一例由PCV2感染引起母猪产木乃伊胎的诊断报告

徐 国，代振江，曾智勇，叶百川，刘 钊（贵州大学动物科学学院，贵州 贵阳 550025）



一例由PCV2感染引起母猪产木乃伊胎的诊断报告

徐 国，代振江，曾智勇*，叶百川，刘 钊
（贵州大学动物科学学院，贵州 贵阳 550025）

猪圆环病毒病感染是指由猪圆环病毒(PCV)引起的猪的一种传染病，其主要临床特征为母猪繁殖障碍、体质下降、消瘦、呼吸困难、贫血、黄疸、生长发育不良、腹泻、内脏器官及皮肤的广泛病理变化，特别是肾、脾脏及全身淋巴结的高度肿大、出血和坏死[1]。PCV分为PCV1和PCV2两个血清型，PCV2危害极大。猪圆环病毒自2000年由郎洪武等[2]在国内首次报道以来，全国各省(市)先后有PCV2 感染病例报道 。猪圆环病毒病在世界范围内广泛流行，给养猪业带来巨大危害，由PCV2引起的母猪流产、死胎、木乃伊胎等繁殖障碍疾病更应引起重视[3]。

2015年11月贵州省贵阳市某种猪场发生一起母猪繁殖障碍，送检的同窝胎儿既有木乃伊胎，也有死胎。据送检猪场描述的临床特征，初步判断与病毒感染有关。为筛查具体病原，实验室对送检木乃伊及死胎的组织混合样品分别对猪JEV(日本乙型脑炎病毒)、PPV (猪细小病毒)、CSFV(猪瘟病毒)、PRRSV (猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒)、PRV (猪伪狂犬病毒)和 PCV2(猪圆环病毒2型)6种常见病毒进行了病原核酸检测，现将相关检测及结果报道如下。

1　 材料

1.1病料

分别采自送检同窝木乃伊胎、死胎的组织混合病料(心、肝、脾、肺、肾、淋巴结等脏器和脑组织)，见图1。

图1　同窝送检胎儿

1.2主要试剂

TakaRa Mini BEST Viral RNA/DNA Extraction Kit Ver 4.0、Prime Script One Step RTPCR Kit Ver.2.0、DL2000；其他试剂均为国产分析纯。

2　 方法

2.1病料的处理及核酸的提取

采集送检胎儿组织混合样品，碾磨匀浆，反复冻融3次之后，12 000r/ min离心10 min，取上清，用TakaRa Mini BEST Viral RNA/ DNA Extraction Kit Ver 4.0试剂盒提取核酸。

2.2引物合成

相关引物为由本实验室所保存的参考据GenBank中关于PCV2、CSFV、PRRSV、PPV、PRV和JEV序列设计并合成的特异性引物[4]。

2.3病原核酸检测

参照一步法RT-PCR试剂盒说明书，对PCV2、CSFV、PRRSV、PPV、PRV和JEV进行检测。反应总体系为50 μL ：2×1 Step Buffer 25 μL，模板7.0 μL，上下游引物各1.0 μL，Prime Script 1 Step Enzyme Mix 2 μL，Release Free H2O 14 μL；反应条件均为：95 ℃5 min；94 ℃ 30 s，57 ℃ 30 s，72 ℃30 s，35个循环；72 ℃ 10 min。扩增产物经1%琼脂糖凝胶电泳检测。

3　结果

通过对送检样品进行病原核酸检测，结果见图2。电泳结果显示CSFV、PRRSV、PPV、PRV和JEV的检测结果均为阴性；对PCV2检测结果为阳性，扩增条带与预期的353bp扩增片段相符，表明送检死胎可能存在PCV2感染。

图2　病原检测结果

4　 讨论

PCV2、PPV、PRV、CSFV、PRRSV和JEV等都是引起母猪繁殖障碍疾病的主要因素。根据母猪繁殖障碍的特征，通常木乃伊胎更多的会考虑PPV(一般木乃伊胎的长度小于17 cm)和JEV(木乃伊胎大小不等) 这2种病毒，此外PRRSV、PRV也可见木乃伊胎，但更多是流产和产死胎，有资料显示，PCV2感染猪只后引起的繁殖障碍症状主要为流产、产死胎、木乃伊胎增多、断奶前死亡率上升等[5]。本次病原筛查PCV2呈阳性，该猪场发生的母猪繁殖障碍可能由PCV2引起。所以，养猪场应该对PCV2引起高度重视。据述，此次送检病样的猪场已对PCV2、PPV、PRV、CSFV、PRRSV和JEV进行了免疫，但未进行相应的抗体监测，而本次病原筛查结果也间接表明该猪场PCV2免疫失败。免疫失败的原因是多方面的，如疫苗的接种途径、用法用量和效价，动物应激，遗传因素，患免疫抑制疾病等。所以，养猪场应从多方面查找免疫失败的原因，采取措施提高抗体免疫水平，并定期进行疫苗免疫抗体水平的监测。引起母猪繁殖障碍疾病既有传染性因素，也有非传染性疾病因素，因此，建议发生该病的养猪场从饲养管理方式、饲料搭配、环境设施等多方面进行改进，使母猪繁殖障碍得到有效控制，提高母猪繁殖生育力，增加养猪生产经济效益。

参考文献

[1]陈溥言，兽医传染病学[M].5版，北京：中国农业出版社，2010.231.

[2]郎洪武，张广川，吴发权，等.断奶猪多系统衰弱综合征血清抗体检测[J].中国兽医科技，2000，30(3)：3-5.

[3]刘金鑫，孙孟娇，陈磊，等.猪圆环病毒研究进展[J].动物医学进展，2012，33(2)：94-97.

[4]ZENG Z，LIU Z，WANG W，et al.Establishment and application of a multiplex PCR for rapid and simultaneous detection of six viruses in swine[J].Journal of Virological Methods，2014，208：102-106.

[5]宣长和，猪病学[M].3版，北京：中国农业大学出版社，2010.177.

通讯作者：曾智勇（1978—），男，教授，博士，硕士生导师，从事动物传染病病原分子生物学研究:as.zyzeng@ gzu.edu.cn

[作者简介]徐国（1988—），男，在读硕士，研究方向：动物传染病病原分子生物学。E-mail:576144546@qq.com

[基金项目]省校合作计划项目,黔科合LH字[2014]7670号