E-选择素、血管黏附分子1在生殖道沙眼衣原体感染患者阴道上皮组织中的表达及临床意义▲

韦 绚 姚 军 秦秀妹 黄 静 于路妹 李志勤 熊蔓萍

(桂林医学院第二附属医院，1 妇产科，2 检验科，桂林市 541001，E-mail：gxweixuan@163.com)

论著·临床研究

E-选择素、血管黏附分子1在生殖道沙眼衣原体感染患者阴道上皮组织中的表达及临床意义▲

韦 绚1姚 军1秦秀妹1黄 静1于路妹2李志勤1熊蔓萍1

(桂林医学院第二附属医院，1 妇产科，2 检验科，桂林市 541001，E-mail：gxweixuan@163.com)

目的 探讨生殖道沙眼衣原体感染患者阴道上皮组织中E-选择素、血管黏附分子1(VCAM1)的表达情况及其意义。方法 选取70例生殖道沙眼衣原体感染女性患者为感染组,选取100例健康女性志愿者或无生殖道感染的良性妇科疾病女性为对照组，采用免疫组化法检测两组阴道壁结缔组织的E-选择素、VCAM1表达水平。分析E-选择素及VCAM1的相关性。结果 感染组患者阴道上皮组织中E-选择素及VCAM1阳性信号的平均灰度值高于对照组(P<0.05)；生殖道沙眼衣原体感染患者阴道黏膜组织中E-选择素及VCAM1表达呈正相关(r=0.672，P=0.002)。结论 E-选择素、VCAM1可能参与了生殖道沙眼衣原体感染过程。

生殖道感染；沙眼衣原体；E-选择素；血管黏附分子1；阴道上皮组织

生殖道沙眼衣原体感染是由沙眼衣原体引起的、以泌尿生殖道部位炎症为主要表现的性传播疾病，是女性常见疾病之一，严重者可导致输卵管性不孕、输卵管妊娠、不良妊娠(如早产、流产)等，目前尚无有效的治疗方案[1-2]。因此，早期诊断及治疗尤为重要。E-选择素是黏附分子选择素家族的主要成员之一，在炎症过程中可以募集炎症细胞并使其黏附，促使其产生前炎症因子，进而加重炎症进程[3-4]。血管黏附分子1(vascular cell adhesion molecule-1，VCAM1)属免疫球蛋白超家族，主要分布于内皮细胞、上皮细胞、巨噬细胞，主要介导单核细胞、淋巴细胞与内皮细胞黏附，在炎症因子的产生及释放中具有十分重要的作用[5]。目前关于这两个因子是否与生殖道沙眼衣原体感染相关尚不清楚[6]。本研究旨在探讨E-选择素、VCAM1在生殖道沙眼衣原体感染患者阴道上皮组织中的表达，以期为生殖道沙眼衣原体感染临床治疗及预后评估提供更有力的依据。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选取2014年8月至2015年8月我院妇科门诊诊断为生殖道沙眼衣原体感染女性患者70例为感染组。诊断标准：取阴道分泌物采用单克隆抗体快速免疫法检测结果阳性，阴道分泌物涂片检查无淋球菌、滴虫感染存在，并排除其他病原混合感染。选取同期健康的女性志愿者或无生殖道感染的良性妇科疾病女性100例作为对照组。入选病例均有性生活史、非妊娠期、无盆腔放射治疗史、无子宫切除史者，年龄18～60岁。排除有肾功能不全及肝功能不全者，存在生殖器官畸形、卵巢功能障碍、子宫内膜异位症、染色体异常者，不孕不育患者，以及合并妇科恶性肿瘤患者。感染组年龄(29.45±5.29)岁，体重指数(24.11±3.28)kg/m2，妊娠次数(1.80±0.05)次；对照组年龄(31.43±4.26)岁，体重指数(23.46±3.44)kg/m2，妊娠次数(2.10±0.11)次。两组的年龄、体重、妊娠次数等临床资料比较，差异无统计学意义(P>0.05)。本研究均经医院伦理委员会批准，所有研究对象均同意组织取材并签署知情同意书。

1.2 取材 使用不含润滑剂及消毒剂的窥阴器进行阴道扩张，用干棉签擦拭净宫颈外口分泌物，切取阴道后穹隆阴道壁组织0.5 cm×0.5 cm×0.1 cm。用冷无菌0.9%氯化钠液洗净血液后切去组织间质，经液氮速冻后贮藏于-80℃低温冰箱中保存待测。

1.3 检测方法 将阴道镜下取得的阴道黏膜活检组织经石蜡包埋后切片，用免疫组化链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶联结(streptavidin-perosidase，S-P)法检测E-选择素及VCAM1表达情况。兔抗人E-选择素(生产批号：CM250925，福建迈新生物工程公司)及VCAM1单克隆抗体(生产批号：LS-C172656，福建迈新生物工程公司)工作浓度为1 ∶20，S-P免疫组化试剂盒购自北京中杉桥生物公司(生产批号：SP-9001)，实验步骤按试剂盒说明书进行。阳性对照采用扁桃体石蜡切片组织进行染色，阴性对照则用磷酸缓冲盐溶液代替一抗进行以上染色法。每张切片随机选取5个400倍视野，分析各组阴道壁组织中E-选择素及VCAM1染色的阳性区平均灰度值。免疫组化染色的强弱与灰度值成正比，阳性物质越高，染色越深，灰度值越大，反之越小。

1.4 统计学分析 采用SPSS 19.0软件进行数据分析，计量资料以(x±s)表示，组间比较采用t检验，相关性分析采用Pearson相关分析，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 两组阴道上皮组织中E-选择素及VCAM1的表达情况 E-选择素及VCAM1染色呈棕黄色颗粒状，主要定位于细胞膜及细胞质内。感染组阴道黏膜组织中E-选择素及VCAM1阳性信号的平均灰度值高于对照组(P<0.05)，见表1、图1。

表1 两组阴道上皮组织中E-选择素及VCAM1的表达情况(x±s)

注：A、C 沙眼衣原体感染的阴道上皮组织；B、D 正常阴道上皮组织。

图1 E-选择素及VCAM1在两组阴道上皮组织中的表达情况(S-P染色，400×)。

2.2 E-选择素及VCAM1相关性分析 70例沙眼衣原体生殖道感染患者的阴道上皮组织中，E-选择素及VCAM1同时表达阳性者占67.1%(47/70)，同时表达阴性者占21.4%(15/70)，两者的表达水平呈正相关性(r=0.672，P=0.002)。

3 讨 论

沙眼衣原体感染是常见的性传播疾病，在发达国家，沙眼衣原体感染占性传播疾病第一位，而我国沙眼衣原体感染率也在增高。其可引起宫颈黏膜炎、子宫内膜炎、输卵管炎、盆腔炎，最后导致不孕或输卵管妊娠[7-8]。因此，早期诊断及评估生殖道沙眼衣原体感染病情，寻找其感染发生的危险因素及预测指标，有利于预防和及时治疗该疾病，保护母婴健康。

沙眼衣原体感染早期机体存在剧烈的炎症反应，重复感染会加剧炎症反应程度，最终导致不可逆的组织损伤及疤痕的形成。沙眼衣原体表面表达脂蛋白可以通过Toll样受体及 CD14活化单核巨噬细胞，释放促炎症因子[9]。在感染早期的宫颈表皮细胞内可以观察到一些促炎症因子如白细胞介素(interleukin，IL)-8、IL-6、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子及诱导型一氧化氮合酶mRNA 的表达上调，以及细胞表面的细胞间黏附因子-1(intercellular cell adhesion molecule-1，ICAM-1)的表达增多，且ICAM-1能募集循环中的中性粒细胞到宫颈上皮细胞表面引发及加剧炎症反应[10-13]。

E-选择素是黏附分子选择素家族的主要成员之一，为细胞表面糖蛋白，存在于活化的血管内皮细胞表面。在炎症过程中，E-选择素可通过招募Th1亚型淋巴细胞的黏附和聚集，促使其产生前炎症因子，从而加重炎症进程，与此同时，炎症组织释放的IL-1及肿瘤坏死因子α等细胞因子可活化血管内皮细胞，从而反过来刺激E-选择素的合成[14]。目前关于E-选择素在沙眼衣原体生殖道感染的炎症反应中的作用的研究极少[15]。本研究结果显示，生殖道沙眼衣原体感染患者阴道黏膜组织中E-选择素阳性信号的平均灰度值高于对照组(P<0.05)，提示E-选择素在沙眼衣原体生殖道感染患者的阴道上皮组织中高表达，表明E-选择素在生殖道感染及炎症反应中发挥中重要作用，可能是固有性免疫的受体分子。

在炎性细胞因子的作用下，许多类型细胞上的VCAM1表达可迅速上调[16]。目前研究显示，VCAM1参与调节免疫反应、细胞和组织的分化与发育、免疫应答、淋巴细胞归巢、再循环以及肿瘤的扩散等[17-18]。本研究结果显示，生殖道沙眼衣原体感染患者阴道黏膜组织中VCAM1阳性信号的平均灰度值高于对照组(P<0.05)，提示VCAM1在沙眼衣原体生殖道感染患者的阴道上皮组织中高表达，提示VCAM1参与了炎症的发生发展。

VCAM1与E-选择素均是黏附分子，但由于结构不同，又分属于不同家族，各自在生理、病理过程中所发挥的作用不尽相同。VCAM1主要在活化的内皮细胞上进行表达，并少量表达于上皮细胞、巨噬细胞和树突状细胞等，但需与受体极迟抗原-4结合发挥作用。而E-选择素仅表达于活化的血管内皮细胞上[19-20]。本实验结果显示，VCAM1与E-选择素水平变化呈正相关(P<0.05)，说明两者在生殖系统感染变化趋势一致。

总之，VCAM1与E-选择素在沙眼衣原体生殖道感染患者阴道上皮组织中高表达，且变化趋势一致，可能参与了炎症反应，但其机制尚需要进一步研究。

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Expression and clinical significance of E-selection and vascular cell adhesion molecule-1 in vaginal epithelium of patients with genital tractChlamydiatrachomatisinfection

WEIXuan1,YAOJun1,QINXiu-zhu1,HUANGJing1,YULu-mei2,LIZhi-qin1,XIONGMan-ping1

(1DepartmentofObstetricsandGynecology,2ClinicalLaboratory,theSecondAffiliatedHospitalofGuilinMedicalCollege,Guilin541001,China)

Objective To explore the significance and expression of E-selection and vascular cell adhesion molecule-1(VCAM1) in the vaginal epithelium of patients with genital tractChlamydiatrachomatisinfection.Methods Seventy female patients with genital tractChlamydiatrachomatisinfection were enrolled as infection group,and 100 healthy female volunteers or female patients with benign gynecological diseases but without genital tract infection as control group.Immunohistochemistry was used to detect the expression levels of E-selection and VCAM1 in vaginal wall connective tissues.The correlation of E-selection with VCAM1 was analyzed.Results The average gray values of E-selection and VCAM1 positive signal in vaginal epithelium of the patients in the infection group were higher than those in the control group(P<0.05).In vaginal mucosa tissues of the patients with genital tractChlamydiatrachomatisinfection,E-selection expression positively correlated with VCAM1 expression(r=0.672,P=0.002).Conclusion E-selection and VCAM1 may be involved in the process of genital tractChlamydiatrachomatisinfection. 【Key words】 Genital tract infection，Chlamydiatrachomatis,E-selection,Vascular cell adhesion molecule-1,Vaginal epithelium tissue

广西医药卫生科研课题(Z2014337)

韦绚(1968～)，女，本科，副主任医师，研究方向：妇科肿瘤。

R 711.31

A

0253-4304(2016)03-0332-03

10.11675/j.issn.0253-4304.2016.03.10

2015-12-12

2016-02-16)