基质金属蛋白酶在类风湿性关节炎患者血清中的表达及意义

周琼竦

[摘 要] 目的：探讨基质金属蛋白酶在类风湿性关节炎患者血清中的表达及意义。方法：选取我院2011年7月—2014年10月收治的类风湿性关节炎病患125例作为研究组，按照配对方式选取我院同期健康体检者125例為对照组。检测2组MMP-9、MMP-3、MMP-2、MMP-1水平，并观察分析RA病患血清高表达MMPs与PA、CRP、ES、WBC及PLT等血清生化学指标的相关性。观察比较高活动度RA病患与中低活动度RA病患血清MMPs水平。结果：观察组血清MMP-3、MMP-2与MMP-9水平明显高于对照组，差异存在统计学意义（P<0.05）。活动期RA血清MMP-3、MMP-2 、MMP-9水平显著高于稳定期RA，差异存在统计学意义。MMP-3、MMP-2 、MMP-9水平与CRP、PLT、ESR及WBC呈正相关（P<0.05）；与PA呈负相关（P<0.05）。结论：MMP-3、MMP-2与MMP-9在类风湿性关节炎血清中高表达，同时与RA进展评估指标呈正相关，能够预测疾病严重程度。

[关键词] 基质金属蛋白酶；类风湿性关节炎；活动度

中图分类号：R593.22 文献标识码：B 文章编号：2095-5200（2016）02-055-03

DOI：10.11876/mimt201602020

类风湿性关节炎（rheumatoid arthritis，RA）是一类以关节软骨及骨质破坏为特点的慢性炎症性与自身免疫性疾病，以关节滑膜受累为主，临床多表现为反复不愈的增生反应、炎症反应软骨及其下方骨质遭到破坏，病情最终进展至骨关节不可逆性畸形[1]。文献报道，过度降解细胞外基质致使病患关节软骨发生不可逆性退行性变是RA的一个重要特征[2]。基质金属蛋白酶 （Matrix Metallo proteinases，MMPs ）是和细胞外基质及其功能存在紧密相关性的一类蛋白酶家族，同时，从RA病患采集的关节液中可发现MMP-2 与MMP-3高表达[3]。但采集关节液样本是有创检查，采集操作步骤也稍显烦琐。本次实验采集RA病患外周血样本，分析MMPs家族在血清中表达情况及其临床运用价值，具体报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取我院2011年7月—2014年10月收治的类风湿性关节炎病患125例作为研究组，诊断按照1987年美国风湿病学会制定的RA诊断标准，其中高活动度RA病患[4]（DAS28≥5.1）67例，中低活动度RA病患（DAS28<5.1）58例。排除标准：1）确诊为其他免疫风湿疾病者；2）合并糖尿病、高血压等慢性疾病者；3）病患及其家属不愿参与本次实验或病患依从性较差者。按照配对方式选取我院同期健康体检者125例为对照组，使2组年龄、性别等一般临床资料差异不存在统计学意义。

1.2 方法

采2组空腹清晨静脉血2mL，离心，提取上层血清，将其分装入1.5mL的EP管中，并置入-70℃冰箱保存。

ELISA法检测MMPs水平，操作严格按照试剂盒的使用操作说明书进行。前白蛋白 （PA）使用日本的Hitachi7600自动生化仪进行检测，C反应蛋白 （CRP）使用Beckman Coulter公司（美国）的全自动免疫分析仪进行检测，血沉 （ESR）使用ALIFAX公司（意大利）的全自动血沉分析仪进行检测，白细胞 （WBC）及血小板 （platelet， PLT）使用Sysmex公司（日本）的全自动血液分析仪进行检测。

比较2组血清MMP-9、MMP-3、MMP-2、MMP-1水平，并观察分析RA病患血清高表达MMPs蛋白与PA、CRP、ES、WBC及PLT等血清生化学指标的相关性。观察比较高活动度RA病患与中低活动度RA病患血清MMPs水平。

1.3 统计学方法

使用SPSS18.0软件对所采集数据进行分析，计量资料使用（x±s）表示，采用2组间t检验；使用Spearman相关分析对MMPs与血清生化指标进行分析，以P<0.05为差异存在统计学意义。

2 结果

2.1 比较2组受试者血清MMPs水平

2组血清MMP-1水平差异不存在统计学意义（P>0.05）；观察组血清MMP-3、MMP-2与MMP-9水平明显高于对照组，差异存在统计学意义（P<0.05），见表1。

2.2 中低活动度与高活动度RA病患MMPs水平比较

活动期RA病患血清MMP-3、MMP-2 、MMP-9水平显著高于稳定期RA病患，差异存在统计学意义（P<0.05），见表2。

2.3 MMPs与生化指标相关性分析

如上所述，MMPs家族中MMP-2 、MMP-3、MMP-9在RA病患血清中高表达。3者水平与CRP、PLT、ESR及WBC呈正相关（P<0.05）；与PA呈负相关（P<0.05），见表3。

3 讨论

现今对RA病因及发病机制尚未研究清楚，这既限制了RA疾病的早期诊断和筛查，也使得临床缺少特异性的治疗药物与手段[5]。RA机制研究的推进，为临床早期诊断与筛查及病情进展判断提供检测依据，也将为临床靶向治疗靶点。目前认为，关节软骨及其周围骨质退行性病变及不断破坏与作为软骨细胞生存基础的细胞外基质持续降解存在极为紧密联系[6-7]。

MMPs家族主要参与细胞外基质降解及结构改型与重塑，现已有二十多种家族成员被发现和研究[8]。

文献[9-10]报道，细胞外基质降解关键步骤是活化MMPs，在RA病患关节液中存在着异常增高MMPs及其相关蛋白，其中以MMP-3与MMP-2升高最为显著，其能够直接降解骨质与关节软骨来推进RA病情发展。Avdeeva等[11]对MMPs家族在骨关节液中含量分析检测，发现其对风湿免疫相关疾病诊断筛查及病情活动与否判断具有较高价值。但当临床检测出MMPs明显升高时，关节滑膜、软骨及其相关骨质已经遭受严重损害，治疗效果已经大打折扣[12]。研究证实[13]，在RA病患外周血清样本中可同样检测出异常增高MMPs家族，同时发现其与血管形成相关步骤存在密切关系，而在关节囊内及滑膜表面形成新生血管翳能够促进对炎症细胞及相关因子募集，且可直接引起关节软骨及其周围骨质慢性炎症反应。

本研究进一步对不同活动度患者进行分析发现高活动度患者血清MMP-9、MMP-3、MMP-2水平显著高于中低活动度患者，这与国内外相关研究[14-15]结果相似，表明MMPs水平與RA严重程度存在紧密联系。MMP-2作用底物包含Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅺ型胶原及蛋白多糖、层黏连蛋白、纤维结合素等重要关节软骨组成成分，直接破坏和损伤关节软骨[16]。MMP-3作为一种水解蛋白酶，能够直接破坏软骨组织，同时使间质胶原酶与胶原蛋白酶等激活而引发瀑布式软骨组织破坏反应，进一步促进形成血管翳及降解软骨组织[17]。相关性分析发现MMP-9、MMP-3和MMP-2与CRP、PLT、ESR及WBC等血清生化指标呈正相关，与PA呈负相关。这表明血清MMPs高表达蛋白水平与RA病情进展紧密关联，其能够较好反映病情进展程度。

综上所述，MMP-9、MMP-3与MMP-2在RA病患血清中表达异常，能够客观准确对RA病病情及活动与否进行判断。

参 考 文 献

[1] 缪怡，胡朝英，钱柳，等.类风湿性关节炎免疫学研究进展[J].上海交通大学学报（医学版），2011，31（7）：1035-1040.

[2] 史曼.类风湿性关节炎关节滑膜细胞基因表达谱分析及发病机制初步研究[D].第四军医大学，2014.

[3] Ahn J K，Huang B，Bae E K， et al.The role of α-defensin-1 and related signal transduction mechanisms in the production of IL-6， IL-8 and MMPs in rheumatoid fibroblast-like synoviocytes[J].Rheumatology，2013，52（8）：1368-1376.

[4] 巢磊，吴慧.软件实现DAS28—评价类风湿关节炎疗效及病情方法[J].西部中医药，2013，26（3）：47-50.

[5] 张建明.类风湿关节炎患者危险因素的病例对照研究[D].沈阳：中国医科大学，2014.

[6] 刘曦.类风湿关节炎与TLR信号传导通路基因多态性的关联研究[D].济南：山东大学，2013.

[7] 刘玮.中国汉族人类风湿关节炎外周血基因表达谱研究[D].上海：第二军医大学，2013.

[8] 张恩水.聚蛋白多糖酶和基质金属蛋白酶在骨关节炎不同时期关节液中的表达[D].济南：山东大学，2012.

[9] 王黎.糖基化终产物对小鼠巨噬细胞和成骨细胞基质金属蛋白酶诱导物表达的影响[D].南京：东南大学，2009.

[10] Sasaki K，Takagi M，Konttinen YT et al. Upregulation of matrix metalloproteinase （MMP）-1 and its activator MMP-3 of human osteoblast by uniaxial cyclic stimulation.[J]. J Biomed Mater Res Part B Appl Biomater，2007，80（2）：491-498.

[11] Avdeeva AS， Aleksandrova EN， Novikov AA， et al. The relationship of antibodies to modified citrullinated vimentin and markers of bone and cartilage destruction in rheumatoid arthritis[J]. Int J Rheumatol， 2014， 2014：464585.

[12] 唐艳丽，邵予，孙万邦，等.基质金属蛋白酶在类风湿关节炎免疫致病机制及信号转导中研究进展[J].广东医学，2013，34（17）：2724-2727.

[13] 赵薇，张昭，黄同列，等.Annexin A2介导DDR2过分泌MMPs分子机制及其在RA滑膜侵袭中作用研究[C].//中国生理学会2012年消化内分泌生殖代谢生理学术会议暨第八届比较生理学学术会议论文集.2012：7-8.

[14] 卢洁，魏国忠，戴利亚，等.IL-17、MMP-3在类风湿关节炎患者滑膜液及血浆中表达及意义[J].放射免疫学杂志，2011，24（2）：205-207.

[15] Kwak SY， Noh JM， Lee S， et al. Effect of alpha-resorcylic acid-L-phenylalanine amide on collagen synthesis and matrix metalloproteinase expression in fibroblasts[J]. Bioorg Med Chem Lett， 2014， 24（3）：742-745.

[16] 欧阳琼，李敏，许文频，等.青藤碱对A-THP-1与FLS细胞共培养体系细胞侵袭、迁移能力及MMP-2，MMP-9，CD147分泌活化影响[C].//第十届全国抗炎免疫药理学学术会议论文集.2010：14-15.