗性水稻纹枯病菌的毒力大小也是多菌灵>苯甲多菌灵>甲基硫菌灵，其中多菌灵的EC在0.414 7-0.645 7μg/mL之间，ECgo在0.928 5～1.191 7μg/mL之间。结果表明，无论敏感菌株还是抗性菌株，3种苯并咪唑类杀菌剂中多菌灵对水稻纹枯病菌的毒力最强，甲基硫菌灵的毒力最弱。

3.小结与讨论

目前，水稻纹枯病的主要防治措施仍然是化学防治，最常用的药剂是井冈霉素，但由于其连续单一使用已产生明显的抗药性。苯并咪唑类杀菌剂是内吸性杀菌剂，能够与病原真菌的微管蛋白相结合，具有抑制微管的功能，阻止细胞的有丝分裂，从而控制病原菌的生长。本试验结果表明，苯并咪唑类杀菌剂中的多菌灵毒力较高，而甲基硫菌灵的抑菌效果则较差，这与前人的研究结果基本一致。室内毒力测定结果表明，多菌灵可以作为控制水稻纹枯病的备选药剂，但由于室内外作用方式及环境条件的差别，能否达到室内的抑菌效果还有待于进一步验证。

由于苯并咪唑类杀菌剂的作用位点单一，容易产生抗药性，使用过程中也存在一定的抗药性风险。因此，可将其与作用机理不同的杀菌剂混配、混用或交替使用，比如多菌灵与井冈霉素混配使用可以提高对水稻纹枯病菌的抑制作用，从而延缓此类药剂抗药性的产生。同时，进一步明确水稻纹枯病菌对多菌灵等药剂抗药性产生的分子机理，及时监测不同抗性菌株群体的发展动态，对于更好地防治水稻纹枯病具有重要的指导意义。