血清学诊断ABO新生儿溶血病的实验研究

刘 琼，刘 蜜

（1.湖南师范大学第一附属医院，湖南省人民医院，长沙 410006；2.湖南省交通医院，长沙 410000）

血清学诊断ABO新生儿溶血病的实验研究

刘 琼1，刘 蜜2

（1.湖南师范大学第一附属医院，湖南省人民医院，长沙 410006；2.湖南省交通医院，长沙 410000）

目的：了解长沙地区ABO血型新生儿溶血病（HDN）的发病情况，探讨血清学三项实验在诊断新生儿溶血病中的临床价值，为该病的早期预防、早期诊断和临床治疗提供依据。方法：收集中南大学湘雅医院2016年1月～7月产科和新生儿科疑似母婴ABO血型不合的新生儿血液标本，对其进行ABO血型检测及新生儿溶血病血清学三项试验（直接抗人球蛋白试验、游离抗体试验和红细胞抗体释放试验）。结果：在583例检测结果中，确诊为新生儿溶血病的有145例，发病率为24.87%。其中男性患儿80例，发病率为25.64%，女性患儿65例，发病率为23.98%，差异无统计学意义；A型血患儿90例，O-A型母婴血型模式的发病率为54.88%，B型血患儿55例，O-B型母婴模式的发病率为41.35%，差异显著。145例HDN中直接抗人球蛋白试验阳性38例，阳性率26.21%，游离抗体试验阳性76例，占52.41%，红细胞抗体释放试验阳性144例，阳性率为99.31%，三者比较存在着显著的差异性。结论：长沙地区ABO新生儿溶血病发病率为24.87%，男性新生儿和女性新生儿的发病率无差异性，O-A母婴血型发病率高于O-B母婴血型。血清学三项试验是临床最常用的诊断新生儿溶血病的方法，其中红细胞抗体释放试验敏感度最高，游离抗体试验次之，直接抗人球蛋白试验敏感度最低。血清学诊断为ABO新生儿溶血病的早期预防、早期诊断和临床治疗提供依据。

新生儿溶血病；ABO；红细胞抗体释放试验；直接抗人球蛋白试验；游离抗体试验

ABO血型新生儿溶血病（hemolytic disease of the new-born，HDN）指的是母婴ABO血型不合时母亲体内产生与胎儿或新生儿血型抗原不相容的IgG抗A抗体或IgG抗B抗体，并通过胎盘屏障到达胎儿血液循环引起胎儿或新生儿发生溶血的同族免疫性疾病。到目前为止，已发现的多种血型系统均能引起新生儿溶血病的发生，其中以ABO血型系统的新生儿溶血病发病最为常见。据统计在所有新生儿溶血病中，ABO型HDN约占85%［1］。ABO-HDN多发于O型血产妇，主要表现为新生儿黄疸、肝脾肿大和不同程度的贫血等，血清胆红素在短时间内迅速上升。严重者有嗜睡、厌食等症状，甚至发生胆红素脑病或死亡［2］。因此，ABO型新生儿溶血病的产前检查和出生后新生儿血清学检测对于该病的预防和早期诊断尤其重要。血清学检测是指新生儿溶血病的血清学三项检测，包括直抗（直接抗人球蛋白）试验、游离（血清游离抗体检测）试验、放散（红细胞释放抗体检测）试验，是诊断新生儿溶血病最常见的试验方法［3］。本文收集了中南大学湘雅医院2016年1月～7月疑似母婴ABO血型不合的583例新生儿的血清学检测结果，对其进行了统计分析，报告如下。

1 资料与方法

1.1 研究对象中南大学湘雅医院2016年1月～7月疑似母婴ABO血型不合的583例新生儿血液标本。

1.2 主要试剂及仪器低离子抗人球微柱凝胶检测卡，标准ABO红细胞，低离子介质，上海血液生物医药有限公司提供的抗A、抗B血型定型试剂，金坛市国旺实验仪器厂提供的420数显三用恒温水箱。孵育箱（Incubator 37 SⅠ）和离心机（Centrifuge 12 SⅡ）。

1.3 方法

1.3.1 新生儿ABO血型鉴定新生儿由于体内抗A抗B抗体没有产生，ABO血型鉴定采用试管法只检测正定型，不做反定型。取洁净小试管2支，分别标明抗A和抗B，加抗A和抗B分型血清各1滴于细胞底部，再分别加受检者3 ～5%红细胞悬液1滴混匀，1000r/min离心1 min观察有无凝集。如肉眼不见凝集，将反应物倒置在玻片上，在显微镜下观察，判断血型并记录。

1.3.2 血清学三项检测实验新生儿溶血病的血清学三项检测参照《全国临床检验操作规程》［4］进行，三项试验包括直接抗人球蛋白试验（DAT）、血清游离抗体试验、红细胞抗体释放试验（采用热放散法）。

1.3.3 HDN诊断标准［9］当血清学三项试验中任意两项或三项结果均为阳性时诊断为HDN阳性，若只有一项结果为阳性则只能取放散试验阳性结果时诊断为HDN阳性。

1.3.4 统计学分析方法数据分析采用SPSS17.0软件进行处理，采用χ2检验对结果进行比较分析，当P＜0.05时有统计学意义。

2 结果

583例疑似母婴ABO血型不合的新生儿血液标本中，确诊为新生儿溶血病的有145例，发病率为24.87%。其中男性患儿80例，发病率为25.64%，女性患儿65例，发病率为23.98%，两者经卡方检验P值大于0.05（χ2=0.21，P=0.645），差异无统计学意义。详见表1。

表1 HDN阳性结果在不同性别新生儿中的发病率

在145例确诊为ABO型新生儿溶血病的患儿中，A型血患儿90例，O-A型母婴血型模式发病率为54.88%，B型血患儿55例，O-B型母婴血型模式发病率为41.35%。O-A和O-B两种母婴血型模式发病率经χ2检验后得到的P值小于0.05（χ2=5.376，P=0.020），差异有统计学意义，说明在ABO型新生儿溶血病中，O-A母婴血型较O-B母婴血型模式的HDN发病率高。详见表2。

表2 O-A和O-B母婴血型HDN阳性结果分布

血清学三项试验均为阳性者34例，占23.45%；游离和放散实验均为阳性的71例，占48.97%；直抗和放散实验均为阳性的3例，占2.07%；单独放散试验阳性的病例数是36，占24.83%；直抗和游离实验均为阳性的1例，占0.69%。游离和放散实验阳性、三项实验均阳性和单独放散实验阳性是最主要的检出模式，占97.25%。145例HDN中直接抗人球蛋白试验阳性38例，阳性率26.21%，游离抗体试验阳性76例，阳性率52.41%，红细胞释放抗体试验阳性144例，阳性率为99.31%。三项实验中以红细胞抗体放散实验诊断新生儿溶血病的灵敏度最高，游离抗体实验次之，直接抗人球蛋白实验灵敏度最低，三者经卡方检验后，P＜0.01，差异有统计学意义。结果见表3。

表3 145例HDN阳性患儿的血清学试验结果统计

3 讨论

本实验以ABO新生儿溶血病为研究对象，是因为ABO型母体妊娠时新生儿溶血病的发病率最高，适合小范围的结果统计。结果表明，ABO新生儿溶血病的发病率为24.87%。新生儿溶血病发病率在男性新生儿和女性新生儿中没有差别，与多数研究的结果一致。HDN在O-A型母婴血型模式中发病率为54.88%，O-B型母婴血型模式的发病率为41.35%，两种母婴血型模式发病率经卡方检验后得到的P值小于0.05，说明O-A母婴血型较O-B母婴血型的HDN发病率更高。有研究［10，11］报道，由于胎儿红细胞上的A型抗原决定簇比B型抗原决定簇的数量更多，并且A型抗原比B型抗原的免疫原性更强，更易诱导机体产生免疫应道。因此在ABO-HDN中，O-A母婴血型模式更容易发生新生儿溶血病，与本研究的结论一致。但也有文献报道［12］，O-A模式与O-B模式这两者之间并无显著差异。分析可能原因一是研究的不是大样本数据，存在局限，样本不具有代表性。二是不同地区人群中ABO血型分布比例存在着差异性。红细胞上抗原与血清中抗体的结合是可逆的，如果改变某些物理条件，如加热等抗体又可以从结合的红细胞上放散下来，再以相应的红细胞鉴定放散液内抗体的种类并测定其强度，用以判定原来红细胞上抗原的型别，这就是抗体放散实验。常用于ABO亚型的鉴定、类B血型的鉴定和新生儿溶血病的诊断。血清学三项试验结果显示，在确诊的新生儿溶血病例中，直抗试验，游离试验和放散试验的阳性率分别是26.21%，52.41%和99.31%，抗体放散试验诊断新生儿溶血病的灵敏度大于游离试验和直抗试验。放散试验是血清学三项试验中诊断新生儿溶血敏感度最高的指标。

有文献报道仅根据新生儿红细胞直接抗人球蛋白试验（DAT）确诊新生儿溶血病，但目前普遍认为此项试验结果灵敏度低，一般不能凭借单项DAT试验阳性即做出新生儿溶血病的诊断结果。从本实验结果看出，145例确诊的新生儿溶血病直抗阳性的仅仅只有38例，另外107例确诊病例直抗实验均为阴性。如果仅根据直抗实验阳性来诊断新生儿溶血病，会遗漏很多的病例。

新生儿溶血病是临床上造成新生儿死亡的一个重要因素，其发病机制为母婴血型不合，孕母体内IgG类血型抗体通过胎盘进入胎儿体内，胎儿红细胞被母亲的同种抗体所包被，造成胎儿发生以溶血为主要损害的一种被动免疫性疾病［16-18］。临床表现为黄疸、肝脾肿大和不同程度的贫血，血清胆红素在短时间内迅速上升，严重者发生胆红素脑病甚至死亡。新生儿溶血病主要见于ABO型母婴血型不合，ABO-HDN往往只有出现黄疸、核黄疸、溶血性贫血等典型临床表现时才得到临床确诊，但此时的病情已经开始恶化，严重影响治疗效果，给我国新生儿健康造成巨大威胁。因此，对妊娠期妇女进行相关产前诊断以及产后新生儿的血清学三项检查是非常必要的，有助于新生儿溶血病的早期预防、早期诊断和早期治疗。对于我国优生优育，提高人口素质非常必要。新生儿出生后及时监测胆红素及血清学三项实验，一经发现诊断为新生儿溶血病，24～48小时内胆红素水平持续性升高，并伴有明显黄疸症状，应立即予以积极治疗。血清学三项试验的结果应与临床相结合，做到及早诊断，及时评估，选择最佳治疗方案使患者病情得到及时控制，降低危险性［19-22］。光疗法是降低胆红素最简单有效的方法，发现胆红素水平达到光疗标准时及时进行光疗。也有研究者认为静脉注射丙种免疫球蛋白可作为治疗新生儿溶血病的常规方法，但目前尚未得到临床认［17，23］。纠正贫血和平衡电解质紊乱也是治疗HDN的有效措施，只有个别严重者需进行换血治疗。

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The study of ABO Hemolytic Disease of the Newborn in serological diagnosis testABSTRACT

Liu Qiong1, Liu Mi2

(1. The First Affiliated Hospital of Hunan Normal University, Hunan Provicial People's Hospital, Changsha 410006, China;
2. Traffic Hospital of Hunan Province, Changsha 410000, China)

ObejectiveTo understand the morbidity of ABO hemolytic disease of the newborn in Changsha, discuss the clinical significance of three serologic tests to diagnose the ABO hemolytic disease of the newborn and provide evidences for the early prevention, early diagnosis and clinical treatment of the disease.MethodsCollecting the total of 583 cases of maternofetal ABO incompatibility from January 2016 to July in Xiangya Hospital of Central South University. The ABO blood group and serologic tests were determined.ResultsThere are 145 cases of HDN in the total of 583 blood samples with the incidence 24.87%. The number of male children was 80 (25.64%) and female children was 65(23.98%). There was no significance difference in their incidences. In 145 cses of ABO-HDN with positive result in 90 cases with O-A incompatible pregnancies (54.88%), 55 cases with O-B incompatible pregnancies (41.35%), as a result, there were differences between these two blood group and the incidence of type A was higher than type B. In 145 cases of ABO-HDN, the direct antiglobulin test (DAT) with positive result was 38(26.21%), free antibody test was 76 (52.41%) and the RBC antibody release test was 144(99.31%). There were differences among the three serological tests.ConclusionThe morbidity of ABO-HDN in changsha is about 24.87%. No difference was found between the male children and female children. The three serological hemolytic tests are the most important methods for diagnosis of ABO-HDN, in which the most sensitive is RBC antibody release test, followed by free antibody test and DAT. The three serologic tests are helpful in the early prevention, early diagnosis and clinical treatment of the disease.

hemolytic disease of newborn； ABO； RBC antibody release test； DAT； free antibody test

R722.1

A

1673-016X（2016）06-0017-04

2016-08-10

刘琼，E-mail：396788418@qq.com