加味参附姜苓汤对围月经期咳嗽变异性哮喘患者血清MMP-2、MMP-9及TIMP-1表达的影响

陈世伟，李卫青，李巨奇，王建国*（1.深圳市罗湖区人民医院，广东深圳518001；2.深圳市第五人民医院，广东深圳518001；.湖南中医药大学中医诊断学湖南省重点实验室，湖南长沙410007）



加味参附姜苓汤对围月经期咳嗽变异性哮喘患者血清MMP-2、MMP-9及TIMP-1表达的影响

陈世伟1,2，李卫青1,2，李巨奇1,2，王建国3*
（1.深圳市罗湖区人民医院，广东深圳518001；2.深圳市第五人民医院，广东深圳518001；3.湖南中医药大学中医诊断学湖南省重点实验室，湖南长沙410007）

〔摘要〕目的研究加味参附姜苓汤对围月经期咳嗽变异性哮喘患者血清金属基质蛋白酶-2（MMP-2）、金属基质蛋白酶-9 （MMP-9）及金属基质蛋白酶抑制剂-1（TIMP-1）表达的影响，探讨其治疗围月经期咳嗽变异性哮喘的作用机制。方法将围月经期咳嗽变异性哮喘患者80例，随机分为治疗组和对照组各40例。治疗组服用加味参附姜苓汤治疗，对照组口服氨茶碱缓释片联合酮体芬片治疗，疗程3个月。观察两组疗效及治疗前后血清MMP-2、MMP-9及TIMP-1表达变化。结果治疗组总有效率为90.0%，对照组为72.5%，治疗组疗效优于对照组（P＜0.05）。治疗后两组血清MMP-2、MMP-9及TIMP-1表达水平显著降低（P＜0.05，P＜0.01），且治疗组降低较对照组显著（P＜0.05，P＜0.01）。结论加味参附姜苓汤对围月经期咳嗽变异性哮喘具有较好的疗效，其可能通过下调患者血清MMP-2、MMP-9及TIMP-1表达而发挥治疗作用。

〔关键词〕咳嗽变异性哮喘；围月经期；加味参附姜苓汤；金属基质蛋白酶-2；金属基质蛋白酶-9；金属基质蛋白酶抑制剂-1

Effect of Modified Shenfu Jiangling Decoction on the Expression of Serum MMP-2, MMP-9 and TIMP-1 in Premenstrual and Menstrual Cycle Patients with Cough Variant Asthma

CHEN Shiwei1,2, LI Weiqing1,2, LI Juqi1,2, WANG Jianguo3*
（1.Shenzhen Luohu People's Hospital, Shenzhen, Guangdong 518001, China; 2.The Fifth People's Hospital of Shenzhen City, Shenzhen, Guangdong 518001, China; 3.Hunan Provincial Key Laboratory of Diagnostics in Chinese Medicine, Hunan University of Chinese Medicine, Changsha, Hunan 410007, China）

〔Abstract〕Objective To explore the influence of modified Shenfu Jiangling Decoction on serum MMP-2, MMP-9 and TIMP-1 in premenstrual and menstrual cycle patients with cough variant asthma. Methods 80 patients with cough variant asthma in premenstrual and menstrual cycle were randomly divided into the treatment group（40 cases）and the control group （40 cases）. The treatment group was treated with modified Shenfu Jiangling Decoction, the control group was treated with aminophylline sustained-release tablets combined with finland ketone tablets, the course for 3 months. The serum MMP-2, MMP -9 and TIMP -1 expression levels by enzyme -linked immunosorbent assay. Results The total effective rate in the treatment group was 90%, the control group with 72.5%, the effect of treatment group was suprior to the control group（P＜0.05）. The level of MMP-2, MMP-9 and TIMP-1 of the treatment group were significantly decreased（P＜0.05, P＜0.01）, and the decrease degree of treatment group was better than control group（P＜0.05,P＜0.01）. Conclusion The modified Shenfu Jiangling Decoction showed good curative effect on patients with cough variant asthma in premenstrual and menstrual cycle. Its machanism may be associated with down-regulation the expression levels of serum MMP-2, MMP-9 and TIMP-1.

〔Keywords〕cough variant asthma; premenstrual and menstrual cycle; Jiawei Shenfu Jiangling Decoction; MMP-2；MMP-9；TIMP-1

围月经期咳嗽变异性哮喘是一种特殊的咳嗽变异性哮喘，多发于育龄期妇女，约占哮喘妇女的30%～40%[1-2]。围月经期咳嗽变异性哮喘仅表现为慢性、反复发作性咳嗽，月经前及月经期加重，临床体查、辅助检查均无明显肺部阳性及感染性指征[3-4]。当前研究显示，围月经期咳嗽变异性哮喘病理生理表现为气道慢性非特异性炎症及气道细胞外基质降解与结构重塑[3-4]；细胞外基质合成与降解平衡失衡是引起围月经期咳嗽变异性哮喘气道炎症与气道重塑的重要因素[5-6]，而金属基质蛋白酶-2（MMP-2）、金属基质蛋白酶-9 （MMP-9）及其抑制剂-1（TIMP-1）是重要的细胞外基质代谢限速酶，其中MMP-2、MMP-9具有促进基质降解的作用，TIMP-1抑制MMP-2、MMP-9活性，使细胞外基质降解减少，沉积增多，导致结构重塑[7-8]。陈世伟教授认为，围月经期咳嗽变异性哮喘基本病机是热入血室，肺肾阳虚，痰瘀内结[9]，临证每以加味参附姜苓汤治之，疗效显著。本研究拟探讨加味参附姜苓汤对围月经期咳嗽变异性哮喘患者血清MMP -2、MMP -9及TIMP-1的影响，以明确其作用机制，为临床应用提供科学依据。

1　资料与方法

1.1一般资料

选取2014年9月-2015年1月于深圳市罗湖区人民医院中医科就诊的围月经期咳嗽变异性哮喘患者80例，随机分为治疗组和对照组各40例。治疗组平均年龄（32.72±5.48）岁，平均病程（54.17± 24.99）月；对照组平均年龄（32.90±6.11）岁，平均病程（51.72±23.72）月。两组患者年龄、病程差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。本研究经深圳市罗湖区人民医院伦理委员会审查通过。

1.2病例选择

1.2.1诊断标准符合咳嗽的诊断与治疗指南（2009版）[10]中咳嗽变异性哮喘相关诊断标准，并且符合月经前期4 d、月经期及月经后3 d哮喘发作或者加重的标准。

1.2.2纳入标准（1）符合诊断标准；（2）年龄18～40岁；（3）自愿参加，签署知情同意书。

1.2.3排除标准（1）肺结核、肺癌、哮喘；（2）严重肝、肾功能不全、心功能衰竭等心、肺、肾疾病；（3）精神意识障碍者；（4）入选本次研究前2周曾使用过糖皮质激素者；（5）2周内服用过白三烯受体调节剂者。

1.3治疗方法

治疗组服用加味参附姜苓汤，方药组成：制附片10 g（先煎1 h），干姜15 g，红参15 g（另炖，冲服），茯苓30 g，五味子15 g，细辛10 g，柴胡15 g，黄芩10 g，法半夏10 g，乌药10 g（后下），鸡血藤30 g，淫羊藿30 g，炙甘草15 g。所有中药饮片均由深圳市罗湖区人民医院药剂科统一购制及发药。每日1剂，水煎，早晚2次分服。对照组予以口服氨茶碱缓释片（修正药业集团股份有限公司，0.1 g/片）0.1-0.2 g，3次/d；酮体芬片（海南制药厂有限公司制药一厂，1 mg/片）1 mg，1次/d。两组连续治疗3个月。

1.4血清MMP-2、MMP-9及TIMP-1表达水平检测

两组患者均于治疗前日清晨和治疗结束后次日清晨，空腹采集外周静脉血，3 000 r/min，离心10 min，取血清，采用双抗体夹心酶联免疫吸附法检测血清MMP-2、MMP-9及TIMP-1表达水平。试剂盒由博士德生物工程有限公司提供。按试剂盒说明书进行检测。

1.5疗效评价标准[10]

显效：治疗期间和疗程结束后，哮喘消失，随访3个月不复发；有效：治疗期间和治疗结束后，哮喘发作明显减少、程度减轻；无效：治疗前后，哮喘发作次数无明显减少，程度也无明显减轻。

1.6统计学分析

2　结果

2.1两组疗效比较

治疗组的临床疗效优于对照组，差异具有统计学意义（P＜0.05）。结果见表1。

表1　两组临床疗效比较　（例）

2.2两组治疗前后MMP-2、MMP-9及TIMP-1表达水平比较

治疗前两组患者血清MMP-2、MMP-9及TIMP-1表达水平差异无统计学意义（P＞0.05）；治疗后两组各项指标均明显降低（P＜0.05，P＜0.01），且治疗组降低更显著（P＜0.05，P＜0.01）。提示加味参附姜苓汤可下调围月经期咳嗽变异性哮喘血清MMP-2、MMP-9及TIMP-1表达。结果见表2。

表2　两组血清MMP-2、MMP-9及TIMP-1表达水平比较（±s）

表2　两组血清MMP-2、MMP-9及TIMP-1表达水平比较（±s）

注：与治疗前比较＃P＜0.05，＃＃P＜0.01；与对照组治疗后比较△P＜0.05，△△P＜0.01。

组别 　　MMP-2 （pg/L）MMP-9 （ng/L）TIMP-1 （ng/L）治疗组（ ＝40） 　治疗后 　1401.94±148.86 　250.25±26.34 　204.52±27.19治疗前 　　2014.88±73.40 　367.20±14.72 　304.58±19.75治疗前 　2017.07±73.81 　370.30±17.77 　292.16±21.35 n ＃＃△　＃＃△　＃＃△△对照组（ ＝40） 　治疗后 　　1516.81±140.96 　274.36±23.29 　234.38±37.37 n＃＃＃

3　讨论

作为咳嗽变异性哮喘的一种特殊的亚型，围月经期咳嗽变异性哮喘临床症状较单纯的月经性哮喘更为隐匿。李卫青、陈世伟教授认为，女性生理特点表现为：月经前期阳盛阴消，阴充阳盛肾阳由盛趋衰；月经期激素水平降低，阳气至重，重阳转阴；月经后期，血海空虚，肾阴不充；月经间期重阴转阳，阴阳转化。当上述周期循行失常时，病情日久，反复发作，肾精虚耗，累及肺中阳气，水津输布失职，聚液生痰，久病成瘀，痰瘀互结，则形成围月经期咳嗽变异性哮喘“肺肾阳虚，痰瘀内结”的基本病机[5]，临床多采用加味参附姜苓汤治疗，取得满意疗效。加味参附姜苓汤以苓甘五味姜辛汤温补肺阳，四逆汤温固肾阳，小柴胡汤调畅枢机，解血室之邪，三方合一，三阴同治；并纳入乌药温肾纳气，法夏降气化痰，鸡血藤补血调经、活血通络，淫羊藿温肾助阳，固元阳之根本。诸药合用，共奏温补肺肾、化痰祛瘀调畅枢机之功。然其确切的作用机制尚不明确，科学的实证依据缺失，极大影响了该方药的临床推广应用。

有研究认为，围月经期咳嗽变异性哮喘的主要病机是气道慢性非特异性炎症及气道细胞外基质降解与结构重塑[3-4,11]。新近研究表明，细胞外基质代谢限速酶MMP-2、MMP-9及其抑制剂TIMP-1系统失衡是引起炎症及气道细胞外基质降解与结构重塑的关键因素[6-7]。MMP-2、MMP-9是降解IV型胶原的主要蛋白酶，通过激活基质TGF-β1等释放及诱导细胞增殖、分化参与气道重塑，并通过降解血管及上皮下胶原成分促进新的血管及上皮形成而导致气道纤维化[8-9,12-13]。TIMP-1是MMPs活性主要抑制剂之一，通过与MMP-2、MMP-9的催化位点结合或与酶原的某些位点结合而抑制MMP-2、MMP-9活性，使细胞外基质降解减少，并使其降解产物在黏膜下层聚集，引起气道壁增厚，促使气道重塑的发生及进展[8-9，14]，被认为是气道重塑的标志。因此，调节MMP-2、MMP-9及TIMP-1表达水平，抑制气道慢性非特异性炎症及气道重塑是治疗围月经期咳嗽变异性哮喘的新的重要策略和药物靶点。

本研究结果显示，治疗前两组患者MMP-2、MMP-9水平均较高，提示MMP-2、MMP-9通过激活基质TGF-β1等释放及诱导细胞增殖、分化，降解血管及上皮下胶原成分促进新的血管及上皮形成而参与围月经期咳嗽变异性哮喘的慢性非特异性炎症及气道重塑。在MMP-2、MMP-9高表达的同时，TIMP-1亦随之升高，提示炎症反应过程中MMP-2、MMP-9的增高刺激TIMP-1反应性增高，促进胶原纤维的异常增生及过度沉积，促使气道重塑的发生及进展。经加味参附姜苓汤治疗后，实验组患者MMP-2、MMP-9及TIMP-1表达均下降，且显著优于对照组，提示加味参附姜苓汤可能通过调节MMP-2、MMP-9及TIMP-1的表达而发挥其治疗作用。

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（本文编辑马薇）

·文献综述·

〔通讯作者〕*王建国，男，副主任医师，E-Mail：707973244@qq.com。

〔作者简介〕陈世伟，男，副主任中医师，研究方向：肺系疾病中医证治规律的临床研究。

〔基金项目〕广东省中医药科学技术计划项目（20142133）

〔收稿日期〕2015-08-01

〔中图分类号〕R256.12

〔文献标识码〕B

〔文章编号〕

doi:10.3969/j.issn.1674－070X.2016.02.018