唾液学检测技术在健康管理中的应用

樊福好（农业部种猪质量监督检验测试中心，广州 510520）



唾液学检测技术在健康管理中的应用

樊福好
（农业部种猪质量监督检验测试中心，广州 510520）

唾液(saliva)俗称口水(oral fluid)，是指由位于口腔内的腺体分泌的、包含多种活性酶、电解质和抗体、抗原在内的混合物，其中水分含量占99%以上。随着机体生理状态的改变，唾液的成分、浓度和黏度等变化往往较大。

研究唾液的组成、功能以及唾液状态改变规律的学科称为唾液学(Salivology)。

在中国古代的中医养生典籍中，唾液也被称为“金津玉液”，“华池神水”，可见唾液对生命活动的重要性，唾液对机体生理机能失衡的状态恢复也至关重要。因此，医学上日益重视唾液的研究，许多研究成果开始应用于临床实践。

唾液的主要作用包括以下几点：

1)唾液对食物的预消化作用

唾液中含有多种消化酶(如唾液淀粉酶、葡萄糖酶)，可以对进入口腔内的食物进行初步消化，减轻胃肠道的消化负荷，为胃肠道的消化做好准备。

2)唾液会产生对细菌和病毒的选择性消灭作用

在机体处于正常生理机能的情况下，唾液将对进入口腔内的细菌和病毒进行甄别并选择性杀灭(如艾滋病病毒、溶血性链球菌、伤寒杆菌、大肠杆菌及葡萄球菌)，唾液是机体防护的重要防线。

唾液中溶菌酶的活性逐渐被重视并应用与生产和临床。

3)唾液可以有效地消除霉菌毒素和农药残留

唾液中的过氧化氢酶等酶类可以对进入口腔内的真菌毒素(如黄曲霉毒素、赭曲霉毒素)进行瞬间降解和清除。

唾液还可以降解某些农用药物在食物和饲料中的残留。

唾液还可以消除机体产生的超氧自由基、亚硝基化合物、黄曲霉素和苯并芘，具备较好的抗癌作用。俗谚有云：“日咽口水三百口，保你活到九十九。”

4)唾液可以促进伤口愈合

唾液中的表皮生长因子、神经生长因子等可以促进伤口愈合，采集动物的唾液制成冻干品具有重要的医学价值，具备巨大的商业前景。

唾液中的腮腺激素还具备延缓衰老的作用，促进机体延年益寿。

5)唾液参与抗体的大循环

人和动物机体对病原的抵抗主要通过免疫学反应进行，进入机体的病原刺激机体产生的抗体在体内的循环主要有两个途径：大循环和小循环。

小循环是指抗体在血液中循环，大循环是指抗体在血液和唾液之间循环，故此，体内的抗体分为两种：小循环抗体(small circulating antibody)、大循环抗体(large circulating antibody)。

小循环抗体主要参与机体的免疫记忆反应，免疫保护活性较弱，甚至会产生对机体有害的反应(如登革热的糖蛋白抗体、蓝耳病的糖蛋白抗体和核蛋白抗体)。

大循环抗体主要参与机体的免疫保护反应，也是重要的免疫保护机制产生的基础，具备重要的生物防御意义(如环状病毒膜蛋白抗体和猪瘟E2蛋白抗体)。

据此，可以推断能够产生大循环抗体的疫苗才是优秀的生物制品(如我国的C株猪瘟苗)，而目前的猪蓝耳苗、伪狂犬疫苗、禽流感灭活疫苗、口蹄疫灭活疫苗等均不能产生有效的大循环抗体，免疫效果较差。

6)唾液是判断机体健康状态的重要样本

1853年开始，苏格兰人亚历山大·伍德申请了针头和注射器的专利，人类开始使用注射器，用注射器进行血液采集成为医学上的主要标本采集来源，血液学检测在医学上发挥了重要作用。但由于血液采集是一种侵入性采集方法，对机体造成巨大伤害，全球每年由于使用注射器造成的死亡人数达上百万之多，针头恐惧症(needle phobia)已经成为医学上的一大问题。

因此，发展一种新的、非侵入性-无创性(non-invasive)样本采集方法具备巨大的医学潜力和价值。在众多的体液(尿液 、羊水、粪便、汗液、眼泪)检测方法中，唾液学研究技术脱颖而出，该技术具备样本采集方便、对机体的生理和心理无损害、可检测内容丰富，样本内的成分相对稳定、蛋白和脂类含量低等特点。

表1　某猪群唾液中猪瘟抗体的检测结果 %

表2　某猪群唾液中环状病毒抗体的检测结果

表3　某保育猪群的活度检测结果

表4　某生长猪群的活度检测结果

到目前为止，唾液中发现了至少600种以上的活性酶类，这些酶可以作为判断机体健康状态的重要指标。其中碱性磷酸酶、酸性磷酸酶、唾液淀粉酶等均可作为机体活性的指示酶类。唾液检测的项目包括电解质、激素、药物、抗体、抗原和感染因子等。

对猪群的研究发现，用PCR方法检测唾液中的环状病毒，检出率高出血清学方法300%以上，检测猪群唾液中的猪瘟抗体和环状病毒(圆环病毒)抗体具有明显的优势，CV%值较小，检测结果稳定。

机体活度(Activity)是评价机体对外界环境缓冲能力的重要指标，其数值范围在0.0～1.0之间。活度越高，机体越健康；活度越低，机体越容易生病。

附1：机体活度（Activity）检测

唾液是机体口腔内腺体(腮腺、颌下腺和舌下腺)分泌的重要液体，其成分随着机体健康状态的改变而改变，尤其是唾液中酶的量和酶活性是机体活力状态改变的重要指针，测定唾液中酶的活性具有重要的临床指导意义。

唾液中酶的活性受到唾液分泌量的影响而变动较大，加之酶的活性还受到唾液pH、唾液中矿物质及食物残渣的影响而不断波动，所以测定唾液中的酶活性具有很强的不确定性。通过配制特殊的颜色反应液选择性作用于唾液中的特异性酶，通过颜色改变来确定酶活性，实现酶活性测试的数量化具有重要的实践意义。

本试剂盒中含有唾液中几种重要酶(溶菌酶、唾液淀粉酶、过氧化物酶、碱性磷酸酶、酸性磷酸酶、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶、丙酮酸激酶、谷胱甘肽还原酶等)作用的相应底物，底物产生的分解物使特定组合的色原物质发生颜色的改变，通过测定光密度值来确定唾液中酶的总活性，以此标示机体的活性状态(活度)。

本试剂盒中含有阳性对照(0.5 mL)、阴性对照(0.5 mL)、反应液A(1 mL)、反应液B(20 mL)，微孔反应板(96孔，可拆卸)1块。

所有试剂置于4 ℃冷藏、避光保存。有效期180 d。

所有试剂禁止接触皮肤、眼睛等部位，建议戴保护手套进行实验操作。

1)唾液的准备：停止采食和饮水6 h以上(或：过夜)，采用专用的唾液采集袋收集人或动物的唾液1 mL左右，10 000 r/min，离心1 min，上清备用(冷冻)。

检测时，样本需室温条件下回温30 min。

2)反应板的准备：根据样本的数量，取微孔反应板1块或若干条。

3)加样：第1、2孔加入阴性对照液10μL；第3、4孔加入阳性对照液10μL；其余各孔分别加入唾液样本10μL。

4)在上述每孔中(阴性对照、阳性对照、样品)分别加入反应液A10μL、反应液B180μL(反应孔内溶液最终体积200μL)。

5)读板：加入反应液B 10 min时立即采用630 nm滤光片读取微孔反应板各孔的OD值。

判断：阴性对照小于0.05，阳性对照大于0.9，则反应成立。

样本OD值减去阴性对照OD值作为机体的活度值，阴性孔的OD值较小时，可以忽略不计。

活度=ODS-ODN(为计算方便，当阴性对照值较小时，可以直接用样本OD值代表活度值)

生理意义：机体的活度值越高，活性越高，机体抵抗力强，疾病后恢复较快。若活度值小于0.4，则机体抵抗力弱，疾病后恢复较慢。

眼观判断：深蓝色：抵抗力强；浅蓝色：抵抗力弱。

附2：机体寒度（Cold）检测

本试剂盒中含有唾液中几种重要酶(溶菌酶、唾液淀粉酶、过氧化物酶、碱性磷酸酶、酸性磷酸酶、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶、丙酮酸激酶、谷胱甘肽还原酶等)作用的相应底物，底物产生的分解物使特定组合的色原物质发生颜色的改变，通过颜色改变来确定机体的体质。通过配制特殊的颜色反应液选择性作用于唾液中的特异性酶，通过颜色改变来确定酶活性，而其中某些酶的活性与机体的体质有直接的关系。

本试剂盒中含有阳性对照(0.5 mL)、阴性对照(0.5 mL)、反应液A(1 mL)，反应液B(20 mL)，微孔反应板1块(96孔，可拆卸)。

所有试剂置于4 ℃冷藏、避光保存。有效期180 d。

所有试剂禁止接触皮肤、眼睛等部位，建议戴保护手套进行实验操作。

1)唾液的准备：停止采食和饮水6 h以上(或：过夜)，采用专用的唾液采集袋收集人或动物的唾液1 mL左右，10 000 r/min，离心1 min，上清备用(冷冻)。

检测时，样本需室温条件下回温30 min。

2)反应板的准备：根据样本的数量，取微孔反应板1块或若干条。

3)加样：第1、2孔加入阴性对照液10μL；第3、4孔加入阳性对照液10μL；其余各孔分别加入唾液样本10μL。

4)在上述每孔中(阴性对照、阳性对照、样品)分别加入反应液A10μL、反应液B180μL(反应孔内溶液最终体积200μL)。

5)读板：加入反应液B 10 min时立即采用630 nm滤光片读取微孔反应板各孔的OD值。

判断：阴性对照小于0.05，阳性对照大于0.9，则反应成立。

以样本OD值减去阴性对照OD值作为机体的寒度值。

寒度=ODS-ODN(为计算方便，当阴性对照值较小时，可以直接用样本OD值代表寒度值)

生理意义：机体的寒度值越高，寒性越高，机体呈寒凉体质。

若寒度值小于0.4，则机体呈温热体质。处于寒凉体质的机体，不能使用寒凉药物；处于温热体质的机体，不得使用温热药物。

热性体质：0.0～0.2；温性体质：0.2～0.4；中性体质：0.4～0.6；凉性体质：0.6～0.8；热性体寒：>0.8。

眼观判断：深蓝色：寒凉体质；浅蓝色或无色：温热体质。

(收稿日期：2015-12-14)