云南省昆明地区种鸡J亚群禽白血病血清学调查

白马伟，赵 谦，和贵斌，张正学

(1.云南省蒙自市动物卫生监督所，云南蒙自 661199；2.云南农业大学动物科学技术学院，云南昆明 650201)



云南省昆明地区种鸡J亚群禽白血病血清学调查

白马伟1，2，赵 谦2，和贵斌2，张正学2

(1.云南省蒙自市动物卫生监督所，云南蒙自 661199；2.云南农业大学动物科学技术学院，云南昆明 650201)

摘要[目的] 了解云南省昆明地区种鸡场J亚群禽白血病的感染状况。[方法] 从云南省昆明市疑似感染禽白血病的某种鸡场采集644份泄殖腔(公鸡)拭子和460份蛋清(母鸡)样品，采用ELISA法对种鸡J亚群禽白血病进行抗原检测。[结果] 在检测的460份蛋清样品中，172份抗原呈阳性，阳性率为37.39%；在检测的644份泄殖腔拭子中，520份抗原呈阳性，阳性率为80.75%。A养殖场共检测644份样品，总阳性率为63.66%，其中蛋清样品的阳性率为39.13%，泄殖腔样品的阳性率为82.07%。B养殖场共检测460份样品，总阳性率为61.30%，其中蛋清样品的阳性率为34.78%，泄殖腔样品的阳性率为78.99%。此次检测结果表明云南省昆明地区种鸡群已严重感染J亚群禽白血病。[结论] 该研究可为种鸡J亚群禽白血病的防治提供理论依据。

关键词禽白血病；J亚群；p27蛋白；ELISA

禽白血病(Avian leukosis virus，ALV)是指由反转录病毒科禽反转录病毒属成员引起的鸡的各种可传播的良性和恶性肿瘤[1]。病鸡表现为精神萎靡，食欲下降，羽毛蓬乱，随着病情的发展出现典型的肿瘤性疾病，腿部、脚部皮肤部位出现突起状肿块；对病鸡进行剖检发现脾脏、肝脏肿大明显，是正常的数倍。肝脏上可见大量灰白色的粟粒状肿瘤；皮下毛囊部广泛出血。禽白血病病毒基于其宿主范围、病毒包膜干扰及交叉中和模式可以分为10个不同的病毒亚群(A~J)。它们也可以分为内源性和外源性的病毒，禽白血病A~D和J(Avian leukosis virus-J Subgroup，ALV-J)亚群是外源性的病毒。其中，J亚群禽白血病于1988年首次在英国被报道，随后其他国家也检测到该亚群病毒的存在[2]。1999年，在我国首次报道了J亚群禽白血病，继而我国大部分地区相继出现J亚群禽白血病感染的报道[3]。

J亚群禽白血病给我国的种鸡养殖业造成了严重的经济损失，从种鸡育种亲代到其后代的垂直传播与其他ALV亚群相比更加频繁。ALV-J诱发了多种肿瘤并在鸡繁育方面造成了生产上的问题。J亚群禽白血病不仅可以通过垂直传播，而且可以通过水平传播，迄今为止该病还没有有效的疫苗。目前，控制该疾病的主要方法是通过淘汰阳性鸡，培育无白血病种鸡群，最后达到鸡群的全面净化[4]。p27蛋白是禽白血病病毒的衣壳蛋白，在ALV-A、ALV-B和ALV-J亚群间的同源性高达90%以上，p27蛋白含量占病毒总蛋白的30%以上，对禽白血病的诊断具有重要意义，是目前检测的首选抗原。目前，可以利用蛋清(母鸡)、血清、泄殖腔(公鸡)拭子等样品来检测鸡群中ALV的感染状况，由于血清样品存在来自潜在的内源性序列的干扰，一般不用于检测外源性病毒的样品；蛋清(母鸡)样品和泄殖腔(公鸡)拭子是目前进行抗原检测的最快速、廉价、操作最为简单的方法。笔者采用ELISA法对云南省昆明市蛋鸡场的644份泄殖腔(公鸡)拭子和460份蛋清(母鸡)样品进行ALV-J抗原检测，了解云南省昆明市蛋鸡场ALV-J的感染及流行情况，为分析种鸡的感染状况并制订该病的防治措施提供一定的理论基础。

1材料与方法

1.1材料

1.1.1样品。2015年1~2月，从云南省昆明市2个种鸡场采集样品1 104份，其中种公鸡采集644份泄殖腔样品，种母鸡采集460份蛋清样品。样品均保存于-80 ℃冰箱中备用。采集样品的相关情况见表1。

1.1.2主要试剂。 酶联免疫吸附试验所用的试剂盒，购自美国IDEXX公司。

1.1.3主要仪器。Multiskan FC 型酶标仪、移液器、37 ℃恒温培养箱、振荡器等均由云南农业大学动物科学技术学院动物传染病实验室提供。

表1　样品采集情况

1.2方法

1.2.1样品准备。收集母鸡稀蛋清，将待检鸡蛋小的一端朝上放置，轻轻打碎蛋壳，在无菌条件下用移液器吸取上清，无需稀释，装于1.5 mL离心管中。于-79 ℃冰箱中反复冻融3次，以降低其黏稠度，将所收集的蛋清(母鸡)放于4 ℃冰箱备用；将棉花拭子插入肛门2~3 cm处，自肛门周围皱襞处拭取或在肛门口内轻轻旋转涂擦，加到1.0 mL样品稀释液中冷冻，检测前将样品恢复至室温，3 000 r/min下离心5 min，取上清用于抗原检测。

1.2.2p27抗原的检测。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测泄殖腔(公鸡)拭子中禽白血病病毒抗原，操作方法严格按照试剂盒说明书进行。

2结果与分析

由表2可知，共检测样品1 104份，其中692份样品抗原呈阳性，阳性率为62.68%；蛋清(母鸡)样品460份，其中172份样品抗原呈阳性，阳性率为37.39%；泄殖腔(公鸡)样品644份，其中520份样品抗原呈阳性，阳性率为80.75%。A养殖场检测644份样品，其中410份样品抗原呈阳性，阳性率为63.66%；蛋清(母鸡)样品276份，其中108份样品抗原呈阳性，阳性率为39.13%；泄殖腔(公鸡)样品368份，其中302份抗原呈阳性，阳性率为82.07%。B养殖场检测460份样品，其中282份样品抗原呈阳性，阳性率为61.30%；蛋清(母鸡)样品184份，其中64份样品抗原呈阳性，阳性率为34.78%；泄殖腔(公鸡)样品276份，其中218份样品抗原呈阳性，阳性率为78.99%。

表2　禽白血病抗原检测结果

3结论与讨论

该试验采用ELISA法检测云南省昆明地区规模化种鸡场J亚群禽白血病抗原，结果表明该地区种鸡场J亚群禽白血病抗原阳性率高达34.78%~82.06%，阳性率远远高于前人报道的抗原阳性率(8.3%~25.0%)[5-12]，这可能与昆明地区长期未对禽白血病足够重视有关。此次检测结果表明云南省昆明地区种鸡群已经严重感染J亚群禽白血病，对禽养殖业的发展会造成严重影响。沈学怀等[13]采用ELISA法对泄殖腔棉拭子、鸡血清、蛋清和病毒分离的细胞培养液进行ALV-p27抗原检测，并利用RT-PCR方法检测血液ALV特异性基因，结果表明血清、蛋清和细胞培养液作为ALV-p27抗原检测材料的检测阳性率均低于泄殖腔棉拭子，说明泄殖腔棉拭子是最灵敏的检测材料。

作为感染性的病毒粒子进行传播的禽白血病病毒是外源性白血病病毒，正常鸡的基因组含有多类或多科禽反转录病毒样成分，经遗传进行传播的禽白血病病毒称内源性白血病病毒。该研究使用的ELISA试剂用于检测禽白血病p27蛋白，p27蛋白作为ALV的群特异性抗原，因其序列保守并且含有许多抗原性强表位而成为制备检测抗体的首选抗原[14-16]，对禽白血病的诊断具有重要意义。

公鸡在禽白血病的流行中仅起到次要的作用，禽白血病病毒不在精细胞繁殖，因此公鸡不能够垂直传播下一代，但公鸡是病毒的携带者，也是一个传染源。公鸡泄殖腔(公鸡)拭子检出率高达80.75%，这可能与在饲养管理过程中鸡只接触频繁使病毒在水平间传播有关；此外，还可能与采集样品时样品中混有脱落的上皮细胞或者刺破肠黏膜而导致采集的样品带有血液，由于内源序列的干扰而导致泄殖腔(公鸡)拭子的检出率存在假阳性有关。

该试验结果可为了解云南省禽白血病提供理论参考，为全面预防和控制禽白血病提供理论依据。随着养殖环境的恶化，禽白血病的问题将会更加突出，严重危害云南省蛋鸡养殖业的健康、快速发展，因此有必要对云南省昆明地区J亚群禽白血病的感染情况进行调查研究，对其疫苗免疫等具有重要的实际意义与参考价值。

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Serological Survey on J Subgroup of Avian Leukemia of Breeding Chicken in Kunming Area of Yunnan Province

BAI Ma-wei1,2, ZHAO Qian2, HE Gui-bin2, ZHANG Zheng-xue2(1. Mengzi Animal Animal Hygienic Supervision Institute of Yunnan Province, Mengzi，Yunnan 661199; 2. College of Animal Science and Technology, Yunnan Agricultural University, Kunming, Yunnan 650201)

Abstract[Objective] To understand the infection situation of J subgroup of avian leukemia (ALV) in breeding chicken farm in Kunming City of Yunnan Province. [Method] 644 cloaca swabs of cock and 460 albumen samples of hens were collected from a breeding chicken farm infected with suspected avian leukemia virus in Kunming City of Yunnan Province. The antigen of J subgroup of avian leukemia in breeding chicken was detected by using ELISA. [Result] Among 460 detected albumen samples, 172 antigen samples were positive, the positive rate was 37.39%. Among 644 cloaca swabs, 520 antigen samples were positive, the positive rate was 80.75%. 644 samples were detected in farm A, and the total positive rate was 63.66%. Among the detected samples, the positive rate of albumen samples was 39.13%, and the positive rate of cloaca swabs was 82.07%. 460 samples were detected in farm B, the total positive rate was 61.30%. Among them, the positive rate of albumen samples was 34.78%，and the positive rate of cloaca swabs was 78.99%. The detection results showed that the breeding chicken in Kunming City of Yunnan Province had been severely infected with J subgroup of ALV. [Conclusion] The research can provide theoretical basis for the prevention and control of J subgroup of ALV of breeding chicken.

Key wordsAvian leukemia; J subgroup; p27 protein；ELISA

收稿日期2015-12-28

作者简介白马伟(1974- )，男，云南蒙自人，兽医师，硕士，从事兽医防疫检疫工作。

中图分类号S 852.5

文献标识码A

文章编号0517-6611(2016)02-088-02