新疆石河子地区规模化猪场猪瘟抗体检测及分析

刘功成，张 倩，屈勇刚，杨 蓓，杨慧敏，王欣雨，王园园，李新顺，马 博（石河子大学动物科技学院，新疆 石河子 832003）



新疆石河子地区规模化猪场猪瘟抗体检测及分析

刘功成，张 倩，屈勇刚*，杨 蓓，杨慧敏，王欣雨，王园园，李新顺，马 博（石河子大学动物科技学院，新疆 石河子 832003）

猪瘟（Classic swine fever ，CSF）是由猪瘟病毒（Classic swine fever virus，CSFV）引起的一种急性、热性、高度接触性传染病。1993年后，一些已宣布消灭猪瘟的国家和地区，如荷兰、瑞士、比利时、德国等，又相继出现了猪瘟疫情[1]。目前，该病主要在亚洲、非洲、南美洲和欧洲等44个国家流行[2]。

近年来，新疆的养猪业受到生猪价格持续下跌的影响，部分小规模猪场遭到连续入不敷出的打击后，不得不宣告破产；而一些较大规模的猪场仍然在等待养猪业的转机。这种形势无疑会对新疆石河子地区猪场防疫工作带来影响。但在这种情况下，大多猪场CSFV的抗体水平仍相对较高，提示石河子地区对CSF的防疫基础相对较好。

摘 要：为了解新疆石河子地区猪场猪瘟病毒（CSFV）抗体水平，试验从新疆石河子地区的12个不同规模猪场共采血样743份，采用间接ELISA（酶联免疫吸附试验）法检测CSFV的抗体水平。结果发现，该地区CSFV抗体平均阳性率为85.87%（638/743），免疫抗体阳性率超过80.00%的猪场占75%，各猪场抗体水平差异极显著（p＜0.01）。结果表明石河子地区CSFV抗体水平较高，该结果可为新疆石河子地区猪瘟防疫工作提供一定的参考。

关键词：猪瘟病毒；ELISA；抗体水平；阳性率

1 材料与方法

1.1 血清样品

2014—2015年，743份血液样品采自新疆石河子地区12个规模化猪场（能繁母猪500头及以上的4个，301～499头的3个，201～300头的2个，200头以下的3个），其中选取9个猪场的猪群不同构成成分如下： 0～10日龄仔猪42份，11～20日龄仔猪61份，21～30日龄仔猪70份，种公猪78份，后备母猪100份，经产母猪135份，共486份血清。

1.2 检测试剂盒和主要仪器

猪瘟病毒ELISA抗体检测试剂盒（武汉科前生物制品有限责任公司，批号：141115），自动酶标仪（美国BioTek公司）。

1.3 间接ELISA方法

根据试剂盒说明书的操作步骤，对待检血清进行1∶40稀释(例如：195μL样品稀释液中加5μL待检血清)。将稀释好的血清100μL加入到抗原包被板中，同时设定阴性和阳性对照各1孔，均匀震荡后，置于37 ℃温箱中温浴30 min。然后，弃去抗原包被板中的液体，对抗原包被板进行洗涤，每孔加入羊抗猪酶标二抗，同样进行37 ℃温浴30 min，随后弃掉废液，再次洗涤。再在抗原包被板的每孔中分别加入底物A、底物B，混匀室温避光显色10 min，最后，每孔加入终止液，10 min内，用酶标仪在630 nm波长下对样品的OD值进行测定，根据OD值的大小，判定样品抗体的水平。

1.4 结果转化 (参照猪瘟病毒ELISA抗体检测试剂盒使用说明书)

测定结果的转化值见表1。

表1　猪瘟抗体ELISA检测OD值与猪瘟间接血凝试验（HIA）效价的转换

1.5 统计分析

用Excel软件、SPSS软件对试验数据进行统计分析，OD值结果以平均值±标准差表示。

2 结果

2.1 新疆石河子地区12个规模化猪场的猪瘟抗体水平

743份猪血清共检出抗体阳性638份，阳性率为85.87%，OD平均值为1.210，标准差为0.773，平均效价为1∶256。A～L的12个猪场的阳性率分别为100.00%、85.71%、71.11%、46.88%、95.71%、93.65%、73.24%、81.25%、95.00%、95.45%、97.33%、98.21%，运用SPSS软件进行单样本t检测P为0.005，表明各猪场抗体水平差异极显著（P＜0.01）。结果见表2。

2.2 部分猪场猪群不同构成成分的猪瘟抗体水平

12个猪场选取9个猪场，对猪群不同构成成分的猪瘟抗体水平进行分析，0～10日龄仔猪、11～20日龄仔猪、21～30日龄仔猪、后备母猪、经产母猪、种公猪的猪瘟抗体阳性率分别为85.71%、85.48%、77.14%、96.00%、89.63%、97.44%；猪群不同构成成分之间的猪瘟抗体水平存在较大差异，种公猪的抗体水平最高，其次为后备母猪，21～30日龄仔猪的抗体水平最低，但也超过了70.00%，结果见表3。

表2　新疆石河子地区12个不同规模猪场猪瘟免疫抗体检测结果

表3　部分猪场猪群不同构成成分的猪瘟抗体水平

3 讨论

3.1 新疆石河子地区猪瘟抗体水平相对较高

新疆石河子地区12个规模化猪场的抗体阳性率有11个均大于70%，抗体的平均水平达到了农业部《2012年国家动物疫病强制免疫计划》规定的抗体合格率在70%以上的要求[3]。有1个猪场的抗体水平偏低，仅为46.88%，需要引起足够的重视。根据杜希珍等研究报道，规模化猪场猪瘟疫情稳定需要猪瘟抗体合格率必须达到90%以上[4]，而新疆石河子地区猪瘟抗体阳性率达到了90%以上的猪场有7个，这说明新疆石河子地区各个猪场的猪瘟免疫状况较好。近几年来，个别猪场为了节约成本，没有像以前一样严格做好猪场的防疫工作。所以导致新疆石河子地区不同规模化猪场的猪瘟抗体水平有所差异。

3.2 猪群不同构成成分猪瘟抗体水平存在明显差异

对1～10日龄仔猪，11～20日龄仔猪，21～30日龄仔猪，后备母猪，经产母猪，种公猪的猪瘟抗体水平检测发现，后备母猪和种公猪的抗体水平最高，21～30日龄仔猪最低，本试验结果与牟群等（2012）对不同阶段猪群猪瘟抗体进行检测分析结果[4]基本相符。笔者把0～30日龄仔猪按10日龄为一个阶段分为3个阶段，用以判断仔猪猪瘟抗体水平的消长规律，来排除母源抗体的干扰以确定仔猪的最佳首免时间。结果发现新疆石河子地区各个规模化猪场前两个阶段的仔猪抗体水平较高，第3阶段抗体水平下降至77.14%，提示仔猪母源抗体保护作用效力下降，说明仔猪在20日龄左右时需要给予猪瘟疫苗接种。

3.3 科学做好猪场防疫工作

猪瘟抗体水平的高低直接反映了猪群免疫接种的效果，是猪群抵抗猪瘟病毒的关键因子[5]。现在，很多猪场都懂得了防疫工作重要性，所以他们也在不断加大对猪场防疫的投入。当然，防疫工作中疫苗是关键，所以猪场在疫苗的采购时，一定要选择质量过硬的厂家，切勿贪图便宜，购进劣质疫苗，以防给猪场带来不可估量的后果。然后就是疫苗的保存工作，猪瘟疫苗是冻干苗，需要放在-20 ℃条件下保存，稀释好后要在一定时间内用完。同时，在给各类猪群接种疫苗时，要使用不同规格的针头，切勿图快打飞针，要保证每头猪都接种上了规定的头份，要对不同窝猪群接种疫苗时要注意更换针头。同时，猪场要定期进行血清学检测，检测不同猪群猪瘟抗体水平，及早发现问题，及时做好疫苗补免与淘汰工作，做到防微杜渐。

参考文献

[1] 殷震，刘景华.动物病毒学[M].2版.北京：科学出版社，1997：652-664.

[2] S T A R K R，R U M E N A P F G，MEYERS，et al.Genomic localization of hogcholera virus glycoproteins [J]. Virology，1990(1)：280-286

[3] 刘志勇，韩庆安，刘乃强，等.规模养猪场主要疫病免疫效果评估模型的建立[J].中国兽医杂志，2011（7）：88-90.

[4] 牟群，李茂宁，覃庆玉，等. 规模化猪场不同阶段猪群猪瘟抗体水平调查报告[J]. 畜牧兽医杂志，2012（6）：86-88.

[5] 杜希珍，高丽娜，赵海山，等.规模化猪场母猪群猪瘟抗体血清学调查[J].猪业科学，2009，26（6）：86-88.

收稿日期：（2015-11-13）

*通讯作者：屈勇刚（1971-），男，陕西渭南人，副教授，主要从事动物传染病诊断与防治工作

基金项目：新疆石河子市农业科技攻关项目（2013NY04）
作者：刘功成（1990-），重庆合川人，硕士研究生，主要从事动物传染病诊断与防治工作