花红胶囊微生物限度检查方法学验证

高源

（贵州省食品药品检验所 贵州贵阳 550001）

花红胶囊微生物限度检查方法学验证

高源

（贵州省食品药品检验所 贵州贵阳 550001）

目的 对花红胶囊微生物限度检查方法进行方法学验证。方法 按《中国药典》（2010版）一部附录Ⅷ C项下的常规方法检查，采用平皿计数法，分组分别使用5种试验菌验证。结果：花红胶囊中5种试验菌的回收率均达70%以上。控制菌大肠埃希菌、大肠菌群、沙门菌经方法学验证可行性强。结论 采用常规检查法对花红胶囊微生物限度检查，可控制该产品的细菌、霉菌和酵母菌的总数和控制菌。

花红胶囊 微生物限度检查方法验证

花红胶囊的处方为红花 ，桑寄生，伸筋草、乌鞘蛇等。主要用于慢性盆腔炎、附件炎等症，本产品是口服中成药胶囊制剂，查询文献可知，无此品种的微生物限度检查方法，本文通过参考中国药典2010年版一部方法，通过微生物限度方法学的验证试验。确定采用常规法进行霉菌和酵母菌计数及控制菌验证。

1 仪器、试药

1.1 仪器 三洋全自动蒸汽灭菌器、便携式电子天平、超净实验台。

1.2 试药 固体培养基营养琼脂，玫瑰红钠琼脂，营养肉汤，胆盐乳糖增菌液，改良马丁 。以上5种培养基均来源于中国北京三科科技开发公司生产。

1.3 供试品 批号为140501，140502，140503花红胶囊，规格为0.5g每粒

1.4 菌种 大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉菌种均来源于中国药品生物制品检定所

2 试液的制备

按瓶标签标示方法配置培养基，按药典规定方法配置稀释剂与缓冲液，并按要求灭菌。

3 方法与结果

3.1 菌液制备 在超净台中无菌操作，取三种细菌实验菌接种于营养肉汤培养基中，培养箱34℃培养24小时后，制成浓菌液，逐级稀释制成50-100cfu/ml的菌液备用；无菌操作取白色念珠菌，接种于改良马丁培养基中，培养箱24℃培养24小时，逐级稀释，得50-100cfu/ml的菌液备用；无菌操作取黑曲霉接种至改良马丁琼脂斜面，培养箱24℃培养5天，逐级稀释，得50-100cfu/ml的菌液备用。

3.2 供试液制备 按《中国药典》2010年版一部附录ⅪⅡC微生物限度检查法，无菌操作取样品10 g，至100mL的pH7.0无菌氯化钠-蛋白缓冲液中，混匀作为供试液

3.3 计数方法

3.3.1 试验组 取1：10供试液1mL、0.5mL、0.2mL共三个取样量级别，毎一取样量级别平行制备2个平皿为一组，共制备5组，在每一级别的每一组中分别加入五种试验菌，每皿92CFU，倾注相应培养基，在规定温度下培养作回收试验。

3.3.2 菌液组 取试验菌分别注入1mL至培养皿中，平行试验，得到菌液组试验菌数。

3.3.3 供试品对照组 取供试液注入培养皿中，平行试验，得到供试品菌数。通过实验结果可见，供试液 取1mL/皿时五种试验菌的回收率均能达到70%以上，因此该产品微生物限度检查法细菌、霉菌及酵母菌计数拟采用平皿法（1：10供试液 1mL/皿）。

3.4 大肠埃希菌、大肠菌群检查

花红胶囊系含药材原粉的口服制剂，应进行大肠埃希菌、大肠菌群的检查

3.4.1 供试品组：取本品10g至100mL的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液中，充分溶解后混匀，静置3分钟吸取上清液作为1：10供试液。

3.4.2 试验组：取供试液10mL与1mL，加入90cfu的大肠埃希菌液，至于100ml胆盐乳糖培养基与10mL乳糖胆盐发酵培养基，在34℃培养18～24h，按《中国药典》2010 版控制菌 检查法检查。

3.4.3阴性对照 加入同体积pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液，同法处理。结果：试验组检出试验菌，阴性菌对照组未检出，该试验方法成立。

3.5 沙门菌方法验证实验

花红胶囊组方含有动物原粉，控制菌应进行沙门氏菌的检查

3.5.1 供试品组：取样品10g加入200mL营养肉汤培养基内，34℃培养18～24h，取培养物1mL接种于10mL四硫磺酸钠亮绿培养基中，34℃培养18～24h，按《中国药典》2010 版控制菌（ 沙门菌） 检查法检查。

3.5.2 试验组：取供试液10mL与的大肠埃希菌液（50cfu～100cfu）加入10mL乳糖胆盐发酵培养基，34℃培养24h，按《中国药典》2010 版控制菌检查法检查。

3.5.3阴性对照 加入同体积pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液，同法处理。结果：试验组检出试验菌，阴性菌对照组未检出，试验方法成立。

4 讨论

研究过程中发现，本品药物粉末较细，加入稀释剂后粘稠，所以必须要静置取上清液，不然会出现堵塞吸管的现象。实验结果表明，该供试品对五种试验菌的回收率均高于70%， 控制菌阴性无干扰，阳性可检出。故本品无抑菌作用。因此，本品可按常规法测定细菌数、霉菌和酵母菌总数以及针对控制菌进行控制。

［1］国家药典委员会.中国药典（一部）［M］.北京：中国医药 科技出版社，2010： 附录 XIIIC79-84.

［2］刘军玲.感冒退热颗粒微生物限度检查方法学验证［J］.安徽医药. 2008.12（2）：125.

［3］张亚宇，孔剑锋，周国玺.复方丹参片微生物限度检查方法验证［J］甘肃中医学 院学报.2013.1（30）：55.

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1674-2060（2016）02-0209-01