四川省家畜布鲁氏菌病常见诊断方法研究

肖泸燕谢佳利陈 冬谢嘉宾李 淳

（1.四川艺术职业学院，四川成都 611131；

2.四川省动物疫病预防控制中心，四川成都 610041）

四川省家畜布鲁氏菌病常见诊断方法研究

肖泸燕1谢佳利1陈 冬2谢嘉宾2李 淳2

（1.四川艺术职业学院，四川成都 611131；

2.四川省动物疫病预防控制中心，四川成都 610041）

家畜布鲁氏菌病是由布鲁氏菌引起的人兽共患传染病，我国将其列为二类动物疫病。该病以羊、牛和猪最易感，犬及60多种家畜、家禽、野生动物有不同程度的易感性，其特征主要是侵害生殖系统，引起流产、不孕、睾丸炎等。感染动物可长期带菌，成为对其他动物和人类最危险的传染源。该病曾在上世纪末得到有效控制，但近年来，家畜布鲁氏菌病阳性率逐步升高，疫情有反弹趋势，已成为我省重点防控的人畜共患病种。

布鲁氏菌病；流行；诊断；病原学检测

1 流行现状

我省畜间布病存在历史久远，分布广泛。该病在川西北高原牧区及半农半牧区主要以羊种及牛种交替流行为主，犬种在农区散发存在，局部地区尚有零星的猪布病感染。菌株主要为羊种菌第1、2、3生物型，牛种菌第1、3、4、6、7、9生物型，其中川西北以流产布鲁氏菌（牛种）第9种生物型为主，以牛（犏牛最易感，次为牦牛和黄牛）的感染率和出菌率最高，危害最严重，羊次之。流调结果显示，目前全省牛羊布病阳性率在0.5%～2.0%左右。

2 诊断方法

2.1 血清学诊断

2.1.1 凝集试验（RBPT、SAT） 主要为虎红平板凝集试验（RBPT）和试管凝集试验（SAT）两种方法。RBPT在使用时操作方便、快捷，适用于大规模的筛选检疫，但易出现假阳性。SAT特异性高，检测比较准确，但操作麻烦，费时费力，不适用于大规模的筛选检测，不能区分人工免疫和自然感染。通常，我省先用RBPT筛选，阳性样品再用SAT复核以做出比较准确的判断。

2.1.2 补体结合试验（CFT） 该试验是利用绵羊红细胞和溶血素可以形成结合物，在补体的作用下，发生溶血。在反应体系中，他们作为指示系统，与布氏菌的特异性抗原、抗体复合物竞争结合补体。如果发生溶血，说明血清中没有特异性抗体，判为阴性。该试验虽然灵敏度高、特异性强，但该试验影响因素复杂，操作步骤繁锁。我省尚未推广采用此法。

2.1.3 酶联免疫吸附试验（ELISA） 我省用于检测布病的主要有iELISA；cELISA两种。iELISA的特异性和高度敏感使它成为用于检测家畜布病最常见的方法，但是它不能区分免疫抗体与感染抗体。因此，更多把iELISA 作为普测方法。cELISA这种方法能有选择地抑制结合疫苗所产生的抗体而不是野毒株所产生的抗体，因为cELISA可以消除因接种疫苗而产生的残余抗体所引起的大部分反应，cELISA 对牛布氏杆菌OPS 表位特异性单克隆抗体有很高的特异性，所以单克隆抗体的选择及其独有的特异性和亲和力对cELISA 法的诊断有明显的影响。

2.1.4 乳环试验取 新鲜乳样1ml加于灭菌凝集试验管内，加入全乳环状抗原1滴（约50μl）充分充分混匀，置37～38℃水浴中60min后取出试管勿使震荡，立即进行判定结果。若乳脂层的环带呈红色或乳柱不显著，略带颜色，即可判定为布病血清学阳性或弱阳性；若乳柱上层无任何变化，乳柱颜色均匀，则判定布病血清学为阴性。该实验需注意，受检乳样须为新鲜全乳。若为夏季采集乳样，应于当日内检查或保存于2℃时，一周内仍可适用。此方法简单易行，我省常用于初筛奶牛布病。

2.1.5 胶体金标记检测技术 吸取稀释过后的血清3-4滴，加于诊断盒圆孔中，于2～15min内观察结果。若诊断盒试剂条C处出现1条红色沉淀线，则为布病血清学阴性；若诊断盒试剂条C、T处均出现红色沉淀线，则判定为布病血清学阳性。该实验是一种快速、敏感且特异性高的一种布病快速诊断方法，非专业人员也可操作，因此较适合大规模、突发或边境地区检测布病用。该方法将在我省得到逐步推广。

2.2 病原学检测

2.2.1 分离鉴定 将样品接种于增菌液培养基，37度恒温培养3～7d，划线转接于胰蛋白琼脂培养基上，37℃恒温培养3～5d后观察菌落，并对可疑菌落进行涂片染色镜检，再做纯菌培养。培养基须放置在5～10%二氧化碳（蜡烛燃烧法）环境中，而且标本中必须存在大量活菌才能分离到该菌，培养周期长，所以在我省已被淘汰。

2.2.2 分子生物学诊断 常用的AMOS-PCR检测方法现国内已有人用于区分牛羊、猪及绵羊附睾种，我省尚未开展。该方法需注意两点：一是提取DNA后，须保存于-25℃的环境下，防止标本质量受到影响；二是引物设计时要注意与基因序列一一对应。

3 比较

由于血清学诊断的实用性，因此，目前我省主要利用血清学试验来诊断家畜布病。国内著名家畜布病专家毛开荣教授对以上常见血清学诊断方法作过科学的对比，结果显示，以上几种方法的敏感性和特异性均达到85%以上，其中以CFT和iELISA效果最佳，敏感性和特异性均达到95%以上。特异性比较：CFT＞ cELISA＞ i-ELISA、RBT ＞ SAT；敏感性比较：i-ELISA 、RBT ＞ SAT ＞CFT ＞ cELISA。

4 思考与展望

畜间布病的流行对我省现代畜牧业发展造成严重的阻碍。我省长期以来形成的传统养殖模式根深蒂固，尤其是川西北牧区及半牧区，一旦暴发布病，会严重危害群众身体健康及公共卫生安全。为了稳定控制该病，我省近几年来开展了大量的检测诊断工作，检测方法的优劣，直接决定了我省布病阳性家畜的扑杀数量。因此，选择一种更加简易、高效的检测方法成了我省各级动物疫控机构的集体呼声，对比以上几种常见的检测方法，补充推广运用胶体金标记检测技术初筛、ELISA方法确诊将是趋势。

［1］ 毛开荣.动物布鲁菌病防治研究进展［J］.动物保健，2006，3（9）：37-40.

［2］ 张莉等.影响布鲁氏菌病抗体检测的因素分析［J］，医学动物防制，2015，（12）：1416-1417.