微粒子化学发光法检测TPO-Ab及TG-Ab的实验室性能验证

耿伏生，张卫庆，苏丽霞，李艳宁

(安阳市灯塔医院，河南安阳 455000)



·临床研究·

微粒子化学发光法检测TPO-Ab及TG-Ab的实验室性能验证

耿伏生，张卫庆，苏丽霞，李艳宁

(安阳市灯塔医院，河南安阳 455000)

摘要:目的对A2000微粒子化学发光仪检测甲状腺球蛋白抗体(TG-Ab)及甲状腺过氧化物酶抗体(TPO-Ab)的性能进行实验室评价，从而验证该仪器检测这两种甲状腺抗体的可靠性。方法参照美国临床实验室标准化协会(CLSI)相关文件的要求，对仪器检测TG-Ab及TPO-Ab的参数进行精密度、准确度、携带污染率及线性范围的评价分析。结果微粒子化学发光仪检测这两种甲状腺抗体的精密度、准确度、样本携带污染率、线性范围均在允许范围之内。结论该微粒子化学发光仪检测TG-Ab及TPO-Ab的性能符合质量要求，测定结果准确可靠，可对批量标本实现快速处理，基本上满足实验室需要。

关键词:甲状腺过氧化物酶抗体；甲状腺球蛋白抗体；微粒子化学发光；性能验证

甲状腺过氧化物酶抗体(TPO-Ab)及甲状腺球蛋白抗体(TG-Ab)是临床医师辅助诊断自身免疫性甲状腺疾病常用的实验室检查指标。有关文献报道显示，这两种抗体联合检测可提高甲状腺疾病诊断的正确率[1]。由于检测手段的限制，常采用放射免疫法(RIA)来检测，近几年来，随着医疗技术的进步和革新，化学发光法检测甲状腺抗体成为可能，特别是微粒子化学发光和电化学发光的应用，更加提高了检测的灵敏度和特异度，并丰富了甲状腺疾病诊断的新方法[2]。A2000微粒子化学发光仪是由郑州安图绿科生物有限公司生产的一款完全具备自主知识产权的化学发光仪，为验证该设备及其配套试剂检测TG-Ab及TPO-Ab的可靠性，笔者参照美国临床实验室标准化协会(CLSI)制订的方案对其精密度、准确度、线性范围、携带污染率等指标进行评价分析，以验证主要指标性能是否满足实验室需要。

1材料与方法

1.1标本来源高、低值浓度的血清来自2015年1～5月在本院住院的患者。均在基础状态下采集新鲜血液标本，2 h内送检，2 500 r/min离心分离血清备用，标本要求无溶血、黄疸和脂血。

1.2仪器与试剂郑州安图生物工程股份有限公司生产的A2000微粒子化学发光仪及相关配套试剂(TPO-Ab批号：20150430；TG-Ab批号：20150119)，标准品(TPO-Ab批号：2015040801；TG-Ab批号：2014121503)，质控品(批号：2015040801)。

1.3方法在仪器状态良好的情况下，按照CLSI制订的验证方案对TG-Ab及TPO-Ab进行性能验证。

1.3.1精密度批内不精密度：准备高值、低值两个水平血清样品分别连续检测20次，每次各重复测定2个结果，计算参数的批内不精密度；批间不精密度：把血清随机插入日常标本中进行测定，重复测定20 d，计算参数的批间不精密度。

1.3.2准确度分别测定不同于当前校准品批号的另一种校准品，稀释成高、低值浓度，连续测定5 d，与靶值相比较，并计算其相对偏差(Bias)[3]。

1.3.3携带污染率试验按照中国行标推荐的方法，选择满足高低条件的新鲜血清样品，连续测定3次高值样品，结果记为：H1、H2、H3；立即连续测定3次低值样品，结果记为：L1、L2、L3；分别计算各项指标的携带污染率，携带污染率=(L1-L3)/(H3-L3)×100%。

1.3.4线性范围取高值血清样品进行梯度稀释为10%、20%、40%、60%、80%、100%。然后从低值到高值测定不同稀释度的样品，每份重复测定2次，通过线性回归方程，得出决定系数(R2)。

2结果

2.1精密度

2.1.1批内不精密度选择高、低值两个浓度的新鲜样品进行测定，统计TPO-Ab和TG-Ab的批内不精密度，分别分析其CV均在允许范围内(CV≤15.0%)。见表1。

2.1.2批间不精密度随机抽取3个不同批号的试剂，分别对浓度为高、低值的样品进行检测，统计TPO-Ab和TG-Ab的批间不精密度，分别分析其CV均在允许范围内(CV≤15.0%)。见表2。

表1　　批内不精密度试验结果

表2　　批间不精密度试验结果

2.2准确度测定不同于当前校准品批号的另一种校准品，稀释成高、低值浓度，分别与靶值相比较，并计算Bias，检测高、低值样品TPO-Ab的Bias分别为7.55%、8.30%，检测高、低值样品TG-Ab的Bias分别为-8.95%、6.92%，均在±10%范围内，表明检测系统准确度高。见表3。

表3　　准确度试验结果

2.3携带污染率连续测定3次高值血清样品，结果记为：H1、H2、H3；立即连续测定3次低值血清样本，结果记为：L1、L2、L3；分别计算样本携带污染率，均符合要求。见表4。

2.4线性范围线性范围较好，且浓度与稀释率具有良好的线性关系，结果显示TG-Ab线性范围为11.0～1 800.0 IU/mL，TPO-Ab线性范围为0～380 IU/mL，与厂家注明的线性范围基本相符。见表5。

表4　　携带污染率结果

表5　　线性范围测定结果

3讨论

TG-Ab常存在于患有自身免疫甲状腺疾病的患者体内，大约10%的健康人有低水平的TG-Ab；30%的Grave′s患者和85%的Hashimoto′s甲状腺患者存在较高水平的TG-Ab[4]。然而在这些疾病中，高水平的TPO-Ab比高水平的TG-Ab更为常见[5]。因此，两种抗体的同时检测可提高甲状腺自身抗体的阳性检出率。微粒子化学发光法检测TG-Ab和TPO-Ab采用间接法，用抗原包被磁微粒，辣根过氧化物酶标记抗人IgG抗体制备酶结合物。通过免疫反应，形成抗原-抗体-酶标二抗复合物，该复合物催化发光底物发出光子，发光强度与抗体水平成正比。

保证检验结果的准确性是实验室工作人员不懈追求的目标，本次验证实验中TG-Ab和TPO-Ab的精密度与准确度都在仪器允许范围之内，样品携带污染率基本符合要求，线性范围基本能覆盖临床标本浓度范围，检测浓度与稀释倍数呈线性相关。与传统的酶联免疫法、RIA法相比较，微粒子化学发光法具有可全自动化、操作简便、灵敏度高、线性宽、无放射性污染等优点。

通过系统验证A2000微粒子化学发光仪检测TG-Ab和TPO-Ab的基本分析性能的主要性能指标，表明A2000微粒子化学发光仪及其配套试剂检测TG-Ab和TPO-Ab的性能良好，测定结果准确可靠，可对批量标本实现快速处理，基本能满足实验室需要。

参考文献

[1]彭鸣亚，徐龙宝，邓民斌，等．ECLIA法与RRA法检测血清促甲状腺激素受体抗体的对比研究[J]．中国医药指南，2011，9(20)：186-187．

[2]姚韩．血清促甲状腺激素受体抗体(TRAb)测定在甲状腺疾病临床诊断中的应用价值[J]．吉林医学，2013，34(31)：6513-6514．

[3]张葵．定量检测系统方法学性能验证实验的基本方法[J]．临床检验杂志，2009，27(5)：321-323．

[4]李玉姝，单忠艳，关海霞，等．甲状腺过氧化物酶抗体和甲状腺球蛋白抗体阳性临界值的确定及其临床意义[J]．中华检验医学杂志，2006，29(9)：780-783．

[5]仝德胜，许国新，沈国强．时间分辨荧光免疫法和电化学发光法检测AFP的比较[J]．实验与检验医学，2010，28(1)：45-46．

(收稿日期：2015-10-16)

DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2016.05.043

文献标识码：A

文章编号：1673-4130(2016)05-0674-03