饲料酸化剂中富马酸含量的高效液相色谱测定法的改进研究

邓　虹，代　勇，刘晋渝

（成都大帝汉克生物科技有限公司，成都　611130）



饲料酸化剂中富马酸含量的高效液相色谱测定法的改进研究

邓虹，代勇，刘晋渝

（成都大帝汉克生物科技有限公司，成都611130）

摘要：为了对高效液相色谱法分析饲料酸化剂中富马酸含量的方法进行改进研究，试验采用美国Zorbax Eclipse XDB-C18（4.6 mm×150 mm，5 μm）色谱柱进行分离，以0.50%磷酸-蒸馏水（体积比1 ϑ 9）作为流动相，流速1 mL·min-1，柱温30℃，检测波长210 nm。结果表明，在优化色谱条件下，富马酸平均回收率为98.67%，RSD= 1.26%（n=5）。该方法前处理更加简单快捷，灵敏度高，回收率和重现性良好，出峰更快，可作为饲料酸化剂中富马酸含量的高效液相色谱检测新方法。

关键词：富马酸；高效液相色谱法；饲料

富马酸又称反丁烯二酸、紫堇酸、地衣酸、延胡索酸，通常为白色结晶粉末，微溶于冷水，有水果酸味。化学式为C4H4O4，是一种重要的有机化工原料和精细化工产品[1]。目前测定富马酸的方法主要有电位滴定法、分光光度法、离子交换色谱法及高效液相色谱检测法等[2]。近年来测定富马酸的文献主要针对标准品、废水、发酵液、葡萄酒及果汁等较简单的介质，而对饲料酸化剂中富马酸的测定鲜有报道。本文建立一种饲料酸化剂中富马酸的HPLC检测的新方法，重复性好、稳定性好，可以更加快速、准确的检测富马酸的含量。

1　材料与方法

1.1试验材料

饲料酸化剂样品由成都大帝汉克生物科技有限公司提供，生产批号为15032401。

富马酸对照品购自迪马科技，纯度≥99.50%；色谱级甲醇购自迪马科技，生产批号为M239 G540；双蒸水为自制。

1.2仪器与设备

分析天平（感量0.1 mg）购自梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司，型号：ME204；液相色谱为美国Agilent1200高效液相色谱（具VWD检测器）。

1.3高效液相色谱参考条件

色谱柱：Zorbax Eclipse XDB-C18（4.6 mm×150 mm，5 μm）；流动相：0.50%磷酸：蒸馏水=1 ϑ9（体积比）；流动相流速：1 mL·min-1；检测波长：210 nm；进样量：20 μL；柱温：30℃。

2　试验方法

2.1标准品的制备

准确称取富马酸标准品50 mg，置于100 mL的容量瓶中，用蒸馏水稀释到刻度，混匀，取10 mL置于100 mL的容量瓶中，用蒸馏水稀释到刻度，混匀。该溶液应现用现配。

2.2样品溶液的制备

准确称取富马酸样品50 mg，置于100 mL的容量瓶中，用蒸馏水稀释到刻度，混匀，取10 mL置于100 mL的容量瓶中，用蒸馏水稀释到刻度，混匀。该溶液应现用现配。

2.3精密度实验

精密吸取2.2中样品溶液20 μL，重复进样5次，测定富马酸峰面积积分值，求出相对标准偏差。

2.4稳定性实验

精密吸取2.2中样品溶液20 μL，室温下按照表2中规定时间进样5次，测定富马酸峰面积积分值，求出相对标准偏差。

2.5重复性实验

称取饲料酸化剂样品0.5 g，共5份，精密称量，按照样品溶液制备方法制备。精密吸取样品溶液20 μL，注入高效液相色谱仪，测定富马酸峰面积积分值，计算含量，求相对标准偏差。

2.6回收率实验

采用加样回收实验，取已知含量的重复性试验的同一样品（富马酸平均含量为53.2 mg·g-1）5份，精密称取各约0.5 g，分别加入富马酸对照品溶液（5.32 mg·mL-1）5 mL，按照样品溶液的制备方法制备溶液，照上述色谱条件，进样、测定，记录色谱图，计算含量，求相对标准偏差，RSD=1.07%。

3　试验结果

3.1标准品

标准品及样品对照的色谱图见图1，保留时间约为3 min。

图1　标准品A与样品B的高效液相色谱图

3.2精密度

精密度测定结果见表1。结果表明，富马酸进样精密度良好，RSD=0.32%。

3.3稳定性

稳定性测定结果见表2。结果表明，富马酸在24 h内基本稳定。

3.4重复性

重复性测定结果见表3。结果表明，此方法测定富马酸的重复性良好，RSD=2.57%。

3.5回收率

回收率测定结果见表4。结果表明，此方法与薛霞等的方法相比具有更好的加样回收率[3]。

表1　富马酸精密度试验结果

表2　富马稳定性试验结果

表3　富马重复性试验结果

表4　回收率试验结果

4　讨论

本试验检测波长采用210 nm，这是富马酸的最大吸收波长[2-3]。

本试验采用磷酸溶液0.5%作为流动相，因为在饲料酸化剂中除了富马酸外，还有磷酸、乳酸、柠檬酸等酸性物质，采用甲醇与水，或者是磷酸二氢铵作为流动相都需要精确调节pH，pH调节不准确会导致饲料酸化剂中的其他酸不能很好的分开而形成双峰，该实验流动相就不存在其他酸的干扰问题，可以准确测定富马酸[4-5]。直接用磷酸溶液测定富马酸，溶液配制简单，保留时间短，易操作，试验重复性和稳定性都很好。

富马酸微溶于冷水，易溶于热水，试验时应将定容的蒸馏水进行加热从而使富马酸能够很快的溶解，提高试验效率。

5　小结

饲料中有机酸主要作为饲料的酸味剂被广泛使用。其不仅可提高饲料的适口性，促进采食，而且具有防腐保健作用，并可预防饲料被霉菌污染；还具有抑制病原微生物作用，可减少动物胃肠道中有害微生物的繁殖，同时可降低饲料pH，激活消化酶，有助于消化吸收某些营养物质，提高饲料转化率以及为动物提供能量等功能[6-11]。由于酸化剂可被完全代谢，使用安全、无毒而被许多国家允许添加到动物饲料中[5]。

[参考文献]

[1]李学坤,张昆,高振,等.富马酸的合成及应用[J].现代化工, 2005（1）:81-83.

[2]张国安,王玉萍,彭盘英,等.反相液相色谱法测定废水中的马来酸和富马酸[J].化学世界,2010,51（7）:404-407.

[3]薛霞,张艳侠,王艳丽,等.高效液相色谱法测定淀粉及相关食品中马来酸（酐）与富马酸的含量[J].分析测试学报,2014,33（3）: 324-328.

[4]刘瑞,聂黎行,孙焕,等.离子排斥色谱法测定生脉注射液中的有机酸[J].分析化学,2015,40（3）:489-490.

[5]范小娜,黄玲,黄志勤,等.三种羟基羧酸气相色谱法的分离及定量分析[J].江西师范大学学报:自然科学版,2005,28（6）: 537-539.

[6]陈才勇,王恬.饲料酸化剂对畜禽保健作用的研究进展[J].畜禽业,2002（11）:16-17.

[7]王杰,陈玉林,白丁平.酸化剂在仔猪上的应用[J].饲料工业, 2003（6）:19-22.

[8]凌明亮,黄仁术.酸化剂在断奶仔猪不同类型饲粮的添加效应试验[J].养猪,2003（6）:3.

[9]陈才勇,王恬.饲料酸化剂对畜禽保健作用的研究[J].饲料研究,2004（1）:37-38.

[10]师阳,宋代军.酸化剂在养猪业中的应用现状[J].河南畜牧兽医,2004,25（11）:10-12.

[11]丁发源,臧莹安.再认识酸化剂发展绿色畜禽业[J].中国禽业导刊,2004（14）:37-38.

Study on Improvement of Determination Method of Fumaric Acid in Feed Acidifier by HPLC

DENG Hong,DAI Yong,LIU Jinyu
（Chengdu Dad Hank Biotech Co.,Ltd.,Chengdu 611130,China）

Abstract:To improve the determination method of fumaric acid in feed acidifier by HPLC,the target com⁃pounds was separated on America Zorbax Eclipse XDB-C18 column(4.6 mm×150 mm，5 μm)with using 0.50% phosphoric acid-water(1 ϑ 9,volume ratio)as mobile phase,at the flow rate of 1.0 mL·min-1,and the column tempera⁃ture was 30℃.The UV detection wavelength was 210 nm.Under the optimized conditions,the average recovery was 98.67%，RSD=1.26%(n=5).With the advantages of convenience,sensitivity,good recovers and repeatability,the method could be used as a new detemination method of fumaric acid in feed acidifier by HPLC.

Key words:fumaric acid;HPLC;feed

作者简介：邓虹（1982-），女，四川华蓥人，工程师，主要从事饲料调味剂的液相色谱检测。

收稿日期：2015-10-27

中图分类号：S816.7；S816.2

文献标志码：A

文章编号：1001-0084（2016）01-0005-03