痰结核杆菌在结核患者中的检验方法探讨

马瑞瑛 杨振萍

摘要：目的 探讨痰结核杆菌在结核患者中的检验方法。方法 选取2014年1 ～12月收治的结核病患者133例，取所有患者痰液标本分三份分别采用罗氏培养基培养法、痰涂片抗酸染色法和PCR检查法进行结核杆菌检测，分析对比3种方法检测结果，检测时间与检测成本。结果 经过对比，PCR 检测法检测结核杆菌阳性率高于痰涂片抗酸染色法和罗氏培养基培养法，痰涂片抗酸染色法检测时间最短，罗氏培养基培养法检测成本最低（P<0.05）。结论 3种方式检测结核患者痰结核杆菌，PCR检测法检测准确率最高，其次为菌培养法。但涂片法所用检测时间较短。临床上应依据实际情况选择所需。

关键词：痰结核杆菌；结核病；检验方法

结核病是结核杆菌所引起的慢性传染性疾病，因其具有的高度传染性，一直以来都是人类的健康杀手，影响十分严重。近几年，随着结核杆菌的变异和抗药性不断增加，结核病的发病率、发病人数与病死率呈上升趋势发展。这种情况在发展中国家这种情况更加严重，据统计，全球目前约有大约30%人数受到了结核杆菌感染，每年新增结核病例900多万，死于结核病的人数约为200万，该病已成为因单一病原体引起，致病致死率最高的疾病[1]。因此，准确快速的结核杆菌检测并帮助确诊结核病人对发现、控制、治疗结核病都有十分关键的意义。目前对于结核杆菌的检测是诊断结核病较为有效的方法。通常结核杆菌的诊断方法主要是采用罗氏培养基培养法和痰涂片抗酸染色法。这两种方法虽然有一定效果，但在一定条件上受限太多，各有优缺点，涂片法相对简单容易操作，但检出率较低。罗氏培养基培养法先对检出率高但通常需要4～8w的检测周期。随着现代分子生物学技术的进步，荧光定量PCR（fluorescent quantitative PCR，FQ-PCR）做为新开发出的技术，因其具有的高特异性和敏感度，被逐渐应用到临床诊断[2]。本研究对比分析了几种痰结核杆菌的检验方法效果，现报道如下。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取我院2014年1～12月收治的结核病患者133例，去痰液标本133份，其中男73例，女60例，年龄17～46岁，平均38.7岁，所有患者均有不同程度盗汗、低热，乏力等临床症状， 经临床观察与病理学诊断确诊为肺结核。

1.2方法 所有患者于清晨用生理盐水清理口腔后咳痰，并弃去第一口痰液，取第二口分三份分别装在无菌标本盒内立即送至我院检验科检测。对痰液标本分别应用罗氏培养基培养法、痰涂片抗酸染色法和PCR检测。

1.2.1罗氏培养基培养 取2ml痰液标本中脓性部分置于消化管中，根据消化管中标本浓稠度，取适量3.0%～4.0%NaOH溶液加入消化管，放置在涡旋震荡器上摇晃均匀后静置15 min，取0.1ml无菌环境下接种在两支罗氏培养基上，温箱温度设置在（36±1）℃孵育培养8w，分别在孵育的第3d和第7d观察记录生长数据，以后每周均观察记录一次。

1.2.2痰涂片抗酸染色法 按照《痰涂片镜检标准化操作及质量保证手册》中的规范要求留取操作送检的痰液标本，在生物安全柜中取痰液标本的脓性部分涂厚片，干后采用抗酸染色，显微镜在100视野下检测记录。

1.2.3 PCR检查 取4倍痰液标本体积的4%NaoH溶液加入送检痰液中，摇晃均匀，置于室温下液化30min后，取0.5～1.5ml加入0.5ml4%NaoH放在离心管中静置10min，进行5min速度15000rpm下的低温离心。弃上清，经沉淀后加1ml无菌生理盐水混合均匀，转速15000rpm进行5min离心，沉淀物重复操作1次。加入50μL裂解液充分混匀，沸水浴10min后15000rpm离心5min。取2μL处理后的样本作为模板，加进PCR管内进行PCR 扩增。结果用阳性定量参考品CT值和阴、阳性质控

品进行判定。

1.3统计学方法 数据资料采用SPSS17.0软件进行处理分析，计量资料用χ2检验，对相关数据进行分析，P<0.05差异明显，具有统计学意义。

2 结果

2.1 133例结核患者检验结果 133例结核患者痰液经过三种方式检验，罗氏培养基培养法检验结核杆菌阳性59例，阳性率44.36%。痰涂片抗酸染色法检验结核杆菌阳性40例，阳性率30.08%。PCR检查结核杆菌阳性87例，阳性率65.41%。经过对比，PCR检查法检测结核杆菌阳性率（65.41%）>罗氏培养基培养法（44.36%）>痰涂片抗酸染色法（30.08%）。差异明显，具有统计学意义（P<0.05），见表1。

2.2 3种检测方式检测成本与检测时间对比 经过对比，检测成本上PCR检查法>痰涂片抗酸染色法>罗氏培养基培养法；检测时间上罗氏培养基培养法>PCR检查法>痰涂片抗酸染色法。3种方式对比差异显著，具有统计学意义（P<0.05），见表2。

3 讨论

肺结核是常见的呼吸道传染病，治疗不当，常会转移使肾脏等器官病变，对人类健康危害很大，一般结核患者早期的临床症状虽然多样但并不典型，容易出现误诊情况，而结核病患者的治疗周期普遍较长，临床上更加需要准确有效的检测方式帮助诊治患者的病情。结核杆菌经过病原学检查确认一直是诊断肺结核的金标准，对于早期的预防和治疗阶段帮助很大。结核杆菌检测方法较多，目前主要应用涂片抗酸染色法、培养法和RT-PCR检测法[3]。涂片抗酸染色法与培养法做为传统检测方法检测成本相对低一些，但检测效果并不理想，而基于新技术的PCR检测法有更加准确的检测率。本文研究显示，分析133例结合患者痰液检测结果，PCR检测法检测结核杆菌阳性率最高，罗氏培养基培养法次之，痰涂片抗酸染色法最低，PCR 检测法是从分子领域对结核杆菌进行定量、定性的检测，相比具有较高的特异性和灵敏性，可作为评估疗效的主要检测手段应用。罗氏培养基培养法所用检测时间最长，但在菌落培养过程中可以评估细菌的耐药性，对临床研究有较大的应用价值。

综上所述，临床上如要准确的对痰结核杆菌进行检测，PCR检测法是首选，罗氏培养基培养法对检测治疗过程中细菌抗药性有一定的临床价值。而痰涂片抗酸染色法适合规模性的普查活动。

参考文献：

[1]杨光武.不同检验方法在肺结核早期诊断中的应用[J].航空航天医学杂志，2012，23（3）：309-310.

[2]赵文娟，张翠英，高玉然.三种结核抗体检查诊断活动性肺结核比较[J].预防医学情报杂志，2012，28（9）：702-705.

[3]杨巍巍.结核患者痰结核杆菌检验的方法探讨[J].中国医药指南，2013，5（11）：258-259.

编辑/赵恒德