西宁野生动物园禽霍乱病原分离及药敏试验

何顺福，居玉婷

（西宁野生动物园，青海　西宁810000）

西宁野生动物园禽霍乱病原分离及药敏试验

何顺福，居玉婷

（西宁野生动物园，青海西宁810000）

2012年11月份我园雉鸡类饲养展区发生禽霍乱疫病，发病动物涉及黑鹳、斑头雁、蓝孔雀、火鸡、白额雁、黑天鹅、赤麻鸭、鹈鹕、鸿雁，灰雁、鸬鹚11种动物，为及时控制病情，有效的治疗发病动物，经与青海大学动物医学传染病实验室协作，采取常规的病原分离及药敏试验技术对我园发病动物进行禽巴氏杆菌病的微生物学诊断，经过病原分离及药敏试验，筛选出了有效治疗我园禽霍乱疫病的有效药物，最短时间内控制了病情的发展。

西宁野生动物园；禽霍乱；病原分离及药敏试验

1　材料与方法

1.1无菌采集发病及病死11种雉鸡、禽类脏器，采取革兰氏、美兰染色、镜检，菌株的分离，纯化及氧化酶实验进行结果判定。

1.2健康小白鼠14只作为实验动物，用纯化后的野生菌接种到鲜血琼脂斜面培养基上，37℃培养24～48h制成菌悬液，并与麦氏浊管进行比浊，选取浓度为3.0×109个/mL的菌悬液分别腹腔注射7只小白鼠，0.5mL/只。同时应用0.22μm细菌滤器分别对上述菌悬液过滤，各取滤液腹腔注射7只小白鼠，0.5mL/只，作为对照，进行动物致病性试验。

1.3选取22种药敏纸片，用灭菌棉拭子蘸取动物致病性试验中选取的浓度为3.0×109个/mL的菌悬液均匀涂布于MH平板培养基上（培养基厚度为4mm）进行药敏试验。判定标准参照美国临床实验室标准委员会（NCCLS）药敏试验纸片扩散法法规。

2　结果

2.1临床症状发病动物精神沉郁、羽毛松乱、缩颈闭眼、头缩在翅下、不愿走动、离群呆立，意识呆滞并伴有严重的神经症状，出现原地转圈现象，触碰发病动物有很大的应激反应，腹泻排黄色、灰白色或绿色的稀粪，呼吸困难，口、鼻分泌物增加，冠和肉髯变青紫色溃烂、有的肉髯肿胀有明显的热痛感。体温升高到43～44℃，发病动物食欲减退甚至废绝，同群动物食欲减退明显，饲喂饲料大量剩余，饮水明显增加，饮水量是平时的3～4倍，发病动物最后发生衰竭昏迷而死亡，病程短的约0.5d，病程最长的达到20d。

2.2病理剖检结果肌胃出血、肠道尤其是十二指肠呈卡他性和出血性肠炎、肠内容物含有血液是本病最明显的症状，死亡动物心包变厚、心包内积有多量不透明淡黄色液体，有的含纤维素絮状液体、心外膜、心冠脂肪出血尤为明显。肺有充血或出血点，肝脏的病变具有特征性，肝稍肿，质变脆，呈棕色或黄棕色，肝表面散布有许多灰白色、针头大的坏死点。

2.3病料触片染色及镜检革兰氏染色、镜检，可见革兰氏阴性、两端钝圆、单个或成双排列、形态均匀一致的小杆菌；美蓝染色镜检可见大量两极浓染的小杆菌。

2.4致病性试验试验发现试验组7只小白鼠于24～36h全部死亡，死亡后采集实质脏器，分别分离到了与上述一致的革兰氏阴性小杆菌，对照组7只小白鼠72h后仍健活。

2.5药敏试验结果应用22种药敏纸片对禽霍乱病原菌进行药物筛选，结果表明诺佛沙星、环丙沙星、磺胺、氧佛沙星四类药物敏感。

3　讨论

3.1由于我园雉鸡类饲养展区面积较大，日常消毒做不到位，除珍禽馆每周进行2～3次的日常消毒以外，其他展区因面积较大又是露天展出环境，几乎不进行日常消毒工作，受禽霍乱疫苗的购买条件限制未进行免疫接种。冬季气候寒冷等因素可能是导致该病发生的主要原因，通过本次疫情可发现同群动物中体质瘦弱的易感且快速死亡，体质较好的感染后病程较长，猛禽类动物未出现感染，白天未见发病动物死亡，发病动物死亡一般是在夜间温度最低的时间段，出现明显症状发病动物全部死亡，无一转归。

3.2严格科学的日常饲养管理是预防本病的主要途径，我园鸟类展区共饲养展出各类动物51种500多只，分为水禽湖饲养展区、珍禽馆饲养展区、猛禽饲养展区及百鸟苑饲养展区，各展区饲养员之间互相配合完成日常的饲养管理工作，每年春秋季进行禽流感及新城疫的疫苗免疫接种工作，因为禽霍乱疫苗获取难度较大的缘故未能接种禽霍乱疫苗，发病后第一时间未让饲养员采取单独饲养措施，导致了各展区的相互交叉传染，禽霍乱一旦发生治疗难度很大，高死亡率会造成很大的经济损失，因此一定要严格贯彻“预防为主”的原则，出现疫情后要做好发病动物的隔离工作，发现患病动物及时进行隔离，做好日常的消毒工作及疫苗接种工作，重点是免疫接种要做到100%，我园在发生禽霍乱疫情后用大型喷雾消毒工具选用强力消毒灵、聚维酮碘等消毒药物每天对各展区进行2～3次的消毒工作，在主要出入通道口铺洒生石灰，有效的控制了疫情的发展。

从略）

10.3969/J.ISSN.1671-6027.2016.06.011