斑秃患者外周血白细胞介素-17与T淋巴细胞亚群的变化及意义

黄晓燕，范　晴，唐群力

(上海交通大学附属第六人民医院南院检验科,上海 201499)



·临床研究·

斑秃患者外周血白细胞介素-17与T淋巴细胞亚群的变化及意义

黄晓燕，范晴，唐群力△

(上海交通大学附属第六人民医院南院检验科,上海 201499)

摘要:目的分析斑秃患者外周血白细胞介素-17(IL-17)和T淋巴细胞亚群的变化及其意义，以探讨该病的发病机制，为临床治疗方案的制订提供依据。方法选取2014年7月至2015年5月该院确诊的斑秃患者86例，另选取40例健康者作为对照组，采用双抗体夹心法和流式细胞学方法检测外周血IL-17和T淋巴细胞亚群,并进行比较分析。结果局限性斑秃组CD3+T淋巴细胞与CD4+T淋巴细胞百分比均低于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)；普秃、全秃组CD3+T淋巴细胞、CD4+T淋巴细胞、CD8+T淋巴细胞百分比均低于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)；普秃、全秃组CD3+T淋巴细胞与CD8+T淋巴细胞百分比均低于局限性斑秃组，差异有统计学意义(P<0.05)；对照组40例(100.00%)IL-17百分含量均小于1%，斑秃组仅44例(51.16%)小于1%，IL-17百分含量为1%～<3%、3%～<5%、≥5%的患者分别占18.60%、12.79%、17.44%，明显高于对照组，差异均有统计学意义(P<0.05)。结论斑秃患者反映体内总淋巴水平的CD3+T淋巴细胞低于健康人群，局限性斑秃以CD4+T淋巴细胞为主，全秃、普秃由CD4+T淋巴细胞和CD8+T淋巴细胞共同作用所致。

关键词:斑秃；白细胞介素-17；T淋巴细胞亚群

斑秃是一种突然发生的局限性脱发，患者局部皮肤正常，无疼痛等自觉症状，为皮肤科常见疾病[1-3]。斑秃既可见于成年人群，又可见于儿童，两性发病率无明显差异，少数患者可见散在的大面积脱发，当斑秃的面积达一半以上时为难治性斑秃。目前，对于斑秃的病因及发病机制尚未探究清楚，多认为是遗传因素、机体免疫系统平衡失调为主，同时掺杂环境因素、精神压力等因素共同作用所致[4]。斑秃患者具有明显的遗传易感性和家族聚集性，在外界环境、精神刺激等多种激发刺激因素作用下，发生针对自身生长期毛囊的细胞免疫反应。本文研究斑秃患者外周血白细胞介素-17(IL-17)和T淋巴细胞亚群的变化，并分析其所具有的意义。

1资料与方法

1.1一般资料2014年7月至2015年5月本院确诊斑秃患者86例纳入斑秃组，男47例，女39例；年龄18～52岁，平均(28.5±2.5)岁；发病时间1周至36个月；其中活动期斑秃(皮损区周围毛发轻拉试验阳性)38例，稳定期斑秃48例。根据发病类型将患者进一步分为：局限性斑秃组(54例)，普秃、全秃组(32例)。病例纳入排除标准参照文献[5-8]。纳入标准：(1)符合《中国临床皮肤病学》诊断标准；(2)年满17周岁的患者，性别不限；(3)入选患者至少两个月前未接受全身皮质醇类激素，以及其他免疫抑制剂、免疫调节剂治疗，至少4周内未接受局部皮质醇类激素治疗，也没有接受其他生发类药物治疗；(4)患者积极参与和配合，有较好的依从性，便于随访和收集结果。排除标准：(1)症状相似的其他类型脱发，例如先天性脱发、假性脱发、瘢痕性脱发、头藓、盘状红斑狼疮、扁平苔藓及其他内分泌系统或免疫系统失调等导致的脱发；(2)孕妇及哺乳期妇女；(3)合并恶性进行性高血压者，心功能、肾功能、肝功能不全等严重的重要脏器器质性疾病者、恶性肿瘤者及精神或智力障碍者；(4)合并其他不能脱离皮质醇类激素治疗，以及其他免疫抑制剂、免疫调节剂治疗疾病者；(5)局部有细菌、真菌感染或者有糜烂、渗出者。另于健康人群中选取40例作为对照组，男20例，女20例；年龄17～51岁，平均(29.2±3.4)岁；均无免疫相关性疾病，也无近期感染史。两组年龄、性别等一般资料比较差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。

1.2方法[9-10]

1.2.1标本采集无菌采集斑秃患者及健康人外周静脉血2 mL，添加肝素防止血液凝固，血标本应在4 h之内进行检测。

1.2.2检测方法(1)外周血T淋巴细胞亚群检测：50 μL斑秃患者外周血加入5 μL 异硫氰酸荧光素标记的CD45(CD45-FITC)/藻红蛋白标记CD4(CD4-RD1)/藻红蛋白-德州红-X标记CD8(CD8-ECD)/藻红蛋白-花青苷5标记的CD3(CD3-PC5)抗体，室温避光保存15 min后，加入溶血素300 μL，继续室温避光保存15 min，再加500 mL 0.9%生理盐水，10 min后上流式细胞仪检测。每次检测前，仪器均经标准荧光微球校正，且其误差率低于2%。(2)IL-17的测定：采用双抗体夹心法。操作：以纯化的人IL-17抗体包被微孔板，制成固相抗体，再向微孔中依次加入IL-17，再与生物素标记的IL-17抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体双抗体复合物，经彻底洗涤加底物显色。最终颜色的深浅和样品中IL-17水平呈正相关。然后用酶标仪在450 nm波长下检测吸光度值，进而通过标准曲线计算样品中人IL-17的浓度[11]。

1.3观察指标对比局限性斑秃组和对照组，普秃、全秃组和对照组，局限性斑秃组和普秃、全秃组的CD3+T淋巴细胞、CD4+T淋巴细胞、CD8+T淋巴细胞百分比，以及斑秃组和对照组外周血IL-17百分含量分布。

2结果

2.1各组外周血T淋巴细胞亚群比较与对照组比较，局限性斑秃组CD3+T淋巴细胞百分比与CD4+T淋巴细胞百分比均明显降低，差异有统计学意义(t=2.208，P=0.030；t=3.171，P=0.002)，而CD8+T淋巴细胞百分比比较差异无统计学意义(t=0.598，P=0.551)；普秃、全秃组CD3+T淋巴细胞百分比、CD4+T淋巴细胞百分比及CD8+T淋巴细胞百分比均明显降低，差异有统计学意义(t=6.376，P=0.000；t=3.713，P=0.000；t=6.823，P=0.000)。普秃、全秃组CD3+T淋巴细胞百分比、CD8+T淋巴细胞百分比均明显低于局限性斑秃组，差异有统计学意义(t=3.835，P=0.000；t=4.863，P=0.000)，而两组CD4+T淋巴细胞百分比比较差异无统计学意义(t=0.913，P=0.364)。见表1。

表1　　各组外周血T淋巴细胞亚群比较±s，%)

*：P<0.05，与对照组比较；#：P<0.05，与局限性斑秃组比较。

2.2斑秃组与对照组外周血IL-17百分含量分布比较对照组40例(100.00%)IL-17所占百分比均小于1%，而斑秃组只有44例(51.16%)小于1%，差异有统计学意义(P<0.05)；斑秃组IL-17百分含量为1%～<3%、3%～<5%、≥5%的患者分别占18.60%、12.79%、17.44%，明显高于对照组，差异均有统计学意义(P<0.05)。见表2。

表2　　斑秃组与对照组外周血IL-17百分含量

3讨论

T淋巴细胞受体(TCR)γδT淋巴细胞是近十几年发现的免疫细胞亚群，研究发现其在斑秃患者外周血或其他相应组织的分布和数量异常。TCR由γ、δ两条链组成，两者的差异使得γδT淋巴细胞分为几个亚群。IL-17是一类T淋巴细胞分泌的细胞因子，目前已知的包括IL-17A、IL-17B、IL-17C、IL-17D、IL-17E、IL-17F 6种，具有强大的致炎作用，此外，还可以诱导某些白细胞介素类、干扰素类、反应蛋白类及前炎性细胞因子的表达，进一步促进T淋巴细胞活化和局部头皮毛囊组织的浸润，加重自身免疫反应，扩大斑秃范围及疾病发展速度，给患者身心带来痛苦[12]。

本研究发现， 局限性斑秃组CD3+T淋巴细胞百分比、CD4+T淋巴细胞百分比明显低于对照组，与范晴等[13]的研究结果一致，CD4+T淋巴细胞减少可能与局部自身免疫反应导致成熟淋巴细胞消耗、损伤、凋亡快于生成有关。首先，CD4+T淋巴细胞聚集于斑秃局部皮损处，通过分泌干扰素、肿瘤坏死因子等细胞因子抑制皮囊生长，打破免疫耐受而进行自身攻击造成CD4+T淋巴细胞的过度消耗；另一方面，外周活化的CD4+T淋巴细胞启动Fas/FasL等凋亡程序，加快自身凋亡。CD3分子与TCR以非共价键结合，形成TCR-CD3复合物，为所有T淋巴细胞表面的特征性标志，故CD3+T淋巴细胞水平代表了总淋巴细胞水平，CD4+T淋巴细胞减少必然会导致CD3+T淋巴细胞的减少；普秃、全秃组总淋巴细胞及各细胞亚群百分比均明显低于对照组，与王琳等[14]的报道一致。正常情况下，主要组织相容性复合物(MHC)低表达，CD8+T淋巴细胞不被激活导致自身攻击，使毛囊处于免疫豁免状态，但当生长期低位毛囊上皮人类白细胞抗原(HLA)表达上调时，CD8+T淋巴细胞被活化，导致外周血CD8+T淋巴细胞减少。本研究还显示，普秃、全秃组CD3+T淋巴细胞及CD8+T淋巴细胞百分比明显低于局限性斑秃组，与相关研究报道一致[15-16]；此外，斑秃患者IL-17百分含量明显高于健康人，荆月藜[17]也有过同样的报道，表明斑秃的发生与IL-17水平升高有关，导致斑秃患者体内或局部组织内产生具有促进炎性反应的IL-17家族，IL-17介导的免疫调节作用启动，患者的头皮局部甚至大片毛囊区发生了针对自身成分的免疫攻击，表现为局限性或弥漫性的脱发。

综上所述，斑秃发病中IL-17的炎性作用极其重要，局限性斑秃以CD4+T淋巴细胞为主，全秃、普秃患者为CD4+T淋巴细胞和CD8+T淋巴细胞共同作用所致，应针对不同发病机制采取不同的治疗方案。

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(收稿日期：2015-10-11)

DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2016.05.036

文献标识码：A

文章编号：1673-4130(2016)05-0661-03

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