食品中白色念珠菌的检测工艺

◎王 愚，李甜甜

（西安市食品药品检验所，陕西 西安 710000）

食品中白色念珠菌的检测工艺

◎王 愚，李甜甜

（西安市食品药品检验所，陕西 西安 710000）

白色念珠菌是一种常见的真菌病原体，用不同的培养基对白色念珠菌进行培养时，它所展现的菌落特征与其他酵母存在很大差别。在显色培养基上白色念珠菌菌株呈蓝绿色，并且能够产生后垣孢子与芽管，在葡萄糖与麦芽糖发酵试验中能产酸产气，在蔗糖发酵试验中只产酸不产气。实验数据表明，将10个左右的白色念珠菌放入到100 μL样品中，白色念珠菌能够被显色培养基检测出来。

白色念珠菌；显色培养基；检测

白色念珠菌在自然界中存在较为广泛，又称假丝酵母，通常寄生在人的皮肤、口腔和肠黏膜等处，当机体抵抗力下降时，白色念珠菌会变换生长形式，侵入机体细胞，从而对人体造成伤害引发疾病。白色念珠菌的检测方法有很多种，主要分为生化鉴定和快速检测2种方法。一般认为最简便的初步鉴定方法是观察其假菌丝末端或中间是否形成典型的厚膜孢子，再结合其他生化特性加以鉴别。

目前，我国主要是参照国家药典中的标准方法进行检测。首先进行增菌培养，取10 mL的供试液进行处理，将其接种至适量的沙氏葡萄糖液体培养基中培养2～3 d。然后在沙氏葡糖糖琼脂培养基中培养以上培养物1～2 d，便可以依据菌落的形态进行鉴定。此外，动物接种、免疫血清检查、湿片法、PCR技术、分子杂交、显色培养基实验、芽管实验和荧光探针快速分析法等技术均可用于检测白色念珠菌。该试验利用白色念珠菌的生化特性，通过厚垣孢子实验、芽管形成实验和糖类发酵试验，检测食品中的白色念珠菌。

1 材料与方法

1.1 材料与仪器

烤肠、鱿鱼丝、银鱼、标准试剂型超纯水机、精密电子天平、灭菌器、上海一恒生化培养箱及离心机等。

1.2 菌株及培养基

白色念珠菌-ATCC10231、酿酒酵母-ATCC 26603、球拟酵母-ATCC 19433。选择沙氏琼脂培养基、显色培养基、TTC培养基、糖发酵培养基和玉米浸粉培养基等。

1.3 方法

首先要使菌株活化，用接种环挑取菌苔，将其接种在36 ℃的沙氏琼脂平板上培养2 d后把形态相同的菌落转接到斜面上进行染色，然后从斜面选取菌样品于1 mL的无菌水中，来回震荡使其混合均匀后对菌液进行统计计数。取50 μL上述菌液，将其均匀涂在显色培养基、血琼脂平板、TTC培养基、玉米浸粉培养基平板上，保持周围环境温度为28 ℃，观察并记录菌落的形态。然后依次进行以下4个实验:厚垣孢子实验、芽管形成实验、糖发酵实验、回收实验，并记录相应的数据和实验现象。

1.3.1 厚垣孢子实验

分别取10231白色念球菌、26603酿酒酵母、19433球拟酵母各50 μL均匀涂在1%吐温玉米琼脂培养基上，另取一份相同的1%吐温玉米琼脂培养基不作任何处理，室温下培养1～2 d后观察实验现象并记录。

1.3.2 芽管形成实验

分别取10231白色念球菌、26603酿酒酵母、19433球拟酵母接种到1 mL的血清中和无菌蒸馏水中，在37 ℃下培养一段时间，观察实验现象并记录。

1.3.3 糖发酵实验

分别取10231白色念球菌、26603酿酒酵母、19433球拟酵母接种在葡萄糖、麦芽糖、蔗糖培养基和无菌蒸馏水中，在室温下培养1 d，观察实验现象并记录。

1.3.4 回收实验

分别取烤肠、鱿鱼丝、银鱼各0.5 g，充分碾磨后置于离心管中，并加入无菌的生理盐水3 mL。取等量样品于2支无菌试管中，一支适量12301白色念球菌，另一支加入等量的无菌蒸馏水，震荡均匀。在2支试管内分别取50 μL样品均匀涂布在沙氏和显色平板上，室温下培养2 d，观察实验现象并记录。

2 结果与分析

2.1 菌落形态

10231白色念珠菌的菌落较大、圆形、乳白色、不透明，表面光滑、菌落两侧的颜色相同;26603酿酒酵母菌落较大、圆形、乳白色、不透明，表面光滑、菌落两侧的颜色相同;19433球拟酵母菌落较小、圆形、白色、不透明，表面光滑、菌落两侧颜色相同。3种菌落都有相同的气味。

2.2 染色结果

10231白色念珠菌，26603酿酒酵母，19433球拟酵母均在指示剂中显阳性。

2.3 显色培养基实验

10231白色念珠菌菌落较大、圆形、蓝绿色、表面光滑;26603酿酒酵母菌落较大、圆形、淡粉色、表面光滑;19433球拟酵母菌落较小、圆形、粉红色、表面光滑。

2.4 ATCC培养基实验

10231白色念珠菌菌落较大、圆形、乳白色、不透明且表面光滑;26603酿酒酵母菌落较小、圆形、淡粉色、不透明且表面光滑;19433球拟酵母菌落较小、圆形、淡粉色、不透明且表面光滑。

2.5 血琼脂平板实验

10231白色念珠菌菌落较大、圆形、奶油色、不透明，浓酵母气味、表面光滑;26603酿酒酵母菌落较小、圆形、白色、半透明且表面光滑;19433菌落较小、圆形、白色、半透明且表面光滑。

2.6 厚垣孢子实验

10231白色念珠菌有厚垣孢子形成;26603酿酒酵母无厚垣孢子形成;19433球拟酵母无厚垣孢子形成;对照组无明显现象。

2.7 芽管形成实验

10231白色念珠菌有芽管形成;26603酿酒酵母未生成芽管;19433其球拟酵母未形成芽管;对照组无芽管形成。

2.8 糖发酵实验

10231白色念珠菌发酵葡萄糖和麦芽糖能产生乳酸和二氧化碳，发酵蔗糖时只产生乳酸;26603酿酒酵母可以发酵葡萄糖和麦芽糖，产生乳酸和二氧化碳; 19433球拟酵母可以发酵葡萄糖和蔗糖只产生乳酸不产生二氧化碳;对照组无明显现象。

2.9 回收实验

10231白色念球菌回收实验:每50 μL样品中含5个左右白色念球菌时，白色念球菌便可以被检测出来，而对照的实验样品中没有检测出含有白色念球菌。

3 结论

1）在沙氏琼脂培养基、玉米浸粉和血琼脂平板上，培养10231白色念珠菌、26603酿酒酵母、19433球拟酵母所形成的菌落的颜色基本相同，10231白色念珠菌的菌落最大，26603酿酒酵母和19433球拟酵母的菌落相对较小;用TTC培养基培养时，形成的菌落颜色有所不同，10231白色念珠菌的菌落为乳白色，26603酿酒酵母与19433球拟酵母的菌落却是淡粉色;当用显色培养基培养时，10231白色念珠菌的菌落为蓝绿色，而26603酿酒酵母与19433球拟酵母的菌落是淡粉色。

2）厚垣孢子实验中，只有10231白色念球菌能够产生厚垣孢子;芽管实验中，只有10231白色念球菌能够产生芽管;糖发酵实验中，19433球拟酵母能够发酵葡萄糖和蔗糖只产生乳酸不产生二氧化碳，10231白色念珠菌和26603酿酒酵母能够发酵葡萄糖和麦芽糖产生乳酸和二氧化碳，但发酵蔗糖时只产生乳酸。

3）每50 μL样品中含5个左右白色念球菌时，白色念球菌便可以被显色培养基检测出来。

4 讨论

该实验采用厚垣孢子实验、TTC培养基培养法对食品中的白色念球菌进行鉴定。TTC还原、假菌丝和厚壁孢于产生均为普遍采用的酵母样真菌的重要鉴定试验，此三项指标为鉴别白念苗与其他念珠菌的主要依据。通过对传统的方法进行了改良，与传统的实验方法比较，成本相对较低且操作简单，简化了实验的繁琐步骤，节省了时间，而且得到的实验结果与文献中的数据是吻合的。查阅相关文献，了解到DNA分子杂交技术—PCR技术可用于直接检测食品中的白色念球菌。DNA分子杂交技术的原理并不复杂，灵敏度高，但是实验前的一些预处理要求高，而且成本相对较高，在其他检测领域也有着较大的应用价值。白色念珠菌在苯胺蓝培养基上显阳性，因而可以高效地鉴定白色念珠菌。国外已采用该培养基用于食品环境，临床标本中白色念珠菌的快速分离与鉴定，其准确率达98%以上。但在中国还没有实际的应用。总之，对于食品中的白色念球菌可以用显色培养基进行简便、快捷、准确地鉴定。

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典（第二部）[M].北京:中国医药科技出版社，2010:103-107.

[2]欧阳珂瑕，刘生峰，肖进文，等.白色念珠菌检测方法的研究进展[J].食品工业科技，2012（8）:420-427.

Analysis the Inspection Process of Candida albicans in Food

Wang Yu, Li Tiantian
（Shanxi Institute for Food and Drug Control, Shanxi Xi'an 710000, China）

Candida albicansis a common fungal pathogen, which shows a big difference in colony characteristics with the other yeast when using different culture medium to culture. On the chromogenic strains ofCandida albicansis blue-green, and can produce chlamydospore and germ tubes, what more important is that it can produce acid and gas in glucose and maltose fermentation test, however there is only acid acid fermentation test in sucrose yield. Experimental data shows that put 10 albicans into 100 microliters of sample,Candida albicanscan be detected by chromogenic medium.

Candida albicans; Chromogenic medium; Detection

TS207.4

王愚（1982-），女，陕西西安人，本科，药师，主要研究方向：微生物检验工作；李甜甜（1984-），女，陕西西安人，本科，药师，主要研究方向：微生物检验工作。