高迁移率族蛋白B1和增殖细胞核抗原在宫颈癌组织中的表达及其相关因素分析

丁文清

[摘要] 目的 探讨高迁移率族蛋白B1（HMGB1）和增殖细胞核抗原（PCNA）在宫颈癌组织中的表达及其相关因素。 方法 选取2008年9月～2014年10月我院收治的60例宫颈癌患者作为研究对象，手术留取宫颈癌组织标本60份（宫颈癌组）、癌旁组织标本60份（癌旁组）、正常组织标本60份（正常组），采用免疫组织化学法检测三组HMGB1和PCNA的表达，并分析两指标与临床病理特征的关系。 结果 宫颈癌组、癌旁组和正常组的HMGB1阳性表达率分别为96.7%、23.3%和6.7%，差异有统计学意义（P<0.05）；宫颈癌组、癌旁组和正常组的PCNA阳性表达率分别为91.7%、66.7%和43.3%，差异有统计学意义（P<0.05）。HMGB1的表达与TNM分期、淋巴结转移及肿瘤分化程度相关，PCNA的表达与TNM分期、淋巴结转移、浸润深度及肿瘤分化程度相关，差异有统计学意义（P<0.05）。 结论 宫颈癌患者的宫颈癌组织中，HMGB1及PCNA表达水平均显著增高，两项指标对宫颈癌的预后评估具有重要意义。

[关键词] 宫颈癌；高迁移率族蛋白B1；增殖细胞核抗原

[中图分类号] R711.74 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2016）02（b）-0050-03

Expression of high mobility group protein B1 and proliferating cell nuclear antigen in cervical cancer tissues and and the analysis of related factors

DING Wen-qing

Department of Gynaecology，Maternal and Child Health Hospital of Longgang District in Shenzhen City，Shenzhen 518172，China

[Abstract] Objective To investigate the expression of high mobility group protein B1 （HMGB1） and proliferating cell nuclear antigen （PCNA） in cervical cancer tissues and its related factors. Methods 60 cases of cervical cancer treated in our hospital from September 2008 to October 2014 were selected as the research objects，and 60 cases of cervical cancer tissues（cervical cancer group），60 cases of adjacent tissue samples （adjacent group） and 60 cases of normal tissue samples （normal group） were collected by surgery.The expression of HMGB1and PCNA among three groups were detected by immunohistochemistry，and the relationship between the two indexes and clinical pathological features were analyzed. Results The positive expression rates of HMGB1 in cervical cancer group，adjacent group and normal group was respectively 96.7%，23.3% and 6.7%，the difference was statistically significant（P<0.05）.The positive expression rates of PCNA in cervical cancer group，adjacent group and normal group was respectively 91.7%， 66.7% and 43.3%，the difference was statistically significant（P<0.05）. The expression of HMGB1 was related to TNM stage，lymph node metastasis and degree of tumor differentiation.The expression of PCNA was related to TNM stage，lymph node metastasis，invasion depth and degree of tumor differentiation.The differences were significant（P<0.05）. Conclusion The expression level of HMGB1 and PCNA are significantly increased in cervical cancer tissues of patients with cervical cancer，and the two index have important significance to the prognosis of cervical cancer.

[Key words] Cervical cancer；High mobility group protein B1；Proliferating cell nuclear antigen

宫颈癌是一种女性生殖系统恶性肿瘤，占女性恶性肿瘤的第二位[1]，全球每年约有28万死亡病例产生[2]，是女性常见的死因之一。高迁移率族蛋白B1（HMGB1）是一种低分子非组蛋白，其基因具有参与神经生长、细胞增殖、迁移、分化、炎症反应等功能。在多种恶性肿瘤中，均存在HMGB1的过表达现象，影响肿瘤的恶性程度及预后[3]。增殖细胞核抗原（PCNA）是一种细胞核蛋白，在一定程度上可判断细胞增殖活性，反映细胞的增殖状态[4]。本研究探讨HMGB1及PCNA在宫颈癌患者宫颈癌组织中的表达水平变化，并对其临床意义进行研究，旨在为宫颈癌的治疗及预后提供帮助。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2008年9月～2014年10月我院收治的60例宫颈癌患者作为研究对象，手术留取宫颈癌组织标本60份（宫颈癌组）及癌旁组织标本60份（癌旁组），另取正常宫颈组织标本60份作为正常组。患者年龄21～75岁，平均（43.2±12.7）岁，术前均未接受放疗、化疗等针对肿瘤的治疗；TNM分期Ⅰ期11例，Ⅱ期12例，Ⅲ期20例，Ⅳ期17例；浸润型31例，局限型29例；浸润深度T1 4例，T2 6例，T3 35例，T4 15例；淋巴结转移39例，无淋巴结转移21例；中高分化28例，低分化32例。

1.2 方法

采用免疫组化SP法对HMGB1和PCNA的表达进行检测。试剂：鼠抗人HMGB1单克隆抗体，鼠抗人PCNA单克隆抗体，EnVision免疫组化二步法试剂盒及DAB显色剂。所有试剂均购自北京中杉桥生物公司。方法：将选取的石蜡标本切成厚4 μm的连续切片，常规脱蜡、水化后采用高压热修复法修复抗原，滴加经1∶20浓度稀释的一抗鼠抗人HMGB1单克隆抗体和鼠抗人PCNA单克隆抗体，4℃孵育过夜，滴加EnVision二抗反应，DAB控制显色。冲洗、苏木精复染、脱水、封片。阳性对照采用已知的阳性片，阴性对照采用磷酸盐缓冲液代替一抗。

1.3 观察指标

读片方法采用双盲法，HMGB1和PCNA蛋白阳性表达分别位于细胞质和细胞核，HMGB1染色成棕色细小颗粒，PCNA呈棕褐色或棕黄色颗粒。每个切片选10个400倍视野，统计阳性细胞数，阳性细胞数<10%为阴性标本，≥10%为阳性标本，并根据阳性细胞数百分比进行分级。-：无阳性细胞；±：阳性细胞数<10%；+：阳性细胞数为10%～30%；++：阳性细胞数30%～60%；+++：阳性细胞数>60%。阳性表达率（%）=阳性标本数/总数×100%。

1.4 统计学方法

采用SPSS 19.0软件进行统计学处理，计量资料用均数±标准差（x±s）表示，采用t检验，计数资料采用χ2检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 三组HMGB1和PCNA阳性表达率的比较

宫颈癌组的HMGB1阳性表达率为96.7%，癌旁组为23.3%，正常组为6.7%，三组差异有统计学意义（P<0.05）。宫颈癌组的PCNA阳性表达率为91.7%，癌旁组为66.7%，正常组为43.3%，三组差异有统计学意义（P<0.05）（表1）。

表1 三组HMGB1和PCNA阳性表达率的比较[n（%）]

与癌旁组和正常组比较，*P<0.05

2.2 HMGB1和PCNA阳性表达与病理特征的关系

HMGB1的表达与TNM分期、淋巴结转移及肿瘤分化程度相关，PCNA的表达与TNM分期、淋巴结转移、浸润深度及肿瘤分化程度相关，差异有统计学意义（P<0.05）（表2）。

表2 HMGB1和PCNA阳性表达与病理特征的关系[n（%）]

3 讨论

宫颈癌在女性癌症中仅次于乳腺癌，具有易复发、恶性程度高、预后不良及病死率高的特点，严重危害女性健康。宫颈癌原位癌高发年龄为30～35岁，浸润癌为45～55岁，近年来宫颈癌的发病人群呈明显年轻化趋势[5]，<35岁的女性患病比例显著上升，因此对宫颈癌患者的早期诊断及治疗显得尤为重要[6]。

HMGB1在各种细胞中广泛存在，是一种高度保守的单链多肽核蛋白，含215个氨基酸残基，能够与DNA结合[7]。HMGB1在细胞内外具有不同的功能，在细胞内能够与染色体结合，参与调控基因转录及DNA的复制、重组、修复[8]；在细胞外具有组织修复、免疫防御以及促炎症作用[9]。研究发现，前列腺癌、直肠癌、乳腺癌、胃肠间质癌等多种恶性肿瘤中都存在HMGB1的过表达现象，HMGB1的过表达使转移调控基因上调，从而参与多种癌症的生长、转移及扩散[10-11]，HMGB1的主要机制可能是通过抑制某种抑癌因子表达，使细胞对DNA的修复能力减弱甚至丧失，导致Ras/ERIC信号转导通路活化过度，促进肿瘤血管的生成及恶性肿瘤的生长转移浸润[12]。研究表明，HMGB1可通过C-IAP2的表达及抑制Caspase-3、Caspase-9的活性，从而抑制癌细胞凋亡的发生，使肿瘤得以发生、发展[13]。本研究结果发现，宫颈癌组的HMGB1阳性表达率高于癌旁组和正常组（P<0.05），并与TNM分期、淋巴结转移及肿瘤分化程度相关，这与既往研究结果一致，说明通过研究HMGB1的表达将有助于宫颈癌的早期检测与治疗。

PCNA是一种核内酸性蛋白质，含261个氨基酸，分子量为35 kD左右[14]。研究指出，PCNA与肿瘤的临床分期、病理分级、淋巴结转移及预后相关[15-17]。PCNA存在于增殖细胞中，大量表达于S期细胞核内，在DNA的合成调控中发挥着重要作用[18]。在整个细胞增殖过程中，PCNA的表达先上升后下降，G1后期开始增加，S期达到高峰，然后从G2到M期呈下降趋势，其变化水平与细胞增殖及DNA合成过程一致[19]，可作为评估肿瘤细胞增殖能力及恶性程度的有效指标[20]。本研究中，宫颈癌组的PCNA阳性表达率高于癌旁组和正常组（P<0.05），并与TNM分期、淋巴结转移、浸润深度及肿瘤分化程度相关，说明PCNA的表达率随肿瘤临床分期和病理分级的增高而上升，因此检测宫颈癌组织中的PCNA变化水平有利于癌症的预后评估。

综上所述，在宫颈癌患者宫颈癌组织中，HMGB1及PCNA的阳性表达均明显升高，两指标对宫颈癌的早期检测及预后判断具有重要意义，值得临床推广。

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（收稿日期：2015-10-13 本文编辑：李秋愿）