常见动物病原学检测样品活体采集技术

张祖勇

(贵州省兴义市动物疫病预防控制中心，贵州 兴义 562400)

常见动物病原学检测样品活体采集技术

张祖勇

(贵州省兴义市动物疫病预防控制中心，贵州 兴义 562400)

在动物防疫工作中，会经常开展动物疫病监测、诊断工作，而病原学样品的采集是进行动物疫病监测、诊断的重要环节之一。笔者通过工作实践经验，将几种常见动物病原学样品活体采样技术介绍如下，供参考。

1 猪扁桃体采集

猪扁桃体是一个极其重要的免疫器官，具有抗细菌、抗病毒的防御功能，也是多种病原微生物侵袭、定居和复制的重要场所，采集猪扁桃体样品，用于监测、诊断常见疫病，具有很强的代表性。

1.1 物品器械 鼻捻子、开口器、采样枪、无菌离心管、磷酸盐缓冲液、无菌牙签、2%氢氧化钠液、清洁水桶、防护用品。

1.2 采样前准备 采样和保定人员穿戴好防护用品，加磷酸盐缓冲液2～3 mL至5 mL无菌离心管，将采样枪安装调试好，放入2%氢氧化钠液浸泡消毒5分钟。

1.3 保定 由2位保定人员取站立保定。一位保定人员用鼻捻子套住猪上颌前1/3部位，可根据采样者要求向上提住鼻捻子，使猪头部上仰30～45°，另一位保定人员跨骑于猪身上方，两手抓住猪两耳，用两腿内侧或膝部夹住猪前肢肩胛部，以减少猪活动范围。

1.4 采样 将消毒的采样枪用无菌清水清洗，打开手电筒，左(右)手持开口器(型号视猪大小而定)，站在猪头部右(左)侧前方，用开口器平伸进猪口腔下压手柄，使开口器转为竖立，开口器下栏压住猪舌头保持不动，右(左)手持采样枪，沿开口器上栏送入猪的咽部，到达扁桃体位置，使采样针抵实扁桃体，迅速扣动扳机进行采样，采样枪退出口腔，可缓慢释放扳机检查是否已采集到所需样品(扁桃体为淡粉红色或肌肉色)，将采集到的样品放入离心管，盖紧瓶盖摇匀。

2 牛、羊O－P液(食道、咽分泌物)采集

2.1 物品器械 开口器、采样探杯、无菌离心管、磷酸盐缓冲液、无菌棉签、2%氢氧化钠液、清洁水桶、防护用品。

2.2 采样前准备 采样和保定人员穿戴好防护用品，加磷酸盐缓冲液2～3 mL至10 mL无菌离心管，将采样探杯放入2%氢氧化钠液浸泡消毒5分钟。

2.3 保定

2.3.1 牛的保定:柱栏内保定或徒手保定。徒手保定(多用于比较温顺的牛)方法:保定者一手抓住牛的一角，另一手拉住牛鼻绳、鼻环，或用拇指与食指和中指捏住牛的鼻中隔加以固定，并配合采样者，提高牛的头部。

2.3.2 羊的保定:由一位保定人员取站立保定。保定人员跨骑于羊身上方，两手抓住两角或两耳，使其头部上仰贴于保定者腹部后，再用其中1只手托住羊下颌，可用拇指压迫嘴角，协助打开口腔，调整头部仰角，使口、咽、食道几乎成直线，保定者两腿内侧或膝部夹住羊前肢肩胛部，以减少羊活动范围。

2.4 采样 将消毒的采样探杯用无菌清水清洗，并倒尽探杯中清水，一手持开口器(型号视被采样动物大小而定)，站在牛、羊头部正前方或稍偏向保定者对侧，用开口器平伸进口腔，下压手柄转为竖立保持不动，另一手持采样探杯，沿开口器上栏伸进牛、羊口腔，达到咽部时轻轻抽送几下刺激牛、羊吞咽，顺势下送探杯进入食道上部(牛10～15 cm、羊5～10 cm)，上下抽提3～5次，刺激咽部产生分泌物，取出探杯，将采集的O－P液2～5 mL倒入离心管，盖紧瓶盖摇匀。

3 家禽喉拭子和泄殖腔拭子采集

3.1 物品器械 无菌棉签、含抗生素的PBS保存液、2 mL离心管、普通剪刀。

3.2 采样前准备 采样和保定人员穿戴好防护用品，加PBS保存液1～2 mL于无菌离心管。

3.3 保定 保定人员一手抓住家禽两翅，一手抓住家禽两腿，将头部或泄殖腔朝向采样者。

3.4 采样 一手握住家禽头部，拇指和食指轻捏于对侧上下喙交界处，打开口腔，一手取无菌棉签，插入家禽喉头转到2～3圈，采集喉拭子;或一手扒开泄殖腔周围羽毛，一手取无菌棉签，插入泄殖腔0.5～1.0 cm转动2～3圈，采集泄殖腔拭子，将拭子放入装有保存液的离心管，剪去露出部分，盖紧瓶盖摇匀。

4 注意事项

4.1 采集多头动物样品时，采样枪和探杯必须要重复消毒清洗。

4.2 用于采样的采样枪或采样探杯最好用与被采样动物体温接近的温水清洗，以减少机体应激。

4.3 牛羊O－P液采集前禁食12小时(可少量饮水)，以避免反刍草料污染样品。

4.4 采集的扁桃体如果与采样枪刀槽粘连，可用无菌牙签挑至离心管，O－P液如果粘稠无法倒出，可用无菌棉签刮擦，将棉签剪断一同放入离心管。

4.5 病原学样品24小时能及时检测的可冷藏保存，不能及时检测的样品应－20℃以下保存。

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