不同加工方法对杜仲桃叶珊瑚苷含量的影响

2016-04-27 02:39刘汇丽魏学军何鑫
中国民族民间医药 2016年5期
关键词:杜仲高效液相色谱法

刘汇丽 魏学军 何鑫

黔南民族医学高等专科学校药学系,贵州 都匀 558000



不同加工方法对杜仲桃叶珊瑚苷含量的影响

刘汇丽魏学军*何鑫

黔南民族医学高等专科学校药学系,贵州都匀558000

【摘要】目的:比较不同加工方法对杜仲桃叶珊瑚苷含量的影响,为杜仲的产地加工提供科学依据。方法:采用高效液相色谱法测定桃叶珊瑚苷量,色谱条件:Diamonsil C(18)色谱柱(250 mm × 4.6mm,5 μm),流动相甲醇-水溶液(10∶90),检测波长203nm,柱温25℃,流速1.0mL/min,进样量10μL。结果:不同加工方法杜仲桃叶珊瑚苷含量有差异。同一干燥方法,未发汗杜仲桃叶珊瑚苷量高于发汗杜仲;同一性状,烘干、晒干、阴干三者间桃叶珊瑚苷量具显著差异,以烘干最高,晒干次之,阴干最低;不同性状,板片状以100℃烘干、宽丝状以 60℃烘干含量最高。结论:不同加工方法对杜仲桃叶珊瑚苷含量影响显著,临床应用如以桃叶珊瑚苷的生物活性为主,结合实际生产,建议杜仲采用趁鲜切宽丝,不发汗,60℃烘干的产地加工方法。

【关键词】杜仲;桃叶珊瑚苷;高效液相色谱法;产地加工

杜仲为杜仲科植物EucommiaulmoidesOliv.的干燥树皮,广泛分布于我国西南部和长江中上游地区,是我国的特产经济药材,具有补肝肾、强筋骨、安胎的功效,临床多用于肾虚腰痛、筋骨无力、妊娠漏血、胎动不安、高血压症等[1]。贵州产杜仲因其资源丰富,疗效显著,被业内公认为杜仲的地道产地,与天麻、灵芝组成的“贵州三宝”,是馈赠访友的必备之品,具有极高的药用和经济价值。产地加工作为控制药材品质的关键技术,杜仲虽有《本草经集注》“采皮阴干”、去粗皮晒干[1]和去粗皮“发汗”后晒干[2]的记载,但标准并不统一,质控指标单一。现有加工方法的研究多以降压活性成分的松脂醇二葡萄糖苷作为考察指标[3-4],对其他活性成分和药理作用的影响未见报道。

杜仲的生物活性成分有木质素类、环烯醚萜类、黄酮类、多糖类及苯丙素类等,其所含桃叶珊瑚苷具有抗炎抗病毒、降血脂、抗氧化、抗疲劳、降压等广泛的药理作用[5-7],是杜仲的重要活性成分之一。研究以桃叶珊瑚苷为评价指标,考察不同性状、干燥方法及是否“发汗”对桃叶珊瑚苷含量的影响来探讨杜仲的产地加工方法,以期为全面评价和建立杜仲加工方法的质量标准体系提供科学依据。

1仪器与材料

1.1仪器LC-10ATvp高效液相色谱仪(日本岛津公司);AS10200A型超声波清洗机(杭州汇尔公司);IKA-RV10型旋转蒸发仪(德国IKA公司);2.0R型低速离心机(德国HERAEUS);DHG-9240A真空干燥箱(上海金山公司);AE240型电子天平(瑞士METTLER)。

1.2材料加工所用杜仲新鲜树皮(批号:150520)购自当地药农杜仲种植园,树龄均15年以上,经本校王传明副教授鉴定为杜仲科植物EucommiaulmoidesOliv.的干燥树皮。桃叶珊瑚苷对照品(批号:111761-200601,中国药品生物制品检定所),水为重蒸馏水,其他试剂均为AR级。

2方法与结果

2.1样品的制备将杜仲新鲜树皮刮去粗皮,加工制成板片和宽丝(长约 5cm,宽约 1cm)两种性状。分别将两种性状药材按发汗和未发汗进行处理后干燥,得样品A1~A10(见表1),各样品含发汗和未发汗两种二级样品,二级样品均制备 3批次备用。

2.2桃叶珊瑚苷的测定

2.2.1色谱条件色谱柱:Diamonsil C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相:甲醇-水溶液(10:90),检测波长:203 nm,柱温:25℃,流速:1.0 mL/min,进样量:10 μL。色谱图见图 1。2.2.2供试品溶液的制备[8]分别称取各样品不同批次杜仲药材约2 g,剪成碎片后揉成絮状,精密称取0.5 g置具塞锥形瓶中,加入甲醇25 ml,超声提取60 min,过滤,水浴挥干甲醇,加流动相溶解,微孔滤膜滤过,定容至10 ml容量瓶中,摇匀,即得供试品溶液。

2.2.3对照品溶液的制备精密称取桃叶珊瑚苷对照品12.0 mg,加流动相定容至10ml量瓶中,摇匀后即得对照品溶液。

2.2.4标准曲线的制备精密取1、5、10、15、20 μl对照品溶液按“2.2.1”项色谱条件进行测定,,以进样量为横坐标,峰面积为纵坐标作标准曲线,得线性方程为:Y= 111.610 1X- 37.8909,r= 0.9999。试验结果表明对照品在0.0012 ~ 0.0240 μg范围内与峰面积呈良好的线性关系。

2.2.5精密度试验取桃叶珊瑚苷对照品溶液5 μl,按“2.2.1”项下色谱条件连续测定5次,桃叶珊瑚苷峰面积的RSD值为1.37%。

2.2.6稳定性试验取桃叶珊瑚苷对照品溶液5 μl,按“2.2.1”项下色谱条件,分别在 0、5、10、20、30、60 min测定,桃叶珊瑚苷峰面积的RSD值为2.78%。

2.2.7重复性试验取 A1阴干未发汗第 1批次样品5份,按“2.2.2”项制备供试品溶液。取供试品溶液10 μl,按“2.2.1”项下色谱条件测定,桃叶珊瑚苷峰面积的RSD值为3.43%。

2.2.8加样回收率试验取已知含桃叶珊瑚苷量的A1阴干未发汗第1批次样品5份,加入适量桃叶珊瑚苷对照品,按“2.2.2”项制备供试品溶液。取供试品溶液10 μl,按“2.2.1”项下色谱条件测定,桃叶珊瑚苷平均回收率为 98.08%,RSD值为 3.14%。

2.2.9含量测定精密移取各样品不同批次提取所得供试品溶液10 μl,按“2.2.1”项下色谱条件操作并计算桃叶珊瑚苷量质量分数,测定值为 3批次的均值。结果见表 1。

表1 不同加工方法杜仲桃叶珊瑚苷含量比较 (n = ± s)

2.3结果分析

2.3.1杜仲“发汗”与“未发汗”对桃叶珊瑚苷含量的影响结果表明,两种性状药材采用同一干燥方法处理,“发汗”杜仲与“未发汗”杜仲的桃叶珊瑚苷量具有显著差异,“未发汗”高于“发汗”。究其原因,可能与植物细胞中酶的生物活性有关。同一干燥方法,“未发汗”药材在初期均较“发汗”药材水分的气化速率快,随着水分的快速散失,导致苷的分解酶生物活性部分失活,减少了苷类成分的分解,故桃叶珊瑚苷量较高;“发汗”药材,在覆盖物下保持数日,温度有所升高虽有利于内部水分向外部的溢出,但水分蒸发缓慢或未蒸发,对分解酶的活性影响不大,苷类成分的分解依然保持,因而桃叶珊瑚苷量较低。

2.3.2干燥方法对“未发汗”杜仲桃叶珊瑚苷含量的影响由表 1结果可知,两种性状药材均以阴干含量最低,桃叶珊瑚苷含量整体水平依次为:烘干>晒干>阴干。分析结果表明,同一性状药材采用不同干燥方法处理,烘干、晒干、阴干三者间桃叶珊瑚苷量具显著差异,原因可能与温度对苷分解酶的破坏有关。在一定的温度范围内,随着温度的升高,可使分解酶失活以减少苷的分解,同时对活性成分结构破坏较少。

2.3.3药材性状对杜仲桃叶珊瑚苷含量的影响两种性状药材,板片状以100℃烘干、宽丝状以60℃烘干含量最高,分析结果表明,两种加工方法桃叶珊瑚苷量无显著差异。板片状100℃烘干,一方面利于分解酶的破坏而减少苷类成分的分解,一方面由于直面高温的暴露面积较小(相对于宽丝状),因而对活性成分结构的破坏较少。宽丝状60℃烘干,可能既达到了杀酶保苷的目的,也减少了高温对活性成分结构破坏的效果。

3讨论

合理产地加工,可以保证药材品质,增强药物疗效。2010版药典记载杜仲的加工方法是去粗皮,发汗后晒干。王丽楠等[3]研究表明,就降压作用而言,杜仲采用发汗的加工方法是可行的。刘圣金等[4]研究发现,杜仲发汗后对不同活性成分的含量有影响,可提高醇溶性、水溶性成分含量,而松脂醇二葡萄糖苷含量降低。由于中药活性成分较多,各活性成分的药理作用差异较大,临床治疗症候不同,如单一采用药典法进行加工,可能会影响不同活性成分含量,难以发挥各活性成分应有的疗效,因而有必要针对不同活性成分开展加工方法研究。

本次研究结果显示,不同性状、干燥方法及是否发汗对杜仲桃叶珊瑚苷含量有影响。桃叶珊瑚苷含量未发汗杜仲高于发汗杜仲,表明如采用药典法进行发汗加工处理,则桃叶珊瑚苷含量较低。不同干燥方法,以烘干含量整体水平高,晒干次之,阴干最低,故不宜采用《本草经集注》“采皮阴干”的加工方法。两种性状,板片状以 100℃烘干、宽丝状以 60℃烘干含量最高,两种加工方法无显著差异。

综上所述,杜仲临床应用如以桃叶珊瑚苷类活性成分的生物活性为主,结合实际生产中新鲜药材便于切制而生药切制不便的特点及高温对成分结构的破坏,建议杜仲采用趁鲜切宽丝,不发汗,60℃烘干的产地加工方法,不宜采用药典记载的发汗后晒干和“采皮阴干”的加工方法。实际生产中,考虑到设备成本、操作技术等原因,在不发汗的前提下,采用操作简单、低成本的干燥方法晒干是否可行,有待研究人员结合药效学研究进一步确定。

参考文献

[1]国家中医药管理局(中华本草)编委会. 中华本草第5卷[M]. 上海:上海科学技术出版社,1999:458-462.

[2]国家药典委员会. 中华人民共和国药典(一部)[S]. 北京:中国医药科技出版社,2010:154.

[3]王丽娜,杨美华. 传统发汗方法对杜仲降压作用的影响[C]. 北京:中国药学大会暨第十届中国药师周大会,2010.

[4]刘金圣,吴德康,狄留庆,等. 杜仲不同加工方法对其质量的影响[J]. 中医药信息,2007,14(12):39-4.

[5]王志宏,彭胜,雷明盛,等. 杜仲主要生物活性研究[J]. 天然产物研究与开发,2013,37(25):1302-1309.

[6]王健辉,刘永乐,李赤翎,等. 杜仲桃叶珊瑚苷对高脂小鼠血液流变学研究[J]. 天然产物研究与开发,2012,37(24):1186-1190.

[7]李旭,刘停,陈时建,等. 杜仲叶桃叶珊瑚苷提取工艺优化及对自发性高血压大鼠的降压作用[J]. 食品科学,2013,34(14):30-34.

[8]李伟,谢婷婷,覃洁萍,等. 杜仲不同采收期及不同部位中桃叶珊瑚苷的含量测定[J]. 天然产物研究与开发,2011,(23):283-285.

Comparison on the Content of Aucubin inEucommiaulmoidesOliv Processed by Different Methods

LIU HuiliWEI Xuejun*HE Xin

Department of Pharmacy in Qiannan Medical College for Nationalities, Duyun 558000,China

Abstract:Objective:To provide scientific basis for the processing method of Eucommia ulmoides Oliv by comparing the effect of different processing methods on the content of aucubin. Methods:Determine the content of aucubin in Eucommia ulmoides Oliv(EUO) by HPLC. A Diamonsil C18 column (4. 6 mm×250 mm,5 μm) was used for the analysis. The mobile phase was methanol-water(10∶90),the flow rate was 1. 0 ml/min,the detection wavelength was at 203nm,and the column temperature was 25℃. Results:Eucommia ulmoides Oliv processed by different methods, the content of aucubin in them was various. Living on the same drying methods,the content of aucubin in herbs without undergoing the diaphoretic process was higher than the herbs experienced it. Herbs in the same trait,with different drying methods,there were significant difference in the content of aucubin,and the content in the drugs dried by oven was higher than the drugs dried by exposure to the sunor inthe shade. Herbs in different trait,the content of aucubin in the plate-like EUO samples dried in the oven in 80℃and the wile-filamentous-like EUO samples dried in the oven in 60℃was both higherthan all other like samples. Conclusion:There were significant difference in the content of aucubin of different samples processed by different methods. In the clinical application,if we considered the biological activity of aucubin as a focus,we suggested the EUO should be processed in wile-filamentous-like without undergoing diaphoretic process and dried in the oven in 60℃.

Key words:Eucommia ulmoides Oliv;Aucubin;HPLC;Origin processing

(收稿日期:2015.12.21)

【中图分类号】R283.3

【文献标志码】A

【文章编号】1007-8517(2016)05-0010-03

作者简介:刘汇丽(1995-),女,2013级药学专业学生。E-mail:2862197947@163.com。通信作者:魏学军(1972-),男,教授,从事中药与民族药质量控制研究。E-mail:qndywxj@163.com。

基金项目:贵州省民族宗教委员会民族医药传统文化研究项目(黔族201364);黔南民族医学高等专科学校大学生创新资金项目(QNYZ201517)。

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