蒙医五味甘露浴对佐剂性关节炎大鼠5—HT、DA、NE的影响

张丽霞　水玲　陈英松

【摘 要】 目的：观察蒙医五味甘露浴对佐剂性关节炎大鼠下丘脑中五-羟色胺（5-HT）、多巴胺（DA）、去甲肾上腺素（NE）含量的影响。方法：将40只雄性SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、来氟米特组和五味甘露浴组，每组10只。除正常对照组外，其余各组大鼠进行造模，在无菌条件下将大鼠右后足趾部注射0.1ml的CFA（完全弗氏佐剂）致炎，正常对照组注射同剂量的生理盐水。造模后第3d，对药浴组进行1次/d，30min/次的治疗，连续药浴治疗15d[温度为（40±2）℃]。同样的方法，对正常对照组和模型组做温水浴治疗作为对照。来氟米特组以0.17g/kg剂量灌胃进行治疗15d。采用ELISA法检测大鼠5-HT、DA、NE的含量。结果：与正常对照组相比，模型组5-HT、DA、NE的含量明显升高（P<0.05），五味甘露浴组、来氟米特组与模型组比5-HT、DA、NE的含量明显降低（P<0.05），差异有统计学意义，蒙医五味甘露浴组与来氟米特组比，5-HT、DA、NE的含量明显降低，但差异无统计学意义（P>0.05）。结论：蒙医五味甘露浴可能通过调节AA大鼠5-HT、DA、NE的含量，对AA起到抗炎、镇痛作用。

【关键词】 蒙医五味甘露浴；AA大鼠；神经递质

【中图分类号】R291.2 【文献标志码】 A 【文章编号】1007-8517（2015）22-0009-02

蒙医五味甘露药浴由小白蒿，水柏枝、麻黄各，杜鹃叶、刺柏五种药物组成，是蒙医临床外治法中的重要疗法之一，目前广泛运用于临床。其不仅具有悠久的历史和独特的理论，同时具有毒副作用小、疗效明显、简便易行、临床应用广范等特点。蒙医五味甘露浴在临床上治疗类风湿关节炎（rheumatoid arthritis，RA）方面具有非常显著的疗效，未发现毒副作用。本研究采用CFA诱导的佐剂性关节炎（adjuvant arthritis，AA）模型大鼠，检测治疗前后5-HT、DA、NE含量的变化，探讨蒙医五味甘露浴的抗炎及镇痛机制。

1 材料

1.1 实验动物、药物与试剂 取4～6周龄清洁级雄性SD大鼠[SCXK（军）2012-0004] 40只，体重180～200g，由北京实验动物科技有限公司提供，进行3d适应性饲养，自由饮水和摄食。

完全弗氏佐剂（CFA， Sigma公司产品），五-羟色胺（5-HT）、多巴胺（DA）、去甲肾上腺素（NE），ELISA检测试剂盒，北京新亚太生物科技有限公司提供，批号分别为：DZE30326、DZE30237、DZE30587；蒙医五味甘露浴剂，国家蒙药制剂中心内蒙古自治区中蒙医医院中心制剂室提供（批号：720121110）。来氟米特，由苏州长征-欣凯制药有限公司提供（国药准字号：H20000550）。

1.2 仪器 80-2式离心机由金坛市化城敏科实验仪器厂提供；特制浴疗器等。

2 方法

2.1 动物分组与造模 将正常雄性SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、来氟米特组和五味甘露浴组，每组10只。对模型组、来氟米特组、五味甘露浴组大鼠进行造模。在无菌条件下给予大鼠右后足趾注射0.1ml的CFA（内含0.1℅灭活结核杆菌）致炎[1]，正常对照组注射同剂量的0.9%的生理盐水，之后针眼处涂抹紫药水。

2.2 治疗方法 正常对照组：造模后第3天，对该组进行1次/d，30min/次的治疗，连续温水浴治疗15d[温度为（40±2）℃]。治疗方法：在长50cm、宽30cm、高20cm的半透明塑料容器中加入温度为（40±2）℃的清洁饮用水1000ml，将大鼠的四肢和尾部浸泡在温水中，治疗结束后用清洁毛巾擦拭干净后放入鼠笼中。

模型组：治疗方法与正常对照组相同。

来氟米特组：造模后第3天开始来氟米特灌胃，0.17g/kg的给药量1次/d，连续灌胃15d。

药浴组：治疗方法为在长50cm、宽30cm、高20cm的半透明塑料容器中加入浓度为33.4%的蒙医五味甘露浴1000ml，浸泡方法与正常对照组相同。

2.3 取材、检测方法 末次治疗后24h，用乌拉坦腹部皮下麻醉大鼠，将大鼠断头处死，在冰上剥离大脑，迅速完整取下丘脑，并称重后置于速冻管，用液氮快速冷冻，放入-80 ℃冰箱保存待测。采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测大鼠5-HT、NE、DA的含量，按试剂盒说明操作。

2.4 统计学方法 计量数据均以（x±s）表示，采用SPSS 13.0统计软件，单胺类神经递质的含量结果用单因素方差分析作为统计学检验。P<0.05为差异具有统计学意义。

3 结果

与正常对照组相比，模型组5-HT、DA、NE的含量明显升高（P<0.05），五味甘露浴组、来氟米特组与模型组比5-HT、DA、NE的含量明显降低，差异有统计学意义（P<0.05），蒙医五味甘露浴组与来氟米特组比，5-HT、DA、NE的含量明显降低，但差异无统计学意义（P>0.05）。

4 讨论

类风湿关节炎是一种病因未明的慢性、以炎性滑膜炎为主的系统性、自身免疫性疾病。临床表现为关节红肿热痛和活动障碍，并伴有不同程度的僵硬畸形、骨和骨骼肌的萎缩，是目前造成人类丧失劳动力和致残的主要原因之一。RA是一种主要累及关节滑膜的慢性、炎症性自身免疫性疾病[2]，是世界医学界公认的难治性疾病，其发病机制仍不清楚。据统计，我国患病率为0.3%～0.4%[3-5]。大鼠佐剂性关节模型与类风湿关节炎在病理机制、临床表现、病理学和免疫学改变等方面有许多相似特征，佐剂能较好地模拟免疫紊乱和炎症反应，故佐剂性关节炎是建立免疫性炎症动物模型的最常用的方法。国内外学者[6]认为用CFA诱发的大鼠关节炎模型的疼痛特点具有持续性，可以成为良好的临床痛证研究的动物模型。佐剂性关节炎大鼠致痛的机制为炎症局部血小板被激活，释放出5-HT，超过了MAO的代谢能力而产生疼痛。因游离的5-HT是一种致痛物质，其减少途径可能是使血小板对5-HT吸收增加及再释放减少[7]，并使较多的5-HT贮存于胃壁的APUD细胞内，使5-HT释放入血的量减少[8]。虽然DA、NE不是直接的致痛物质，但疼痛时可能会出现一系列的自主神经反应，特别是在交感神经系统；NE作为交感神经递质，当疼痛发生时，NE的含量会升高。在这次实验中，蒙医五味甘露浴能抑制交感神经的过度兴奋，使DA、NE含量下降；同时，DA、NE含量的降低又有助于改善炎症局部血液循环，促使致痛物质发生转运和清除，从而使疼痛减轻。

关节炎属蒙医“托来”病范畴，其治病因素是“黄水”，黄水增盛，并与血交搏注关节，导致局部气血运行受阻所致。诱发本病之常见因素有关节拐伤，强劳内伤，酗酒，饮食过多，汗出冒风寒，中潮湿之毒等。据蒙医文献及临床实践，蒙医五味甘露药浴之药有各自的功能主治等蒙药特征外，传统理论认为五味配合具有改善全身气血运行、润僵舒筋、疏通经络、调理体素、增强脏腑器官的功能、根除深伏之病毒余邪的作用等功效[9]。临床中主要治疗四肢僵直或抅挛、关节肿痛、肌肉萎缩等“黄水”疾患，治宜以燥黄水，舒筋为原则[10]。

蒙医五味甘露浴是利用水和药物的协同作用使人体的外部浸渍，以达到防治疾病目的的一种疗法，是蒙医临床外治法重要组成部分。药物的有效成分通过皮肤黏膜吸收、转运、扩散，通过对皮肤的刺激，扩张血管、促进血液循环、改善周围组织，发挥抑制和杀死病菌、调节免疫的作用。五味甘露药浴能抑制各种炎症模型所致的炎症，并能起到镇痛作用，是蒙医临床外治法中重要的疗法之一[9]。

本实验结果表明，蒙医五味甘露浴具有较好的抗炎、镇痛作用，能够明显降低CFA诱导的佐剂性关节炎大鼠下丘脑5-HT、DA、NE的含量。提示蒙医五味甘露浴通过调节AA大鼠下丘脑5-HT、DA、NE的含量，抑制炎症模型所致炎症，起到镇痛作用。

参考文献

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[6]汪帼斌，易玮，佘世锋. 穴位注射不同药物对佐剂性关节炎大鼠的镇痛作用[J]. 安徽中医学院学报，2002，21（1）：34-36.

[7]史学义，吴景兰.外周5-羟色胺系统与针刺镇痛[J] .针刺研究， 1983，8（2）：146-150.

[8]彭俊云，周舒，郑超强.狗针麻胃大部切除术中胃壁APUD 细胞5-羟色胺荧光组织化学变化[J].针刺研究，1980，3：192-197.

[9]陈英松.蒙医学-适宜技术及应用[M].呼和浩特：内蒙古大学出版社，2011，7： 93.

[10]蒙古学百科全书编辑科员会《医学卷》编辑委员会编，蒙古学百科全书-医学卷[M].呼和浩特：内蒙古人民出版社，2002：724-725.

（收稿日期：2015.09.16）