喀什红枣病害致病菌分离鉴定及药剂防治研究

宋开艳，孙涛，何健，任玲

1.喀什地区林业技术推广站2.喀什地区林业有害生物防治检疫局，新疆喀什844000

喀什红枣病害致病菌分离鉴定及药剂防治研究

宋开艳1，孙涛2，何健1，任玲2

1.喀什地区林业技术推广站2.喀什地区林业有害生物防治检疫局，新疆喀什844000

由于喀什地区农民栽培管理技术的不到位及投入不足，导致部分红枣园内红枣果实病害发生，严重制约着喀什地区红枣产业的发展和林农增收。本文通过对红枣病害的致病菌分离鉴定和室内药剂防治的效果研究，了解红枣黑斑病、缩果病的发病原因和规律，筛选出有效的防治药剂并进行推广应用，为今后红枣病害研究提供理论依据。

喀什；红枣；致病菌；分离；防治研究

喀什位于新疆南部，具有充足的光热资源，无霜期长，昼夜温差大，降雨少，气候干燥等独特的气候条件，适宜红枣产业快速发展。目前全地区红枣种植面积已达200万亩，但近几年，由于喀什地区降水逐步增多，红枣直播建园矮化密植栽培模式广泛采用，农民栽培管理技术不到位，投入不足，导致部分枣园红枣果实病害严重发生，尤其骏枣果实发病率高达50%以上。通过目前初步判定的红枣果实病害主要有黑斑病、缩果病、裂果病等，这些病害如不及时有效控制，将严重制约着喀什地区红枣产业的发展和林农增收。本文通过致病菌分离鉴定和室内药剂防治效果研究，了解红枣黑斑病、缩果病的发病原因和规律，筛选出防治红枣黑斑病、缩果病的有效药剂进行推广应用，为今后红枣病害研究提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 材料

红枣品种：灰枣和骏枣。

品种来源：疏勒县、岳普湖县、麦盖提县等地的枣园。

1.2 方法

1.2.1 原料的预处理

采回的红枣样品，用温水清洗干净后放入冰箱保鲜层存放。

1.2.2 病原菌的分离

采用组织块分离法。挑选红枣病果10个进行组织分离，用70%酒精进行表面消毒，然后用无菌水进行冲洗3次放入超净工作台上。在无菌工作台中，用解剖刀在病健交界处切取果实组织0.5 cm2先放人70%的酒精中lmin，再放入升汞中3 min进行消毒，最后用无菌水进行表面冲洗3次后再植入PDA上，置于27℃恒温箱中培养23d，当培养出的菌落生长到直径为1cm时，用接种针在菌落边缘挑取少量菌丝植入另一PDA上培养，重复上述操作即可作为纯化菌种备用。

1.2.3 致病性鉴定

（1）把分离纯化的菌株返接在红枣果实上的准备：选取健康无病果实，用清水洗净后再用70%酒精浸泡1min，用无菌水冲洗后，放在超净工作台上吹干备用。每个菌株接种在5个健康红枣果实上，并且分为有伤、无伤以及空白对照。（2）接种所用病原菌的制备：挑选在PDA上培养4～5d的新鲜菌株，用打孔器（直径为5mm）打菌饼。（3）返接试验：把已纯化的菌株接种在健康果实上，分有伤和无伤2种接种方式。通过接种观察病斑发展速度与发病程度，判断菌株致病能力的大小。有伤接种方式：先在每个葡萄果粒上分别用接种针刺破5个孔眼可集中在一起使直径约为5mm；再把病原菌株接种在伤口处，分别在25℃和5℃条件下培养4～5d。无伤接种方式为取健康红枣果实直接接种，分别在25℃和5℃条件下培养4～5d。

1.2.4 返接后培养

把接种后的果实放人250mL烧杯内培养，盖口用八层纱布盖住并用绳子系紧，可以起到保湿、密封、透气、防污染的作用。

1.2.5 病原茵鉴定

把分离到的各种菌株重新接种在寄主果实上，如果发病症状与贮运中腐烂症状相符合，才能作为采后病害病原菌，然后进一步鉴定到属种。根据各致病菌株在PDA上的菌落特征，分生孢子及分生孢子梗形态特征进行鉴定，并且挑取少量菌丝进行镜检，然后根据形态特征，参照有关鉴定手册鉴定到属[1-4]。

1.2.6 防治药剂的筛选

采用平皿生长速率法筛选药剂。80%代森锰锌可湿性粉剂、40%腈菌唑可湿性粉剂、24%腈苯唑悬浮剂、78%波尔·锰锌（波尔多液48%、代森锰锌30%）、福星（氟硅唑乳油）等5种药剂与PDA培养基混合稀释成不同浓度（表1）倒入培养皿中，在PDA平板中接种一个病原菌饼，25℃恒温培养，逐日观察并记录结果。

2 结果与分析

2.1 致病菌的分离与鉴定

根据菌株的培养形态特征和致病力测定结果，依据真菌分离物在PDA培养基上的菌落特征，显微镜下观察到的分生孢子及分生孢子梗形态特征，参照《真菌鉴定手册》，初步确定引起红枣黑斑病和缩果病的病原菌为细链格孢菌lternaria alternate（Fr.）。

2.2 黑斑病和缩果病症状及发病规律

2.2.1 黑斑病

8月份果实开始初显症状，病斑凹陷，深褐色至黑色，直径3～5mm，扩展较慢，遇到雨水较多的天气，病果将会大量出现，尤其发生裂果的果实发病最为迅速，并组织呈倒半圆形，深入果肉3～5 mm，病斑表面长长出黑色霉状物。采收后保险贮藏或晾晒期感病的，病斑出现的部位不确定，发病较为迅速。

2.2.2 缩果病

在幼果期和果实膨大期开始发病，平均气温达到23～26℃时为盛发期，若遇到多雨潮湿天气，易暴发成灾[5]。发病初期，现在肩部形成不规则的变色斑，边缘清晰，进而果皮呈水渍状斑块，土黄色，病果逐渐失水而发软萎缩。果肉初为浅土黄色小斑块，逐渐向果肉深层延伸，严重时整个果肉变为黄褐色，组织呈海绵状坏死，味苦。果柄变为褐色或黑褐色，提前形成离层而脱落。被侵害果实的症状通常有晕环、水渍、提前着色、萎缩和脱落5个阶段[6]。

2.3 病原菌侵入途径和致病温度

通过致病力测定和返接实验，发现细链格孢菌在有伤和无伤条件下均可侵入组织，潮湿环境发病最为严重，低温和高温状态下均可致病。

2.4 防治药剂的筛选

经平皿生长速率法进行筛选，发现40%腈菌唑可湿性粉剂2000倍液和福星（氟硅唑乳油）8000倍液对致病菌的抑菌效果最好，抑菌率为96%，78%波尔·锰锌抑菌500倍液抑菌效果最差，抑菌率为51.38%。详见表1。

表15 种稀释成不同梯度的药剂对致病菌的抑制效果

3 结论与讨论

研究发现细链格孢菌Alternariaalternate能引起红枣果实黑斑病和缩果病。通过展开室内药剂筛选试验得出，40%腈菌唑可湿性粉剂2000倍液和福星（氟硅唑乳油）8000倍液对致病菌的抑菌效果最好，适合大力推广应用。缩果病发病较早造成果实提前掉落，黑斑病在果实着色期才开始发病，遇到多雨潮湿天气，红枣果实出现裂果，三种病害混合发生，发病迅速，防治难度增加，造成红枣产量和品质降低。但不同的枣品种抗病能力不同，骏枣发病重，灰枣发病较轻，密植枣园发病重，间作枣园的发病率普遍高于单作枣园，综合管理水平高，树势强的发病轻[7]。

[1]方仲达.植病研究方法[M].北京:农业出版社,1997．

[2]魏景超.真菌鉴定手册[K].上海:上海科技出版社,1979．

[3]陆家云.真菌病害诊断(第二版)[M].北京:中国农业出版社,1997．

[4]俞大钹,植物病理和真菌技术汇编[G].北京:人民教育出版社,1977．

[5]汤显春,张立春.中国新疆阿克苏红枣病虫害及其防治措施[G]//干果研究进展(5).北京中国农业科技出版社, 2007:347-356．

[6]张朝红,刘盂军.枣缩果病研究进展[J].山西农业科学，2009(1):74-77.

[7]曲晓晨.太谷枣区缩果病危害及发病规律调查[J].山西林业，2007(3):38-39．

10.3969/j.issn.1007-3574.2016.03.025

宋开艳（1985年—），新疆喀什人，硕士学历，研究方向为果树学。

2016-05-08