兔肝球虫病的流行病学诊断及病理组织学观察

刘志科,潘耀谦,张秋雨,李瑞珍,陈创夫

（1.石河子大学动物科技学院,新疆石河子832003；2.河南科技学院,河南新乡453003）

兔肝球虫病的流行病学诊断及病理组织学观察

刘志科1,潘耀谦2,张秋雨2,李瑞珍2,陈创夫1

（1.石河子大学动物科技学院,新疆石河子832003；2.河南科技学院,河南新乡453003）

对河南省新乡市周边五个县的家兔屠宰场进行采样,以了解新乡市兔肝球虫病的感染情况及病理变化.结果表明：通过肉眼观察和组织病理学方法,屠宰的3 700只家兔中共检测到345例患有兔肝球虫病,感染率为9.3%.眼观病变为肝脏极度膨大,背面有明显的白色或浅黄色的坏死灶,呈球形,如黄豆大小,病变突出肝的表面；组织病理学变化为胆囊的绒毛断裂明显,大量的球虫与上皮细胞一起脱入管腔,胆管的绒毛呈分支状,病变周围有大量的嗜中性粒细胞和淋巴细胞,上皮细胞中有分布不同发育阶段的斯氏艾美耳球虫.新乡市周边地区兔肝球虫病的感染率呈上升趋势,多为隐形感染.肉眼观察的结果与组织病理学的诊断相吻合,通过眼观病变和组织病理学来诊断兔肝球虫病具有一定的意义,并对本病的早期预防提供理论依据.

兔肝球虫病；肝脏；肉眼观察；组织病理学

兔肝球虫病是由斯氏艾美耳球虫寄生于家兔肝脏胆管内引起的一种原虫病.此病对幼兔危害极其严重,是一种常见的体内寄生虫病.各发育阶段的兔均易感染,尤其断奶至11周龄的幼兔最易感,导致生长兔发育受阻,死亡率高达80%[1-2].成年兔对兔肝球虫病的抵抗力较强,常表现为隐形感染,一般可以耐过,但不能产生免疫力,而成为长期的病原携带者和感染来源.该病多流行于温暖潮湿的多雨季节,但寒冷季节的发病率也比较高.兔肝球虫具有较高的致病率,特别是幼兔极易感染,死亡率高,给养兔业造成了巨大的经济损失[3].目前,兔肝球虫的研究处于起步阶段,且养殖技术处于探索期,对兔肝球虫病的研究非常有价值.

当前,我国对兔球虫病的研究加大了投入,尤其是对兔的肠球虫病进行了大量研究[4-6].近年来,我国许多地方有兔肝球虫病的发生[7-11],饲养者往往忽视了兔肝球虫病的存在,错过了最佳的治疗阶段,从而造成了很多不必要的经济损失.针对这种状况,在家兔屠宰场采集疑似病变的肝脏组织,通过病理学方法,用大体病变和组织学方法对肝脏的发病状况进行了比较研究,以期为该病的防治和确诊提供一定的技术指导.

1 材料与方法

1.1 材料与仪器

1.1.1 被检肝脏在新乡市周围的家兔大型屠宰场,屠宰3 700只家兔,发现其中345例为疑似携带兔肝球虫的肝脏,确定为兔肝球虫病的303例,疑似病例42例.

1.1.2 试剂与仪器伊红,石蜡,二甲苯,树胶,二甲苯Ⅰ,二甲苯Ⅱ,无水乙醇Ⅰ,无水乙醇Ⅱ,体积分数为90%、80%、70%、60%的乙醇溶液,苏木精,纯化水,醇性伊红,自来水,二甲苯Ⅰ,二甲苯Ⅱ,体积分数为10%的福尔马林溶液等.石蜡自动切片机,德国Leica公司；生物组织包埋机,浙江省金华市益迪医疗设备厂；恒温多孔水浴锅,金坛市杰瑞尔电器有限公司；NIKON研究显微镜,购于日本；电热恒温培养箱,上海博讯实业有限公司；智能生物组织烤片机,浙江金华市益迪医疗设备厂等.

1.2 试验方法

1.2.1 肉眼检查通过对采集来的肝脏,用眼观的方法来观察它的大体病变.

1.2.2 病理组织学检查对42例兔肝球虫病疑似病例的肝脏分别用体积分数10%的福尔马林溶液固定36 h.

（1）将固定的组织做好标记,分别用手术刀取长×宽×高为1 cm×1 cm×0.3 cm的肝脏组织.

（2）将肝脏组织分别放入体积分数为60%、70%、80%、90%、100%的梯度乙醇溶液中进行脱水,每个梯度脱水约3.5 h,然后放到二甲苯溶液中透明.

（3）用多功能生物组织包埋机进行石蜡包埋,将包埋好的组织修成梯形,用木块固定.（4）固定之后用组织自动切片机切成3 μm厚的切片.

（5）将切好的组织进行展片,用泡过酸的载玻片进行捞片,在显微镜下观察.

（6）最后,用苏木精和伊红（H.E.）进行染色[10-11].

H.E.染色方法：二甲苯Ⅰ10 min→二甲苯Ⅱ10 min→无水乙醇Ⅰ2 min→无水乙醇Ⅱ2 min→体积分数90%乙醇溶液2 min→体积分数80%乙醇溶液2 min→体积分数70%乙醇溶液2 min→苏木精6 min→纯化水中浸泡（兰化）20 min→醇性伊红30 s→自来水洗2 min→体积分数70%乙醇溶液2 min→体积分数80%乙醇溶液2 min→体积分数90%乙醇溶液2 min→无水乙醇Ⅰ2 min→无水乙醇Ⅱ2 min→二甲苯Ⅰ10 min→二甲苯Ⅱ10 min→中性树胶封片,最后在光学显微镜下进行组织切片的观察.

2 结果与分析

2.1 眼观病理变化

根据发病的时间和严重程度分为肝脏肿大型和肝脏缩小型两种情况.

2.1.1 肝脏肿大型肝脏肿大,胆管扩张,切面见肝管壁较薄,管腔内有大量的内含奶油样黏稠液体的淡墨绿色内容物.背面有大量扩张的胆管,沿肝脏被膜呈树根样分布,个别明显隆突于肝脏的表面（见图1-a）.肝脏表面有栗粒至黄豆大小不等的黄白色或淡黄色结节,切开时有淡黄色浓稠的液体或坚硬的无机盐,呈圆形,大如豌豆,有的结节相互融合在一起,形成较大结节,背隆突于肝脏表面（见图1-b）,可视黏膜轻度黄染.

图1 肝脏肿大型Fig.1 Hepatomegaly

2.2.2 肝脏缩小型肝脏体积较小,间质增宽,肝小叶结构较异常,形成局灶性肝硬变,颜色呈白色；胆管壁较厚,呈黄白色,胆管内有少量的淡绿色干酪物（见图2）.

图2 肝脏缩小型Fig.2 Liver volume smaller

2.2 组织病理学变化

对42例疑似兔肝球虫病的肝脏经固定、脱水、透明、包埋、切片、展片等,最后进行H.E.染色.结果见胆管上皮细胞内有大量的不同发育时期的球虫（见图3-a）,其黏膜有明显的增生.糖原溶解,肝细胞的形状呈细网状,周围有大量的炎性细胞浸润（见图3-b）,并有大量的纤维结缔组织形成,有的伸向肝小叶的周围组织；滋养体、裂殖体、配子体和新形成的合子非常容易辨别管腔内有大量脱落的上皮细胞[12-15].

脏的胆管上皮组织细胞内则有许多不同发育年龄阶段的球虫,胆管增生,肝脏体积变小,细胞萎缩进而严重变形,管腔内有大量的脱落和坏死的上皮和卵囊.胆囊的绒毛显著断裂（见图3-c）,而胆管黏膜结构正常.中央静脉向外扩张、瘀血,管腔内有浓黑色的胆汁及大块的坏死蛆织碎屑充斥,其内含有不同大小的卵囊（见图3-d）.胆管的绒毛脱落、坏死,胆管的结缔组织增生,卵囊呈椭圆形（见图3-e）,前窄后较宽,壁特别厚,呈皱嫱状,较为完整的卵囊还能见到其内有孢子卵囊及大量的卵囊残体等结构分布（见图3-f）.

图3 组织病理学变化Fig.3 Histopathological changes

3 结论与讨论

本研究涉及新乡市周围的五个县市的家兔集中屠宰场,病例收集基本覆盖了新乡整个地区的70%左右,样品覆盖养兔区域的80%以上.对屠宰的3 700只家兔中,最终确认兔肝球虫病为345例,感染率为9.3%.新乡市大部分县市已经成为兔肝球虫的隐形感染地区,其中卫辉市较为严重,且疫情的感染率呈明显的上升倾向.与刘春[16]、惠禹等[17]分别对四川和张家川县各个地区的兔的肝球虫感染情况的调查结果相比,本次研究中新乡市兔肝球虫病的发病率明显高于全国其它地区,原因可能与新乡市传统的饲养模式有关.近年习惯把兔球虫病归结为肠球虫,从而忽略了兔肝球虫病的防治.兔肝球虫病引起兔死亡所造成的经济损失不可忽视,应引起广大养殖户和研究人员高度重视.

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（责任编辑：卢奇）

Rabbit liver coccidiosis epidemiological diagnosis and pathologic histology observation

LIU Zhike1,PAN Yaoqian2,ZHANG Qiuyu2,LI Ruizhen2,CHEN Chuangfu1
（1.College of Animal Science and Technology,Shihezi University,Shihezi,Xinjiang 832003,China；
2.Henan Institute of Science and Technology,Xinxiang 453003,China）

To understand rabbit liver coccidiosis infection and pathological changes in Henan Province,Xinxiang City,five farmers of rabbit slaughterhouse around Xinxiang for sampling,through to the slaughter of 3 700,only the rabbit with the naked eye observation and histopathological method were detected in 345 cases with rabbit liver coccidiosis,the infection rate was 9.3%.Eye view the pathological changes of liver bilges extremely expands,its back had obvious necrosis foci of white or light yellow,spherical,like soybean volume,prominent lesions and the surface of the liver；The nap of the histopathological changes of the gallbladder rupture,a lot of ball into the lumen with epithelial cells and bile duct of villi were branching,lesions surrounded by a large number of neutrophils and lymphocytes,epithelial cells had distribution in different development stage of the Eimeria stiedai.

rabbit liver coccidiosis；liver；macroscopic observation；histopathology

S852.3

A

1008-7516（2016）06-0042-04

10.3969/j.issn.1008-7516.2016.06.011

2016-10-08

刘志科（1989―）,男,河南新乡人,硕士生.主要从事基础兽医学研究.

陈创夫（1962―）,男,广东揭西人,博士,教授,博士生导师.主要从事分子病理学研究.