Yes相关蛋白在妇科恶性肿瘤中的研究进展

周青峰，罗慧，朱雪琼

（温州医科大学附属第二医院　妇产科，浙江　温州　325027）



・综 述・

Yes相关蛋白在妇科恶性肿瘤中的研究进展

周青峰，罗慧，朱雪琼

（温州医科大学附属第二医院妇产科，浙江温州325027）

Yes相关蛋白（YAP）是转录活化剂，可调节细胞增殖、诱导细胞分化、促进器官发育等。近年来研究表明，YAP在多种恶性肿瘤中特异性表达并参与调节癌细胞的多种生物学活性。本文就YAP在妇科恶性肿瘤进展中的表达，早期诊断、治疗和预后评价中的作用进行综述。

Yes相关蛋白；宫颈肿瘤；卵巢肿瘤；子宫内膜肿瘤；综述文献

Yes相关蛋白（Yes-associated protein，YAP）定位于染色体11q22，由氨基酸序列组成，该序列包含有TEA域转录因子（TEA domain transcription factors，TEAD），即WW域和C-末端反式激活域［1］。YAP是一种转录活化剂，为Hippo信号通路的主要组成部分，NDR激酶家族Lats1/2作为YAP的上游因子，可通过HXRXXS序列，包括YAP的丝氨酸127（Ser127）促使YAP发生磷酸化作用，从而抑制YAP的转录激活功能。上游因子的失活可使YAP在细胞核累积，促使其结合到TEAD，从而调节目标基因的表达［2］。YAP在调节细胞增殖、存活和分化，器官的发育、再生和干细胞生物学功能等方面起了关键性的作用。

研究表明，YAP在多种恶性肿瘤中表达异常，如结肠癌、肝癌、肺癌、前列腺癌、乳腺癌、口腔鳞癌、成神经管细胞瘤、食管鳞癌等［3-5］，它的表达水平与肿瘤的发生、发展、转移、侵袭及临床预后有着密切的联系。但关于YAP在妇科肿瘤中的研究并不多。本文对YAP在妇科恶性肿瘤中的研究进展进行综述。

1　YAP在宫颈癌中的表达

1.1YAP在宫颈癌癌变中的表达变化 Liu等［6］采用免疫组织化学法检测22例正常宫颈组织和120例宫颈鳞癌组织中YAP的表达，结果显示YAP在正常宫颈上皮细胞不表达，在宫颈鳞癌组织中有30.8%的阳性表达，主要表达在细胞质。Xiao等［7］对宫颈上皮内瘤变（cervical intraepithelial neoplasia，CIN）及宫颈癌组织进行回顾性研究，经免疫组织化学法检测，发现YAP在慢性宫颈炎、CIN I、CIN I I、CIN I和宫颈鳞癌组织中的阳性表达率分别为10.0%（1/10）、22.4%（11/49）、83.6%（46/55）、85.3%（29/34）和93.8%（30/32），随着CIN的进展，YAP表达逐渐增强。在慢性宫颈炎中YAP呈微弱表达，在CIN I级组织中呈强表达，主要集中在细胞质，但在宫颈鳞癌组织中表达最强，主要集中在细胞核。

采用聚合酶链反应检测70例（包括10例慢性宫颈炎、13例CIN I、19例CIN I I、14例CIN I和14例宫颈鳞癌）组织中人乳头瘤病毒（human papillomavirus，HPV）感染情况，结果显示57例组织HPV表达阳性，YAP在HPV阳性表达组织的阳性表达率为54.4%，明显高于HPV阴性组织的表达率（为23.1%），相关分析提示YAP阳性表达与HPV感染有关，两者结合可用来鉴别宫颈良性病变和癌前病变［7］。

1.2YAP与宫颈癌临床病理系数的相关性 YAP在宫颈鳞癌细胞质中表达阳性率为30.8%，其在宫颈腺癌细胞质和细胞核均存在阳性表达，阳性率分别为45.2%和26.2%［6］。Xiao等［7］发现YAP在宫颈鳞癌不同分化的组织（4例宫颈角化型、21例大细胞非角化型和7例小细胞非角化型）中的阳性表达率分别为100.0%、95.2%和85.7%，但差异无统计学意义，表明YAP在宫颈鳞癌的表达与组织分化无关。Liu等［6］发现YAP在宫颈鳞癌细胞质的表达虽然与患者年龄、FIGO分期、肿瘤组织大小、基质浸润深度、淋巴血管间隙浸润和癌旁浸润无关，但与组织学分级、淋巴结转移和复发呈高度正相关。YAP在宫颈腺癌细胞质的高表达与组织学分级呈高度正相关，其在细胞核的表达与FIGO分期和淋巴血管间隙浸润有关。1.3 YAP与宫颈癌预后的相关性 Liu等［6］发现在120例宫颈鳞癌中，患者5年总生存率和无病生存率分别为79.2%和79.1%，经Kaplan-Meier方法和秩和检验，发现细胞质中YAP高表达的患者总生存率和无病生存率分别为73.0%和68.5%，明显低于YAP低表达的总生存率（为84.3%）和无病生存率（为83.7%），而单变量分析结果提示患者总生存率和无病生存率与YAP在细胞质中表达无关，提示YAP在宫颈鳞癌细胞质中表达高低与患者预后无关。在42例宫颈腺癌中，患者5年总生存率和无病生存率分别为65.4%和65.0%，单变量分析结果提示宫颈腺癌患者5年总生存率和无病生存率与细胞质中YAP的表达无关，而与其在细胞核中的表达相关。细胞核中YAP高表达的患者5年总生存率和无病生存率均为36.4%，低于YAP低表达的总生存率（为77.9%）和无病生存率（为77.5%），认为YAP在宫颈腺癌细胞核中高表达提示了患者的不良预后。

2　YAP在卵巢癌中的表达

2.1YAP在卵巢癌中的表达变化 Steinhardt等［8］采用免疫组织化学法检测，发现YAP在正常卵巢上皮细胞表面的细胞质和基质细胞呈微量表达，在卵巢癌细胞质和细胞核呈强阳性表达。在正常卵巢组织中，YAP在细胞核表达占25.0%（3/12），在细胞质表达的占50.0%（6/12），但在卵巢浆液性囊腺癌组织中，YAP在细胞核的表达占98.0%（41/42），在细胞质的表达所占比例与其在细胞核的表达相同，提示YAP的表达可能与卵巢浆液性囊腺癌的发生存在相关性。He等［9］通过检测42例正常卵巢组织和342例卵巢癌组织，发现YAP在正常卵巢组织几乎无表达或呈低表达，但在卵巢癌组织的表达显著提高，且主要表达在细胞核。Zhang等［10］同样采用免疫组织化学法检测YAP在284例卵巢癌组织的表达，结果显示YAP在卵巢癌细胞核中高表达，占14.0%。金志红等［11］也发现YAP表达于细胞核和细胞质。YAP在卵巢癌组织阳性表达率为61.8%（42/68），明显高于良性卵巢肿瘤组织（10.5%，4/38）。王君等［12］的研究结果显示，YAP在20例正常卵巢组织、20例良性上皮卵巢肿瘤和53例恶性上皮性卵巢肿瘤的阳性表达率分别为50.0%、65.0%、90.6%，随着恶性程度增加，表达也增加。Fu等［5］发现在卵巢颗粒细胞癌组织中YAP信号强度及其阳性表达率均显著高于正常卵巢组织，且主要表达在细胞核，提示YAP可能与卵巢颗粒细胞癌的发生发展也相关。

Cai等［13］采用免疫组织化学法检测，发现YAP在正常卵巢组织和卵巢癌组织均存在阳性表达，且不同组织表达水平有差异；磷酸化YAP虽然在正常卵巢组织、卵巢良性肿瘤组织和卵巢癌组织均存在表达，但在卵巢癌组织的表达最低。Hall等［14］发现YAP和磷酸化YAP在7例正常卵巢上皮细胞中有5例低表达，YAP表达主要位于细胞核，而磷酸化YAP主要位于细胞质。Xia等［15］研究10例正常卵巢组织和106例卵巢癌组织中YAP和磷酸化YAP的表达，发现YAP主要在卵巢癌细胞核中高表达，占22.64%（24/ 106），但在正常卵巢组织中不表达，磷酸化YAP在卵巢癌组织阳性表达率为11.88%，其中YAP和磷酸化YAP同时在13例卵巢癌组织强表达，提示YAP与卵巢癌的发生发展相关。

2.2YAP与卵巢癌临床病理系数的相关性 王君等［12］发现YAP在上皮性卵巢癌阳性表达与患者年龄、临床分期及淋巴转移无关，其在组织学分级G3中的阳性表达率（为97.1%）明显高于G1-G2级（为77.8%），提示YAP在上皮性卵巢癌阳性表达与组织学分级相关。金志红等［11］的研究结果显示YAP在高分期和低分化的卵巢癌组织中的阳性表达率更高，而与其他病理参数无关，提示YAP的高表达与卵巢肿瘤的恶性程度正相关。He等［9］发现YAP的表达与肿瘤分级和病理类型（卵巢浆液性癌、黏液性癌、透明细胞癌和子宫内膜样癌）无关，与Zhang等［10］研究结果一致，但与区域淋巴结转移和远处转移高度相关［9］。但是Xia等［15］却发现在卵巢癌4种主要病理类型中，YAP主要在卵巢浆液性囊腺癌和子宫内膜样癌中呈强阳性表达。

2.3YAP对卵巢癌细胞生物学行为的影响

2.3.1YAP对卵巢癌细胞增殖的影响：将慢病毒介导的YAP shRNA下调卵巢癌EFO-21细胞中YAP的表达后，有学者［11］发现细胞增殖水平为55.83±3.56，明显低于对照组的121.00±3.19，表明YAP表达降低后会导致卵巢癌细胞增殖的显著减少，提示卵巢癌细胞中YAP通过促进肿瘤细胞增殖来发挥促癌基因功能。Zhang等［10］检测YAP在8种浆液性上皮性卵巢癌细胞系的活性，筛选得到了低活性的OVCA432、OVCAR5和SKOV3细胞和高活性的OVCAR8细胞，接着将空载体、带有野生型YAP、WW域突变的YAP和活化的YAP（YAP-S127A）载体分别转染到3种低活性细胞中，结果显示转染空载体的OVCA432细胞生长较差，野生型YAP仅少量促进细胞在琼脂上的生长，WW域突变的YAP对细胞无作用，而YAP-S127A增加了3种细胞克隆形成能力，分别为OVCA432细胞35倍、OVCAR5细胞2.4倍和SKOV3细胞1.6倍，接着将携带YAP-shRNA-2和YAP-shRNA-3的载体分别转染OVCAR8细胞，发现YAP水平分别减少了35.0%和62.0%，转染YAP-shRNA-2后细胞克隆数与对照组无显著区别，而转染YAP-shRNA-3后细胞克隆数与对照组相比减少了18.0%，提示YAP与上皮性卵巢癌细胞锚定非依赖方式生长是相关的。Xia等［15］研究卵巢癌不同细胞系中YAP表达及其作用，发现YAP在OVCAR8细胞高表达，在A2780细胞低表达。构建高表达有活性YAP 的A2780细胞后，发现细胞增殖活性增高，克隆形成数增多。但构建表达无活性YAP的OVCAR8细胞后，发现细胞活性降低，克隆形成数减少。进一步进行体内试验，将构建好的A2780细胞皮下注射到4周大小的裸鼠，3个星期后观察到肿瘤明显增大，提示YAP可促进卵巢癌细胞增殖。同时发现，YAP可使卵巢癌细胞克服接触抑制而表现出增殖优势。Fu等［5］敲除YAP后，发现不仅抑制了卵巢颗粒细胞中癌细胞的增殖，还可以通过调节细胞的肌动蛋白使细胞形状变为锤形。

2.3.2YAP对卵巢癌细胞凋亡的影响：金志红等［11］将慢病毒介导的YAP shRNA下调卵巢癌EFO-21细胞中YAP的表达，采用流式细胞术检测，发现感染YAP shRNA后细胞凋亡率为（32.75±4.76）%，高于对照组的（8.75±0.15）%，表明敲除YAP的表达导致卵巢癌细胞凋亡比率显著增加，提示卵巢癌中YAP可抑制肿瘤细胞凋亡。Wang等［16］将带有YAP2的质粒转染到卵巢癌A2780细胞，经流式细胞仪检测，发现细胞经顺铂作用24 h后，细胞死亡率降低，提示YAP2可促进卵巢癌细胞的存活。同时发现，脱磷酸YAP可提高其促细胞生存能力。将腺病毒携带的YAP2 shRNA转染到A2780细胞，结果显示YAP2表达下降后，DNA损伤诱导的细胞死亡增加。

2.3.3YAP对卵巢癌细胞侵袭和转移的影响：Fu等［5］分别构建了卵巢颗粒细胞癌KGN-YAP细胞和KGN-YAPS127A细胞，经Transwell小室检测，结果显示KGN-YAP组细胞的迁移率明显高于对照组，但低于KGN-YAPS127A组，提示YAP可促进卵巢颗粒细胞癌细胞的迁移。Xia等［15］研究发现YAP在卵巢癌OVCAR8细胞高表达，在A2780细胞低表达，使A2780细胞高表达有活性的YAP后，经划痕试验和Transwell试验，发现细胞迁移速度变快。而OVCAR8细胞表达无活性YAP后，细胞迁移速度变慢，表明YAP可促进卵巢癌细胞迁移。在体内试验中，构建稳定表达无活性YAP和荧光素酶的卵巢癌高转移细胞系HO8910-PM细胞后，通过尾静脉注射裸鼠，2周后在动物成像系统中发现肺转移，移植瘤大小小于注入HO8910细胞的对照组，经免疫组织化学法检测到移植瘤中存在CA125和YAP的表达。接种后期，发现实验组2只裸鼠肝脏出现转移，而对照组10只裸鼠肝脏全部出现转移，且实验组裸鼠转移结节远少于对照组，提示抑制YAP的活性后可以延缓卵巢癌细胞的转移。Zhang等［10］采用Transwell小室检测，发现卵巢癌OVCA432细胞转染YAP-S127A后，迁移力是对照组的4.3倍，侵袭力为对照组的2倍。但卵巢癌OVCAR8细胞转染YAP-shRNA后，细胞迁移力和侵袭力均明显下降，该作用与YAP调节上皮黏附蛋白的表达相关。

2.4YAP与卵巢癌化疗的相关性 Xia等［15］研究YAP表达与卵巢癌细胞顺铂和紫杉醇敏感性的相关性，采用四甲基偶氮唑盐（methyl thiazolyl tetrazolium，MTT）法检测，结果发现高表达YAP的细胞对顺铂和紫杉醇均表现为药物抵抗作用，相反的，表达无活性YAP的细胞则对药物敏感性增加。同时在体内试验中，在裸鼠皮下注射稳定表达无活性YAP的A2780CP细胞1周后，将顺铂注入裸鼠尾部静脉，每隔3 d注射1次，在第5周观察到裸鼠身上移植瘤的大小明显小于对照组，且细胞增殖因子Ki67的表达也低于对照组，结果表明YAP的活性与化疗药物耐药相关。Zhang等［10］同样采用MTT法检测，发现6.6 μmol/L、13.2 μmol/L顺铂和5.0 nmol/L紫杉醇分别作用转染了YAP-S127A的OVCA432细胞48 h后，3组细胞存活率均升高，经Western blot法检测，结果显示凋亡相关因子聚腺苷二磷酸核糖聚合酶表达减少。此外，将携带有YAP-shRNA-2和YAP-shRNA-3的质粒分别转染到OVCAR8细胞，经MTT法检测，顺铂（6.6、13.2 μmol/L）和紫杉醇（2.5、5.0 nmol/L）分别作用细胞48 h后，细胞生存力均下降，提示YAP使卵巢癌OVCA432和OVCAR8细胞对顺铂和紫杉醇产生化疗抵抗，通过减少YAP的表达可增加卵巢癌细胞对化疗药物的敏感性。

2.5YAP与卵巢癌预后的相关性 有学者［9］运用Kaplan-Meier法评估，发现YAP的高表达与卵巢癌患者不良预后有关。Zhang等［10］则根据免疫组织化学染色结果将YAP在卵巢癌细胞核的表达分为高表达组和低表达组，结果发现YAP细胞核高表达组卵巢癌患者无进展生存率下降。Xia等［15］的研究结果也发现，卵巢癌患者不良预后与YAP的高表达有关，但与YAP在细胞的定位无关，高表达YAP的卵巢癌患者存活率远远下降。Hall等［14］通过Kaplan-Meier法来研究YAP的表达与卵巢癌患者预后的关系，结果发现虽然细胞质表达的YAP与细胞核表达的磷酸化YAP与患者不良预后无关，但是细胞核YAP高表达以及细胞质磷酸化YAP的低表达均与患者的不良预后有关，同时结合二者的表达后发现其与患者的不良预后高度相关。

3　YAP在子宫内膜癌中的表达

3.1YAP在不同类型子宫内膜癌中的表达 Tsujiura等［17］采用免疫组织化学法检测YAP在子宫内膜癌的表达，结果发现YAP在细胞核和细胞质中均呈阳性表达，在1型子宫内膜癌中，细胞核YAP高表达占55.0%（66/120），细胞质YAP高表达的占68.3% （82/120）；在2型子宫内膜癌中，细胞核YAP高表达的占90.0%（27/30），细胞质YAP高表达的占63.3% （19/30），提示YAP在子宫内膜癌中高表达。

3.2YAP与子宫内膜癌临床病理系数的相关性Tsujiura等［17］研究发现细胞质YAP的表达与1型和2型子宫内膜癌临床病理系数均不相关。而细胞核YAP的表达虽然与2型子宫内膜癌临床病理系数无关，但是细胞核YAP的高表达与1型子宫内膜癌低分化、高病理分期、淋巴血管间隙浸润、患者术后复发和转移高度相关。

3.3YAP对子宫内膜癌细胞生物学行为的影响Tsujiura等［17］将YAP特定的siRNA（siYAP）转染子宫内膜癌细胞，发现细胞增殖明显下降，同时发现，细胞在G0/G1相大量积聚，在S相和G2/M相大量减少，细胞克隆形成数明显降低，而且细胞的侵袭和迁移显著下降，随后发现，YAP质粒转染细胞可促进子宫内膜癌细胞的增殖。

3.4YAP与子宫内膜癌放疗的相关性 Tsujiura等［17］采用克隆生存试验检测，发现转染敲除了YAP的子宫内膜癌HEC-1-B细胞，其克隆存活明显降低，但对放疗的敏感性增加。同样杀死90.0%的细胞，siYAP转染细胞组需要3.48 Gy，空白载体对照组需要4.72 Gy，因此siYAP转染细胞的放疗敏感性增加了1.36倍，提示敲除YAP的表达可提高子宫内膜癌HEC-1-B细胞的放疗敏感性。

3.5YAP与子宫内膜癌预后的相关性 Tsujiura等［17］经Kaplan-Meier曲线发现，YAP在细胞核或者细胞质的表达与2型子宫内膜癌患者总存活率不相关，细胞质YAP的表达与1型子宫内膜癌患者的总存活率也无关，但随着YAP在子宫内膜癌细胞核免疫活性的增加，患者的总存活率明显下降，提示细胞核YAP的表达与1型子宫内膜癌患者的不良预后明显相关。

随着国内外学者对YAP在妇科恶性肿瘤的深入研究及其作用机制的阐明，不仅对肿瘤的发生发展有了更深层次的了解，同时也在妇科恶性肿瘤的早期诊断、鉴别诊断、治疗疗效及预后评价等方面提供一定的帮助。

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（本文编辑：吴昔昔）

R737.3

C DOI: 10.3969/j.issn.2095-9400.2016.07.016

2015-09-24

浙江省卫生高层次创新人才资助项目（201021）。

周青峰（1990-），女，浙江温州人，硕士生。

朱雪琼，教授，主任医师，Email：zjwzzxq@163. com。