我国西南地区蛋禽配合饲料中霉菌毒素的污染分布规律

李雅伶　王建萍　李　云　丁雪梅　白世平　曾秋凤

程传民2　高庆军2　柏　凡2*　张克英1*

(1.四川农业大学动物营养研究所，成都611130；2.农业部饲料质量监督

检验测试中心(成都), 成都610041)



我国西南地区蛋禽配合饲料中霉菌毒素的污染分布规律

李雅伶1王建萍1李云2丁雪梅1白世平1曾秋凤1

程传民2高庆军2柏凡2*张克英1*

(1.四川农业大学动物营养研究所，成都611130；2.农业部饲料质量监督

检验测试中心(成都), 成都610041)

摘要：本次研究旨在了解霉菌毒素在我国西南地区的污染分布规律。对西南地区(四川、重庆、贵州、广西、云南)来自不同规模饲料厂的蛋禽(蛋鸡、蛋小鸡和蛋鸭)的95个配合饲料进行霉菌毒素[黄曲霉毒素B1(AFB1)、玉米赤霉烯酮(ZON)、呕吐毒素(DON)和伏马毒素(FB)]含量检测，检测方法先用酶联免疫吸附测定试验(ELISA)法初筛，对含量超过国家限量值的80%的样品运用高效液相色谱法复查。结果表明：1)AFB1、DON、ZON和FB的检出率分别为83.16%、93.68%、94.74%和100.00%，AFB1和ZON的超标率均为3.16%，而DON和FB均无超标。不同省市之间蛋禽饲料产品中的AFB1、DON和ZON的平均含量差异极显著(P<0.01)，其中AFB1含量最高的是重庆，为10.9 μg/kg，DON含量最高的是四川，为1.07 mg/kg。2)不同蛋禽饲料品种之间的4种霉菌毒素的含量差异均不显著(P>0.05)。3)不同规模饲料厂中的蛋禽饲料样品的AFB1含量差异显著(P<0.05)，其中AFB1含量最高的是小规模饲料厂(年产量<5万t)的饲料，为6.36 μg/kg。由此可见，我国西南地区的蛋禽配合饲料中AFB1、DON、ZON和FB的污染广泛，不同地区和不同规模饲料厂蛋禽饲料间的霉菌毒素含量存在差异。

关键词：蛋禽；配合饲料；霉菌毒素；西南地区；分布规律

霉菌毒素是不同产毒真菌经过一段时间生长产生的多种化合物[1]，其性质稳定，不易分解。据统计，全世界每年有25%的农作物遭到霉菌毒素的污染，造成了大量的人畜中毒死亡事件，经济损失达数千亿美元[2]。饲料中常见的霉菌毒素主要包括黄曲霉毒素B1(AFB1)、玉米赤霉烯酮(ZON)、呕吐毒素(DON)和伏马毒素(FB)等。近年来部分关于霉菌毒素的调查报告发现，我国部分地区的饲料原料及饲料产品中霉菌毒素的检出率达100%，且96%的饲料及其原料受到2种及

2种以上霉菌毒素的污染[3]。而目前对于西南地区的不同蛋禽配合饲料产品中的霉菌毒素污染分布规律还未见相关的报道。本研究旨在了解西南地区不同省市蛋禽配合饲料产品中的霉菌毒素分布规律、不同品种蛋禽配合饲料中霉菌毒素的分布规律及不同规模饲料厂蛋禽配合饲料中的霉菌毒素分布规律，并帮助企业对霉菌毒素进行污染防护，保障养殖动物及其产品安全，提供一定的科学依据。

1材料与方法

1.1样品采集

在2014年8—10月，从四川省、重庆市、云南省、贵州省和广西省的不同规模饲料厂里采集蛋小鸡、产蛋高峰期蛋鸡和产蛋高峰期蛋鸭的配合饲料共计95个样品。不同规模饲料厂包括：小规模饲料厂(年产量<5万t)、中规模饲料厂(年产量5万～10万t)、大规模饲料厂(年产量>10万t)。抽样方法严格按照《饲料采样》(GB/T 14699.1—2005)进行，每份样品不少于1 000 g，粉碎后过20目筛，样品在检测前置于-20 ℃下密封保存。

1.2样品分析

所有样品检测AFB1、ZON及DON含量，从中随机选取21个样品检测FB含量。样品检测时统一采用ROMER公司的酶联免疫吸附测定试验(ELISA)试剂盒进行初筛检测。由于ELISA不能准确定量[4]，因此初筛结果达到限量值80%以上的全部样品，再用高效液相色谱法(HPLC)(Agilent，美国)采用免疫亲和柱-高效液相色谱法进行检测。

1.3判定标准

限量值的判定标准详见表1，超过限量值判定为超标，表1中执行依据为引用该标准的限量值，低于检出限的为未检出。

表1　蛋禽配合饲料中霉菌毒素的限量标准和仪器检测方法

NY/T为行业标准，GB/T为国家标准。

NY/T was industry standard, and GB/T was national standard.

1.4数据统计及处理

数据按所有饲料、不同饲料种类、不同省市、不同饲料企业规模分别用SPSS 17.0 一般线性模型的GLM程序进行方差分析，含量结果用“平均值±标准差”表示，多重比较用Duncan氏法，P<0.05表示差异显著，P<0.01表示差异极显著。

2结果与分析

蛋禽配合饲料霉菌毒素检测结果见表2，4种霉菌毒素均检出，其中AFB1的检出率最低，为83.16%，DON、ZON和FB的检出率均在90%以上；超标率最高的是AFB1和ZON，均为3.16%，而DON和FB均无超标。变异范围最大的为AFB1，其次为ZON。

2.1不同品种蛋禽配合饲料的霉菌毒素污染情况

由表3可知，蛋鸡、蛋小鸡和蛋鸭配合饲料的AFB1的检出率分别为77.05%、85.71%和100.00%。蛋鸭饲料中AFB1超标率最高，为10%，蛋鸡饲料中无AFB1超标样品。蛋鸭饲料中AFB1的含量最高，达到6.43 μg/kg；AFB1含量最低的是蛋小鸡饲料，为3.17 μg/kg，3种饲料中AFB1的含量间无显著差异(P>0.05)。从DON来看，蛋禽配合饲料中的DON检出率均在90%以上，其中蛋小鸡饲料中DON的检出率达到100.00%，但所有蛋禽饲料中均无DON超标。3种饲料之间的DON含量差异不显著(P>0.05)。对于ZON，蛋鸡、蛋小鸡和蛋鸭饲料中ZON的检出率均在92%～95%，蛋鸭和蛋鸡饲料中ZON超标率分别为5%和3.28%，而蛋小鸡饲料无超标。不同品种蛋禽饲料中ZON含量无显著差异(P>0.05)。而对于FB，除蛋小鸡饲料仅1个样品外，蛋鸡和蛋鸭饲料中FB检出率均达到100.00%，但是超标率均为0，二者FB含量无显著差异(P>0.05)。

表2　蛋禽饲料霉菌毒素污染检出情况

平均值为所有样品的平均值，未检出的样品含量按照0计算；检出率=超过检出限的样品数/总样品数；超标率=超过限量值的样品数/总样品数。

Average value was the average of all samples, the content of undetected samples was 0; detection rate=number of samples exceeding the limit of detection/total number of samples; over-limit rate=number of samples exceeding the limit value/total number of samples.

表3　不同品种蛋禽配合饲料中霉菌毒素污染检出情况

同种毒素同行数据肩标不同小写字母表示差异显著(P<0.05)，不同大写字母表示差异极显著(P<0.01)，相同或无字母表示差异不显著(P>0.05)。下表同。

Different letter superscripts in the same row of the same toxin mean significant difference (P<0.05), and with different capital letter superscripts mean significant difference (P<0.01), while with the same or no letter superscripts mean no significant difference (P>0.05). The same as below.

2.2西南地区不同省市蛋禽配合饲料的霉菌毒素污染情况

如表4所示，蛋禽配合饲料中AFB1以重庆的检出率(100.00%)和超标率(15.38%)最高，而云南、广西和贵州的检出率均高于四川，但均无超标样品；四川的检出率和超标率分别为75.00%和2.08%。重庆的AFB1平均含量极显著高于其他4个地区(P<0.01)。而蛋禽配合饲料中四川和贵州的DON检出率达到100.00%，但均未超标。四川饲料的DON含量最高，为1.07 mg/kg，极显著高于广西(P<0.01)，而其他地区饲料的DON含量差异均不显著(P>0.05)。

表4　不同地区蛋禽配合饲料中AFB1和DON的污染检出情况

由表5可知，贵州和云南饲料中ZON的检出率达到100.00%，其他地区的检出率均在80%以上。云南的超标率最高，为5.88%，其次是四川(4.17%)，其他地区均无超标样品。贵州饲料中ZON的含量(0.20 mg/kg)最高，广西饲料中的ZON含量最低，显著低于四川、贵州和云南(P<0.05)，而其他地区之间差异不显著(P>0.05)。从FB污染情况来看，除贵州外蛋禽配合饲料中FB检出率均为100.00%，但超标率为0。从饲料中FB的含量来看，四川最高(1.11 mg/kg)，广西最低(0.4 mg/kg)，各个地区之间差异不显著(P>0.05)。

2.3不同规模饲料企业的蛋禽配合饲料中的霉菌毒素污染情况

由表6可知，大、中、小规模饲料厂的蛋禽配合饲料中AFB1检出率均在80%以上，其中大规模饲料厂AFB1检出率最低，且无超标；中规模饲料厂AFB1检出率最高，但超标率低于小规模饲料厂；小规模饲料厂AFB1检出率略高于大规模饲料厂，但超标率最高，为7.14%。从AFB1的平均值来看，总体趋势是小规模饲料厂>中规模饲料厂>大规模饲料厂，其中小规模饲料厂与大规模饲料厂间差异显著(P<0.05)。3种规模饲料厂饲料中蛋鸭饲料中AFB1的含量均最高，特别是中规模饲料厂。

由表7可知，3种规模饲料厂蛋禽饲料中DON的检出率均在90%以上，但均未超标；各种规模饲料厂饲料中DON的含量差异不显著(P>0.05)。小、大规模饲料厂饲料中蛋小鸡饲料中DON含量均最高。

表5　不同地区蛋禽配合饲料中ZON和FB的污染检出情况

表6　不同规模饲料厂的蛋禽配合饲料中AFB1的污染检出情况

表7　不同规模饲料厂的蛋禽配合饲料中DON的污染检出情况

由表8可知，中等规模饲料厂蛋禽饲料中ZON的检出率达100.00%，而小、大规模饲料厂中ZON的检出率分别是89.29%和95.65%。中等规模饲料厂饲料ZON超标率最高，为4.76%，大规模饲料厂饲料中ZON超标率最低，为2.17%。3种规模饲料厂饲料中ZON的含量之间均差异不显著(P>0.05)。小规模饲料厂饲料中蛋鸭饲料中ZON的含量(0.24 mg/kg)最高。

由表9可知，各种规模饲料厂蛋禽饲料的FB检出率均高达100.00%，但均未超标。中等规模饲料厂饲料中FB含量(1.03 mg/kg)最高，小规模饲料厂(0.6 mg/kg)最低，但3种规模饲料厂饲料中FB含量之间均差异不显著(P>0.05)。

3讨论

本次调查共检测了来自西南5个省市的95个蛋禽配合饲料样品，4种霉菌毒素的检出率均较高，其中DON、ZON和FB的检出率均在90%以上，而AFB1检出率最低，也在80%以上。但仅AFB1和ZON超标，超标率均为3.16%。由此表明，不同种类的蛋禽饲料中霉菌毒素的含量不同，不同地区和不同规模饲料厂的饲料中霉菌毒素的含量也有差异。

3.1蛋禽饲料种类对霉菌毒素含量的影响

蛋鸡、蛋小鸡和蛋鸭饲料中AFB1、DON、ZON和FB的污染情况各不相同，从AFB1的污染情况来看，蛋鸡、蛋小鸡和蛋鸭配合饲料的AFB1的检出率分别为77.05%、85.71%和100.00%。而张自强等[5]、敖志刚等[6]和王若军等[7]报道，配合饲料中AFB1的检出率均在90%以上。从AFB1的超标率来看，超标率最高的是蛋鸭配合饲料，其次是蛋小鸡配合饲料，蛋鸡饲料中无AFB1超标样品。这可能是3种饲料AFB1的限量标准不同，与蛋鸡配合饲料的限量标准(≤20 μg/kg)相比，蛋鸭配合饲料的限量标准(≤15 μg/kg)更严格，而蛋小鸡(≤10 μg/kg)对AFB1的耐受力很低，因此对原料的选择更严格，所以超标率最低。张自强等[5]报道家禽配合饲料中AFB1的超标率为7.78%，本研究结果与之一致。王若军等[7]报道的配合饲料中AFB1的超标率为0，本研究结果与之不一致，可能是因为抽样地区和饲料品种不同。张自强等[5]报道家禽配合饲料的AFB1的平均含量为9.49 μg/kg，王若军等[7]报道全价饲料中AFB1的平均含量为8.27 μg/kg。本研究发现，西南地区饲料产品AFB1的平均含量为4.09 μg/kg，低于前人的报道，这可能与监管部门加强了对饲料原料中AFB1的监管力度有关。

表8　不同规模饲料厂的蛋禽配合饲料中ZON的污染检出情况

蛋小鸡、蛋鸭和蛋鸡配合饲料的DON检出率均高，但均未超标，三者含量无显著差异。本次调查中发现蛋禽配合饲料产品中的DON平均含量明显低于王金勇等[8]2013年调查结果，分析可能因为2012年爆发了小麦赤霉病有关。

李荣涛等[9]2004年对小麦和玉米中ZON研究发现，小麦和玉米中ZON的阳性检出率均达到100.00%；程传民等[10]2014年研究发现，我国不同种类的饲料产品中ZON的检出率有很大差异。本次研究结果与之一致。本次研究结果发现，不同种类的蛋禽配合饲料中ZON的检出率达到90%以上，其中蛋鸭和蛋鸡饲料超标。各类蛋禽配合饲料的ZON含量是0.15～0.18 mg/kg，低于王金勇等[11]2013年调查结果，可能是因为饲料样品的来源不同。黄广明等[12]2010年统计了2008、2009和2010年全价饲料的ZON含量分别为0.14、0.22和0.16 mg/kg。本次研究结果与之基本一致。蒋惠岚等[13]2011年用ELISA法对广西地区的不同种类的配合饲料中的ZON进行检测发现，禽配合饲料中ZON的平均含量为0.34 mg/kg，高于本次调查结果(0.17 mg/kg)，可能是因为检测方法不同有关，ELISA检测法的假阳性缺陷导致整体试验结果较高。

蛋鸡和蛋鸭配合饲料中FB的检出率均为100%，但均未超标，平均含量为0.75 mg/kg。王金勇[14]2012年对全球饲料中霉菌毒素进行调查发现，全价饲料中FB的检出率为64%，平均含量为0.86 mg/kg，和本次研究结果不一致，可能是因为饲料的来源和品种不同。

表9　不同规模饲料厂的蛋禽配合饲料中FB的污染检出情况

3.2不同省市对蛋禽饲料中的霉菌毒素含量的影响

四川、重庆、贵州、云南和广西地区气候情况各不相同，因而不同地区的饲料中霉菌毒素的含量也各不相同。刘兴玠等[15]报道，在我国17省的粮食中黄曲霉菌产毒菌株比例各不相同，因此产毒含量也各不相同，存在地区差异。张自强等[5]报道，我国11个省的饲料中AFB1分布具有地域差异。本次研究结果与前人报道一致。蛋禽配合饲料中AFB1以重庆的检出率(100.00%)、超标率(15.38%)和含量最高，云南、广西和贵州的检出率均高于四川，但均无超标样品；四川的检出率和超标率分别为75.00%和2.08%。AFB1是仓储性毒素，其产毒菌黄曲霉的生长、产毒与环境气候条件密切相关，在一定范围内表现为温度越高、相对湿度越高，黄曲霉生长越旺盛[16]。重庆蛋禽配合饲料产品的AFB1含量和超标率较高的原因可能是重庆夏季温度高，秋季多雨，空气湿度大，更利于黄曲霉的生长。

Seyfort Ruegg 1981: David Seyfort Ruegg, The Literature of the Madhyamaka School of Philosophy in India, Wiesbaden: Otto Harrassowitz.

甄阳光等[17]2009年对全国11省市饲料原料和产品中DON的调查表明，北方地区的DON含量较高，存在地域差异。程传民等[18]2013年调查小麦类饲料原料发现全国七大区域饲料中DON的污染情况也各不相同。本研究表明，四川蛋禽饲料产品中的DON含量极显著高于广西。DON是一种田间毒素，生长需要合适的温度、湿度、氧气和能量。当谷物的水分含量为22%、湿度为85%左右、温度为20 ℃时，谷物即产生大量的DON[19]。和其他四省相比，四川地区的作物播种、生长、收货时的温度和湿度最适合DON的生长和产毒，因此四川的蛋禽配合饲料中DON污染最严重。

广西蛋禽配合饲料ZON的检出率和平均含量均最低，这可能与广西的气候有关，广西秋季干燥少雨，不利于镰刀菌的生长，而四川、重庆、云南、贵州全年降雨量偏多，因此蛋禽配合饲料中ZON的污染相对严重，这与雷元培等[20]的研究一致。程传民等[10]对全国地区的饲料原料中ZON的调查发现，除了东北地区以外，其他地区的超标率均在10%左右。西南地区的蛋禽饲料产品ZON虽然检出率较高，但是超标率仅为3.16%，这表明西南地区的饲料产品的ZON的污染远低于全国饲料原料水平，可能是为了保证生产出合格的饲料产品，饲料企业对饲料原料进行了筛选。

FB广泛存在于世界各地的玉米、小麦、高粱等农作物中，其含量的高低与气候、种植及储存条件有关[14]。何树森等[21]研究表明，我国四川地区玉米中FB污染水平明显高于其他地区。与之相似，本次研究发现四川省的蛋禽配合饲料中FB含量高于重庆、云南和广西，这可能是由于四川地区湿度大、气候温和，有利于FB的产生。Ogunlade等[22]研究表明，饲料FB含量在15.2 mg/kg以下不影响蛋鸡生长、产蛋能力及鸡蛋的营养价值。本次调查表明蛋禽配合饲料中FB的平均含量为0.75 mg/kg，因此就本次的调查结果来看，蛋禽配合饲料中FB的含量在安全水平以下。

3.3不同规模饲料厂的蛋禽配合饲料间霉菌毒素差异分析

本次研究结果发现，除了不同规模饲料厂的蛋禽配合饲料中DON和FB污染情况差异不明显外，中小规模饲料厂蛋禽配合饲料中AFB1和ZON的污染情况比大规模饲料厂的严重，这可能是因为大规模饲料厂的资金较充足，对饲料原料的选取和监控比小规模饲料厂要严格，小规模饲料厂的资金缺乏，对原料和产品的监控力度相对不足。

4结论

① 西南地区蛋禽配合饲料检出霉菌毒素AFB1、ZON、DON和FB，检出率分别为83.16%、94.74%、93.68%和100.00%，AFB1和ZON的超标率均为3.16%，而DON和FB未超标；平均含量分别是4.09 μg/kg、0.17 mg/kg、0.86 mg/kg和0.75 mg/kg。

② 蛋禽饲料中霉菌毒素含量随着饲料种类、地区和饲料厂规模的不同而变化，其中蛋鸭饲料中AFB1的含量最高，蛋小鸡饲料中DON含量最高；重庆饲料中AFB1含量最高，四川饲料中DON含量最高，贵州饲料中ZON含量最高；小规模饲料厂饲料中AFB1的含量最高，中规模饲料厂中FB含量最高，各规模饲料厂的DON和ZON含量接近。

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(责任编辑武海龙)

Mycotoxin Distribution of Layers Feed in Southwest China

LI Yaling1WANG Jianping1LI Yun2DING Xuemei1BAI Shiping1ZENG Qiufeng1CHENG Chuanmin2GAO Qingjun2BAI Fan2*ZHANG Keying1*

(1. Institute of Animal Nutrition, Sichuan Agricultural University, Chengdu 611130, China; 2. Feed Products Quality Monitoring Center of the Agricultural Ministry of China (Chengdu), Chengdu 610041, China)

Abstract:The objective of this survey aim to study the mycotoxins contamination of layers feed in southwest area of China. A total of 95 feed samples from different area (Sichuan, Chongqing, Guizhou, Guangxi and Yunnan) of southwest were obtained to determine the contents of aflatoxin B1 (AFB1), zearalenone (ZON), deoxynivalenol (DON) and fumonisin (FB). Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) was initially used for determination. Then, some samples would be detected by high performance liquid chromatography (HPLC) if the mycotoxins content was beyond 80% of the national limited standard. The results showed as follows:1) the detection rates of AFB1, DON, ZON and FB in layer’s feeds were 83.16%, 93.68%, 94.74% and 100.00%, respectively. The over-limit ratio of AFB1 and ZON was 3.16%, respectively, while DON and FB were not observed to exceed the limits. The average content of AFB1, DON and ZON in layer’s feed of different province/city was significantly different (P<0.01), with the Chongqing had the highest content of AFB1 (10.9 μg/kg), Sichuan had the highest content of DON (1.07 mg/kg). 2) The average content of four mycotoxins had no significant difference in different feed type (P>0.05). 3) The content of AFB1 of layer’s feed was observed to be different in different production scale company (P<0.05), and the small-scale feed company (less than 50 000 t per year) had higher content of AFB1(6.36 μg/kg). It is concluded that in southwest of China, the contamination of AFB1, DON, ZON and FB are relative low in layer’s feed, but the contents of these four mycotoxins are different in different regions and different scale enterprises.[Chinese Journal of Animal Nutrition, 2016, 28(1)：172-181]

Key words:layer; feed; mycotoxins; southwest region; distribution

*Corresponding authors: BAI Fan, professor, E-mail: baifan-111@163.com; ZHANG Keying, professor, E-mail: zkeying@sicau.edu.cn

中图分类号：S816.33

文献标识码：A

文章编号：1006-267X(2016)01-0172-10

作者简介：李雅伶(1990—)，女，安徽宿州人，硕士研究生，从事动物营养与饲料科学专业研究。E-mail: 1442118326@qq.com*通信作者：柏凡，研究员，硕士生导师，E-mail: baifan-111@163.com；张克英，教授，博士生导师，E-mail: zkeying@sicau.edu.cn

基金项目：农业部专项项目——饲料产品中霉菌毒素污染状况摸底调查；科技部及四川省科技厅科技支撑项目(2014BAD13B04,2014NZ0043)

收稿日期：2015-08-07

doi：10.3969/j.issn.1006-267x.2016.01.023