T-SPOT.TB在肺部疾病结核感染筛查中的应用

禹崇飞，番云华，王水花，金相伦

(云南省德宏傣族景颇族自治州人民医院检验科 678400)



·临床研究·

T-SPOT.TB在肺部疾病结核感染筛查中的应用

禹崇飞，番云华，王水花，金相伦

(云南省德宏傣族景颇族自治州人民医院检验科 678400)

目的 评价结核分枝杆菌(后简称结核杆菌)感染T细胞斑点试验(T-SPOT.TB)诊断肺部疾病感染结核的价值。方法 回顾性分析405例肺部疾病患者资料，所有患者均行外周血T-SPOT.TB，血清结核抗体(TB-Ab)、痰液涂片抗酸菌检测，结核DNA检测，并对其检测结果进行分析，比较各指标的阳性率。结果 T-SPOT.TB阳性率为39.26%，远高于TB-Ab(10.86%)、痰液涂片(1.23%)、TB-DNA(3.95%)的阳性率。结论 T-SPOT.TB在结核病中具有较好的辅助诊断价值，其敏感性显著高于其他检测方法，可有效检出结核潜伏感染，帮助临床鉴别诊治疾病，具有较高推广应用价值。

肺部疾病； 潜伏性结核； T细胞斑点试验； 结核分枝杆菌

结核病是由结核分枝杆菌(后简称结核杆菌)感染引起的慢性传染病，可侵及许多脏器，以肺部结核感染最为常见。排菌者为其重要传染源。人体感染结核杆菌后不一定立刻发病，当抵抗力降低或细胞介导变态反应增高时，才可能引起临床发病。若能及时诊断并予合理治疗，大多可获临床痊愈。结核杆菌的实验室检查有多种，常规采用痰液涂片查抗酸杆菌、血清检测查结核抗体(TB-Ab)、痰液查结核DNA(TB-DNA)等，最新检测方法为抗凝血提取淋巴细胞，用结核杆菌特异抗原刺激后检查γ干扰素释放情况，即结核杆菌感染T细胞斑点试验(T-SPOT.TB)。笔者通过分析405例肺部疾病患者资料探讨上述4种试验对结核感染的筛查阳性率，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2014年9月至2015年12月德宏傣族景颇族自治州人民医院收治的405例肺部疾病患者，均进行T-SPOT.TB、TB-Ab、TB-DNA和痰液涂片检测，临床诊断包括肺炎、肺部感染、肺占位性病变等；年龄1～87岁；女性155例，男性250例。

1.2 仪器与试剂 仪器：日本Sysmex XT1800i血细胞分析仪，美国ABI7500聚合酶链式反应(PCR)扩增仪。试剂：检测试剂采用英国Oxford Immunotec公司T-SPOT.TB检测试剂。

1.3 方法 所有研究对象清晨空腹，抽取外周静脉血3 mL和肝素抗凝血5 mL，应用酶法检测血清TB-Ab，应用T-SPOT.TB，PCR方法检测痰液TB-DNA，痰液涂片抗酸染色查杭酸杆菌。

1.4 结果判读标准 阳性结果：(1)空白对照孔斑点数为0～5个时，抗原A或抗原B孔的斑点数-空白对照孔的斑点数≥6。(2)空白对照孔斑点数为6～10个时，抗原A或抗原B孔的斑点数≥2×空白对照孔的斑点数，提示患者体内存在针对结核杆菌特异的效应T细胞，患者存在结核感染，但是否为活动性结核病，需结合临床症状及其他检测指标综合判断。阴性结果：上述标准不符合且阳性质控对照孔正常时检测结果为“阴性”，提示患者体内不存在针对结核杆菌特异的效应T细胞。

1.5 统计学处理 采用Excel工作表进行统计处理。

2 结 果

405例患者中，T-SPOT.TB阴性246例，TB-Ab阴性361例，痰液涂片阴性400例，TB-DNA<1 000 copy/mL 389例。T-SPOT.TB阳性159例，阳性率为39.26%；TB-Ab阳性44例，阳性率为10.86%；痰液涂片仅有5例阳性，阳性率为1.23%；TB-DNA阳性16例，阳性率为3.95%。在159例T-SPOT.TB阳性中，有25例TB-Ab阳性，4例痰液涂片阳性，16例TB-DNA阳性。在44例TB-Ab阳性中，有26例T-SPOT.TB阳性，1例痰液涂片阳性，6例TB-DNA阳性。在5例痰液涂片阳性中，有4例T-SPOT.TB阳性，1例TB-Ab阳性，1例TB-DNA阳性。在16例TB-DNA阳性中，有16例T-SPOT.TB阳性，6例TB-Ab阳性，1例痰液涂片阳性。T-SPOT.TB阳性率最高。

3 讨 论

1882年，有学者证明结核杆菌为结核病病原菌。结核杆菌可侵犯全身各组织器官，但以肺部感染最多见。随着抗结核药物的不断发展和卫生生活状况的改善，结核的发病率和病死率曾一度大幅下降。20世纪80年代后，由于艾滋病和结核杆菌耐药菌株的出现、免疫抑制剂的应用、吸毒、贫困及人口流动等因素，全球范围内结核病的疫情骤然恶化。根据世界卫生组织统计，世界目前约有20亿人感染结核杆菌，每年约有 880万新发患者，200万人因结核病而死亡[1]。在某些发展中国家，成人中结核杆菌携带率高达80%，其中约5%～10%携带者可发展为活动性结核病。

结核杆菌的检测方法多，常用有结核杆菌素试验、TB-Ab检测、痰液涂片抗酸染色、结核杆菌DNA检测等。结核杆菌素试验是应用结核杆菌素进行皮肤试验，测定机体对结核杆菌是否能引起超敏反应的1种试验，受卡介苗接种影响大，感染初期、老年人、细胞免疫低下者会导致假阴性结果。感染结核杆菌后，体内可产生特异性抗体；将结核杆菌抗原包被在固相载体上，与待测血清反应，其与血清中相应抗体结合，再以胶体金(或酶)标记，显示反应，可检出血清中结核杆菌抗体。由于酶联免疫吸附测定(ELISA)法缺乏对极低信号的检测能力，结核特异的细胞免疫应答会被体内本身存在的固有免疫应答所稀释，检测的敏感性会受到影响，出现一定的假阴性、假阳性反应。痰结核杆菌阳性率较低，仅为30%～50%。TB-DNA检测是1种敏感试验，通过PCR方法扩增，可在短时间内检出结核杆菌，但受限于标本取材和提取。

近年来，1种基于酶联免疫斑点检测(ELISPOT)，快速检测结核病的血液诊断方法开始被应用[2]。国外已将ELISPOT作为常规检测结核病，尤其是早期和潜伏结核感染的方法之一[3-4]。T细胞γ干扰素释放分析是经结核特异性抗原刺激后释放γ干扰素的定量检测试验，是用于诊断结核潜伏感染的最新手段。由于结核感染者体内存在特异的效应T淋巴细胞再次受结核抗原刺激时，会分泌多种细胞因子(包括γ干扰素)。T-SPOT.TB使用结核杆菌特异的RD1区编码早期分泌靶向抗原ESAT-6和培养滤过蛋白CFP-10作为抗原刺激，不受卡介苗接种的影响，而绝大多数非结核杆菌缺乏RD1区基因[5]，特异性和敏感性均较高[6-7]，目前已成为欧洲国家筛查肺结核的主要方法[8]。

T-SPOT.TB检测技术已经成为结核杆菌感染的快速诊断新工具，特别在潜伏性结核的筛查中有较高应用价值，临床医师可根据筛查结果，结合临床资料综合分析，对结核感染早诊断、早治疗。

[1]Iglionmc R.The global plan to stop TB[J].Int J Tuberc Lung Dis,2006,10(3):238-239.

[2]叶魏,章琪,方筠,等.酶联免疫斑点技术在出入境人员结核分枝杆菌快速检测中的应用[J].中国国境卫生检疫杂志,2008,31(3):185-187.

[3]Janssens JP,Roux-Lombard P,Perneger T,et al.Quantitative scoring of an interferon-gamma assay for differentiating active from latent tuberculosis[J].Eur Respir J,2007,30(4):722-728.

[4]Shams H,Weis SE,Klucar P,et al.Enzyme-linked immunospot and tuberculin skin testing to detect latent tuberculosis infection[J].Am J Respir Crit Care Med,2005,172(9):1161-1168.

[5]曾谊,冯枭,宋梅梅,等.酶联免疫斑点试验在菌阴肺结核诊断中的价值[J].中国防痨杂志,2012,34(2):100-102.

[6]雷建平.菌阴肺结核病诊断思考[J].中国防痨杂志,2011,33(12):820-821.

[7]陶学芳,王建华,李永兴,等.结核感染T细胞酶联免疫斑点试验在肺结核及肺外结核诊断中的价值[J].浙江预防医学,2012,24(11):4-7.

[8]祁燕伟,白劲松,万荣,等.T细胞斑点试验在人类免疫缺陷病毒合并肺结核感染中不同T细胞水平临床诊断价值[J].昆明医学院学报,2011,32(9):63-67.

10.3969/j.issn.1673-4130.2016.21.052

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1673-4130(2016)21-3073-02

2016-04-01

2016-06-10)