HPLC法测定埃索美拉唑钠的有关物质

马　延，王　媛，罗智敏，常　春，傅　强*(.西安交通大学药学院，西安　7006；. 西安新通药物研究有限公司，西安　70077)



HPLC法测定埃索美拉唑钠的有关物质

马延1，2，王媛2，罗智敏1，常春1，傅强1*(1.西安交通大学药学院，西安710061；2. 西安新通药物研究有限公司，西安710077)

摘要：目的建立HPLC法测定埃索美拉唑钠的有关物质。方法采用Capcell Pak C18色谱柱，流动相采用0.01 mol·L-1磷酸盐缓冲液(pH=7.6±0.2)4-乙腈梯度洗脱，流速为1.0 mL·min-1，检测波长为280 nm。结果在选定的色谱条件下，主成分与各已知杂质分离度良好。H431/41、H118/87、H168/66、埃索美拉唑钠、H193/61和奥美拉唑硫醚进样量分别在0.8～66.3 ng(r=0.999 9)、2.0～59.1 ng(r=0.999 5)、1.0～75.6 ng(r=0.999 9)、0.5～149.7 ng(r=0.999 9)、1.0～74.7 ng(r=1.000 0)和1.4～94.8 ng(r=0.999 5)范围内，与峰面积呈良好线性关系。RSD均在0.54%～0.82%范围内，精密度良好。供试品溶液在室温下不稳定，应临用新配。结论该法可用于检测埃索美拉唑钠的产品质量。

关键词：埃索美拉唑钠；有关物质；反相高效液相色谱法

埃索美拉唑钠是奥美拉唑的S-异构体，目前已在国内批准上市，主要用于胃食管反流性疾病(GERD)-糜烂性反流性食管炎的治疗[1-2]。各国药典均未收载埃索美拉唑钠盐标准，仅收载了其镁盐标准[3-5]。国内关于埃索美拉唑钠盐和镁盐的有关物质和含量测定报道很多[6-8]，但在测定有关物质时，仅考虑了已知杂质和工艺杂质，且选择在埃索美拉唑钠母体药物的最大吸收波长下(302 nm)测定的有关物质，存在一定的局限性。本文在文献方法的基础上，以样品在长期储存过程中的降解杂质为主，选择280 nm作为有关物质的检测波长，采用自身对照法进行定量，进一步优化并建立HPLC法对埃索美拉唑钠中杂质的控制方法，并对该法进行了全面的方法学研究，拟建立一种专属性强、灵敏度高、能对埃索美拉唑钠中杂质进行有效控制的方法。埃索美拉唑及其主要杂质的结构式见图1。

图1埃索美拉唑钠及其主要杂质的结构式

a.H431/41；B.H118/87；C.H168/68；D.埃索美拉唑钠；E.H193/61；F.奥美拉唑硫醚

Fig.1 Structures of esomeprazole sodium and its related substances

a.1，4-2H-1-(5-methoxy-1H-benzimidazole-2-xy)-3，5-dimethyl-4-oxy-2-pyridinecarboxylic acid； B.5-methoxy-2-mercaptobenzimidazole；C.omeprazole sulfone；.D.esomeprazole sodium；E.1-methyl-5-methoxy-2-((4-methoxy-3，5-dimethyl-2-pyridyl) methyl) sulfinyl-benzimidazole；F.omeprazole sulfide

1仪器与试药

1.1仪器岛津LC-2010AHT高效液相色谱仪；岛津LC-Solution 色谱工作站。

1.2试药埃索美拉唑钠原料(西安新通药物研究有限公司，批号140301，140302，140303)；A(苏州朗科生物技术有限公司，批号120716)；B(天津卡普希科技有限公司，批号CAPC052402)；C(中国药品生物制品检定所，批号100838-200601)；E(苏州朗科生物技术有限公司，批号120224)；F(西安新通药物研

究有限公司，批号131101)；乙腈为色谱纯，购自Merck公司；水为重蒸馏水；其他试剂均为分析纯。

2方法与结果

2.1色谱条件采用Capcell Pak C18色谱柱(250 mm×4.6 mm，5 μm);流动相采用0.01 mol·L-1磷酸盐缓冲液(pH=7.6±0.2)(A)-乙腈(B)梯度洗脱(表1);流速为1.0 mL·min-1;检测波长为280 nm;进样量为20 μL。

表1梯度洗脱顺序表

Tab.1 Gradient elution program

时间/minAB08812107525303565318812408812

2.2溶液的制备

2.2.1供试品溶液取埃索美拉唑钠10 mg，精密称定，置于50 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液，临用新配。

2.2.2对照溶液精密吸取供试品溶液5 mL，置于100 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，再精密吸取上述溶液1 mL，置于10 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。

2.3系统适用性分别取A，B，C，D，E和F各10 mg，精密称定，置于同一50 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，精密吸取250 μL，置于10 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为系统适用性溶液，进样20 μL，记录色谱图，结果见图2。

2.4专属性取埃索美拉唑钠50 mg，精密称定，置于25 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为储备液。精密吸取储备液1 mL，置于10 mL量瓶中，作为未破坏溶液，进样20 μL，记录色谱图。精密吸取储备液1 mL，置于10 mL量瓶中，加体积分数为0.3%的过氧化氢溶液1 mL，摇匀，室温放置10 min，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为氧化破坏溶液，进样20 μL，记录色谱图。精密吸取储备液1 mL，置于10 mL量瓶中，加0.1 mol·L-1的盐酸溶液1 mL，摇匀，室温放置5 min，加入0.1 mol·L-1的氢氧化钠溶液1 mL中和，加甲醇稀释至刻度，摇匀作为酸破坏溶液，进样20 μL，记录色谱图。精密吸取储备液1 mL，置于10 mL量瓶中，加0.1 mol·L-1的氢氧化钠溶液1 mL，摇匀，室温放置12 h，加入0.1 mol·L-1的盐酸溶液1 mL，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为碱破坏溶液，进样20 μL，记录色谱图。精密吸取储备液1 mL，置于10 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，在高温条件(60 ℃)下放置3 h，作为高温破坏溶液，进样20 μL，记录色谱图。精密吸取储备液1 mL，置于10 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，在光照条件(4 500±500 lx)下放置12 h，作为光破坏溶液，进样20 μL，记录色谱图。见图3。

图2系统适用性HPLC图

1.H431/41；2.H118/87；3.H168/68；4.埃索美拉唑钠；5.H193/61；6.奥美拉唑硫醚

Fig.2 HPLC chromatograms of system suitability

1.1，4-2H-1-(5-methoxy-1H-benzimidazole-2-xy)-3，5-dimethyl-4-oxy-2-pyridinecarboxylic acid； 2.5-methoxy-2-mercaptobenzimidazole；3.omeprazole sulfone；.4.esomeprazole sodium；5.1-methyl-5-methoxy-2-((4-methoxy-3，5-dimethyl-2-pyridyl)methyl)sulfinyl-benzimidazole；6.omeprazole sulfide

图3破坏实验HPLC图

a.未破坏样品; B.氧化破坏; C.酸破坏; D.碱破坏; E.高温破坏; F.光照破坏;1.H431/41；2.H118/87；3.H168/68；4.埃索美拉唑钠；5.H193/61；6.奥美拉唑硫醚

Fig.3 HPLC chromatograms of degradation test

a.sample undestroyed; B.destroyed by oxidation; C.destroyed by acid; D.destroyed by alkali; E.destroyed by heat; F.destroyed by strong light; 1.1，4-2H-1-(5-methoxy-1H-benzimidazole-2-xy)-3，5-dimethyl-4-oxy-2-pyridinecarboxylic acid； 2.5-methoxy-2-mercaptobenzimidazole；3.omeprazole sulfone；4.esomeprazole sodium；5.1-methyl-5-methoxy-2-((4-methoxy-3，5-dimethyl-2-pyridyl)methyl)sulfinyl-benzimidazole；6.omeprazole sulfide

破坏实验与已知杂质相关性：埃索美拉唑钠原料在溶液状态下对氧化、酸、碱、高温、光照均不稳定，杂质A在高温、光照破坏下均降解产生；杂质B在高温下由硫醚键断裂产生；杂质C为氧化破坏的主要杂质，由结构中的亚砜氧化成砜；杂质E和F主要在酸和高温破坏下产生。

2.5峰纯度实验选用破坏杂质较多的高温破坏后的供试液与未破坏供试液，在带光二极管阵列检测器的液相色谱仪中进样，检测峰纯度，高温破坏样品及未破坏样品的主峰峰纯度大于其单点纯度阈值，可表明在此实验条件下，能够检测到可能产生的杂质，且主峰中未包裹其他杂质，表明本系统适用性良好。

2.6线性与范围精密称取A，B，C，D，E和F适量，配制成1 mL含0.2 mg·mL-1的溶液，作为各杂质储备溶液。分别精密吸取各杂质储备溶液适量，配制成1 mL分别含A，B，C，D，E和F 2.5 μg的混合溶液，分别进样不同体积，以进样量为横坐标、峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，并进行线性回归分析，结果见表2。

表2各杂质线性范围测定结果

Tab.2 The results of linear regression of the investigated impurities

化合物回归方程线性范围/ngrH431/41Y=1673．9X-49．770．8～66．30．9999H118/87Y=916．3X+386．962．0～59．10．9995H168/66Y=1462．8X+59．7551．0～75．60．9999H193/61Y=1567．1X+105．361．0～74．71．0000奥美拉唑硫醚Y=1260．5X+760．631．4～94．80．9995埃索美拉唑钠Y=1411．5X+551．990．5～149．70．9999

2.7精密度实验取埃索美拉唑钠原料及各杂质(H431/41、H118/87、H168/66、H193/61、奥美拉唑硫醚)适量，稀释制成1 mL含埃索美拉唑钠及各杂质均约2.5 μg的混合溶液，6种混合溶液的主峰及各个杂质峰峰面积的RSD均在0.54%～0.82%范围内，满足系统适用性要求(≤2%)，表明该方法的精密度良好。

2.8溶液稳定性实验配制供试品溶液，在室温下连续进样12 h。供试品溶液在室温下保存不稳定，杂质个数及杂质量均有所增加，因此应临用新配。

2.9流动相pH值的考察将流动相的pH值调至7.40，7.60和7.80，分别在不同色谱条件下，取系统适用性溶液，进样进行比较，见图4。结果表明，pH值影响各峰的相对保留时间以及各峰之间的分离度，但各峰之间的分离度均能符合规定，因此该方法对流动相在pH值为7.6±0.2的范围内波动具有良好的耐用性。

2.10样品测定取本品3样品埃索美拉唑钠10 mg，精密称定，置于50 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液，临用新配。精密量取供试品溶液5 mL，置于100 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，再精密量取1 mL，置于10 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。取对照溶液20 μL，注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分峰的峰高约为满量程的10%～20%；再精密量取对照溶液及供试品溶液各20 μL，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。用自身对照法计算各杂质的量及杂质总和。结果见表3。

图4不同pH值流动相系统适用性溶液HPLC图

a. 流动相pH为7.40系统适用性溶液； B.流动相pH为7.60系统适用性溶液； C.流动相pH为7.80系统适用性溶液;

1.H431/41；2.H118/87；3.H168/68；4.埃索美拉唑钠；5.H193/61；6.奥美拉唑硫醚

Fig.4 HPLC chromatograms of different mobile phase pH

a.system suitability solution with mobile phase pH 7.40;B.system suitability solution with mobile phase pH 7.60;C.system suitability solution with mobile phase pH 7.80;1.1，4-2H-1-(5-methoxy-1H-benzimidazole-2-xy)-3，5-dimethyl-4-oxy-2-pyridinecarboxylic acid； 2.5-methoxy-2-mercaptobenzimidazole；3.omeprazole sulfone；.4.esomeprazole sodium；5.1-methyl-5-methoxy-2-((4-methoxy-3，5-dimethyl-2-pyridyl)methyl)sulfinyl-benzimidazole；6.omeprazole sulfide

表3有关物质测定结果

Tab.3 Content determination results of the related substances

杂质1403011403021404014A---B---C(%)0．020．030．04E---F---未知杂质(%)0．030．030．03杂质个数2．002．002．00总杂(%)0．050．060．07

注：-表示为未标注。

3讨论

文献中，埃索美拉唑钠、埃索美拉唑镁及奥美拉唑类原料或制剂有关物质波长多选择在280 或302 nm，本实验采用DAD检测器对已知杂质及高温破坏下未知杂质进行检测，以观察杂质的吸收波长。结果，在系统适用性溶液色谱图中，埃索美拉唑钠主峰与已知杂质A，B，C，E和F都在302 nm附近有最大吸收；而高温破坏溶液色谱图中，各未知杂质均在280 nm附近有最大吸收，分析其原因，可能是有关物质控制杂质的侧重点不同，考虑到已知杂质有对照品可参考，且样品在长期储存过程中以降解杂质为主，因此本实验中，拟定选择280 nm作为有关物质检测波长，重点控制未知杂质的含量。

在线性实验中得出,已知杂质的线性回归方程：Y=aX+b，通过比较埃索美拉唑钠的斜率与各已知杂质的斜率之比可得到各已知杂质的校正因子。结果表明，杂质C、E和F的校正因子均在0.9～1.1之间，杂质的量可以按照不加校正因子的自身对照法来进行计算。杂质A的校正因子为0.84，如果按照加校正因子的自身对照法来计算，即主峰自身对照的峰面积乘以校正因子0.84，计算结果比不加校正因子的自身对照法相比，该杂质的含量偏低。为了能更严格的控制杂质的量，且该杂质的校正因子接近0.9，因此对该杂质的计算仍然按照不加校正因子的自身对照法计算其含量。杂质B的校正因子不在0.9～1.1之间，需要采用加校正因子的自身对照法来计算其含量。

参考文献：

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Related substances analysis for esomeprazole sodium by HPLC

MA Yan1，2，WANG Yuan2，LUO Zhimin1，CHANG Chun1，FU Qiang1*(1.School of Pharmacy，Xi′an Jiaotong University，Xi′an 710061，China；2.Xi′an Xintong Pharmacy Limited Company, Xi′an 710077，China)

Abstract:Objective To establish an HPLC method for the determination of related substances of esomeprazole sodium. Method The determination was performed on a Capcell Pak C18column. The mobile phase consisted of acetonitrile and 0.01 mol·L-1phosphate buffer(pH=7.6±0.2).The flow rate was 1.0 mL·min-1and the detection wavelength was 280 nm. Results Related substances were completely separated from the main constituent. H431/41, H118/87, H168/66, esomeprazole sodium, H193/61 and omeprazole sulfide showed good linearity over the ranges of 0.8-66.3 ng(r=0.999 9)，2.0-59.1 ng(r=0.999 5),1.0-75.6 ng(r=0.999 9)，0.5-149.7 ng(r=0.999 9)，1.0-74.7 ng(r=1.000 0) and 1.4-94.8 ng(r=0.999 5)，respectively. The RSD was 0.54%-0.82% and the precision was satisfactory. Conclusion The esteblished method can be used for testing the product quality of esomeprazole sodium.

Key words:esomeprazole sodium；related substances；HPLC

(收稿日期：2015-06-11)

*通信作者：傅强，男，博士，教授，博士生导师

作者简介：马延，男，在职硕士研究生

中图分类号：R927.2

文献标志码：A

文章编号：1004-2407(2016)02-0154-04

doi:10.3969/j.issn.1004-2407.2016.02.013