血鹦鹉红、白两个品系染色体核型分析

贾文平　付志茹　姜巨峰　杨　华　孟一耕　蔡　超（天津市水产研究所　天津　300221）



血鹦鹉红、白两个品系染色体核型分析

贾文平付志茹姜巨峰杨华孟一耕蔡超
（天津市水产研究所天津300221）

摘要：对血鹦鹉红色和白色两个品系的染色体组型进行分析。采用植物血细胞凝集素和秋水仙素活体注射法，以血鹦鹉肾细胞为材料，制备染色体。结果表明，红色血鹦鹉的核型：2n=48 10sm+ 38st NF=58白色血鹦鹉的核型：2n=47 19sm+28st NF=66。

关键词：血鹦鹉；染色体；核型

染色体是遗传物质的主要载体，分析染色体组型有助于了解鱼类的遗传组成和发育机制，可为物种鉴定、杂交和多倍体育种提供科学依据。随着我国休闲渔业的兴起，观赏鱼繁育蓬勃发展，为渔民带来可观的收入。在色彩艳丽、形状奇特的众多观赏鱼品种中，来自中国台湾血鹦鹉，成为一支突起异军，市场占有率高，深得消费者喜爱。血鹦鹉是红头丽体鱼（Vieja synsppila Hubbs 1935）和橘色双冠丽鱼(Amphilophus citrinellus)的杂交品种，属鲈形目(Percifoimes)、慈鲷科(Cichlidae)。俗称红财神、财神鱼。由于品系管理缺失和盲目杂交原因，造成品系混乱，性状稳定性差，有关血鹦鹉细胞遗传学研究鲜见报道。鉴于此，天津市水产研究所观赏鱼技术工程中心开展血鹦鹉细胞遗传学基础研究，旨在为今后开展血鹦鹉品种鉴定及研发工作奠定基础。

1　材料和方法

1.1材料

实验鱼20尾，采自天津市里自沽农工商实业总公司，体重在50-80g，暂养实验室水族箱。

1.2方法

1.2.1制片：采用林义浩植物血细胞凝集素（PHA）体内注射法，按10μg/g体重在实验鱼胸鳍基部向鱼体内注射PHA。经24H后注射秋水仙素，剂量2μg/g鱼体重。再经过4h小时，断尾放血后，取鱼的头肾组织于有生理盐水的培养瓶中，用镊子撕碎组织块，使之成为匀浆的组织液，静置5min,待未碎的组织块沉淀，用吸管收集上层匀浆的细胞悬液，加入离心管，以1000-1500r/min离心5min。低渗：从离心管中小心吸除上清液，加入0.0375mol/L氯化钾（KCL）溶液低渗，将低渗液与细胞沉淀吹打均匀，室温静置50min。再加入0.5ml卡诺氏固定液，吹打均匀，以1500r/min离心5min。固定：从离心管中吸除上清液，加入卡诺氏固定液，吹打均匀后，静置15-20min，以1500r/min离心5min。重复固定三次。经三次固定后，从离心管中吸除上清液，再加入适量固定液，将细胞吹打均匀，采用冷片法滴片，过火，即看到载玻片上燃起蓝色火焰即可，用磷酸盐缓冲液（pH7.2）将Giemsa原液按9:1稀释染色。

1.2.2组型分析：使用OLYMPUS BX53显微镜高倍镜下观察60个以上染色体分散良好且完整中期分裂相，确定染色体的数目。用cellsen系统采集图像，挑选10个染色体分散好，无重叠、形态清晰，测量及配对排列。按照Levan等的分组标准列出染色体组型，计算染色体臂数NF。

2　结果

2.1染色体数目

对血鹦鹉两个品系133中期细胞分裂相染色体进行计数，其中白色的血鹦鹉染色体数目2n=47，红色血鹦鹉染色体数目2n=48。红色血鹦鹉的染色体数与何丽等实验报道数目一致。见表1。

表1　血鹦鹉的染色体数分布

2.2染色体组型

按照Levan等分组标准，对红、白两个品系的染色体组型分析，核型分别是：红色血鹦鹉2n=48，10sm+38st，总臂数NF=58；白色血鹦鹉2n=47，19sm+28st，总臂数NF=66。见表2

表2　血鹦鹉红白两种品系染色体组型

图1　血鹦鹉红色品系中期分裂相

图2　血鹦鹉红色品系染色体组型

图3　血鹦鹉白色品系染色体中期分裂相?

图4　血鹦鹉白色品系染色体组型

3　.讨论

3.1实验中的血鹦鹉红、白两个品系染色体分别为48和47。血鹦鹉的70个细胞分裂相中，染色体数低于48的35个分裂相，可能是由于细胞低渗导致染色体丢失或是染色体分散不好造成重叠引起计数误差。当然白色的血鹦鹉的63个细胞分裂相中，有21个分裂相染色体数低于47，也是这个原因。

3.2鱼类染色体数与其分类学类群及进化程度有关。小岛吉雄把真骨鱼类划分为低等类群、中等类群和高等类群三大类群。进化处于低位的类群，染色体数目一般偏高，进化上属于高位类染色体数目比较集中，血鹦鹉属高位类鲈形目鱼类。董元凯指出鲈形目鱼类是以端部着丝点染色体的占多数，这与我们的实验结果是一致的。染色体是遗传物质的载体，其核型具有一定程度的物种特异性，血鹦鹉红、白两个品系是通过同一次杂交获得杂交后代不同的质量性状的表现型,染色体数分别是48和47。牛文涛等指出细胞水平的核型还是不能充分反映不同物种的差异，还需要通过带型分析或者是分子标记方法来进行区分的。

3.3实验中采用头肾组织进行制片。本次试验获得的分裂相，较以往相同实验的其他鱼类要少。要采集足够分裂相且染色体清晰图像，需增加实验的工作量和工作难度，本实验的分裂相少可能是缘于这种鱼类的肾组织不发达的缘故。人们普遍以为鱼类细胞分裂指数低，需要辅助植物凝集素PHA来促进细胞分裂。然而不同鱼类的不同组织细胞分裂指数不尽相同。有的鱼类肾组织不发达，获得分裂相就少，可改用脾脏，也能获得清晰的分裂相。建议属于高等类群的鱼类，如果脾脏发达，最好采用脾脏，能取得较好的效果。