鼠胚实验在新建体外受精胚胎培养室质量控制中的作用研究

潘晖　夏燕　张玲

鼠胚实验在新建体外受精胚胎培养室质量控制中的作用研究

潘晖夏燕张玲

目的 研究鼠胚实验在新建体外受精胚胎培养室质量控制中的作用。方法 在实验的过程中将小鼠分为体内受精组与体外受精组，对其培养状况进行记录和统计分析。结果 体内受精组的受精率高于体外受精组（P＜0.05）。体内受精组与体外受精组的囊胚形成率对比，差异不具有统计学意义（P＞0.05）。结论 鼠胚实验可以实现对新建胚胎培养室的培养体系进行评估。

鼠胚实验；培养室；质量控制

历经数十年的发展我国辅助生殖技术日益规范化，目前能够开展该项治疗的医疗机构已经达到300多家，每年能够为约20万患者提供辅助生殖支持[1］。而在这一过程中胚胎培养室则被称为人类胚胎的加工厂，是实现辅助生殖的重要环节。

因此，建设高标准的胚胎培养室是至关重要的，而新建胚胎培养室的各项环境和设备指标是否能够达到有效辅助胚胎体外生长的要求，就成为新建体外受精胚胎培养室必须解决的问题[2］。本文以本院新建的胚胎培养实验室鼠胚实验为依据，对鼠胚实验（MEA）方法在实验室质量控制中的作用进行如下报道。

1 材料与方法

1.1 材料

研究选取约4～6周龄以上的昆明白雌鼠，体重25～28 g；8周龄以上的昆明白雄鼠，体重30～35 g。实验小鼠的饲养温度21℃～25℃，相对湿度30%～50%；实验小鼠保证水供应，饲料夜间供应。使用PMSG和HCG均为：兽用，宁波三生药业产，均为1 000 IU粉剂/支。用0.9%生理盐水10 ml溶解，用1 ml注射器每支分装1 ml在-20℃冷冻保存。使用前恢复至室温后进行注射。

1.2方法

在实验的过程中将小鼠分为体内受精组与体外受精组。体内受精组：分7批次（5只为一批次）对健康的雌性小鼠在统一的时间内（18：00）进行腹腔PMSG 10 IU（0.1 m l）注射；注射48 h后进行HCG 10 IU（0.1 ml）注射。然后按照雄鼠：雌鼠为1：2的比例将雌雄小鼠进行合笼。在合笼完成16 h以后将雌鼠单独培养，隔日晨10：00利用后颈椎脱臼法让雌鼠死亡，并在无菌环境下取出其输卵管，将其置于培养皿中，利用一次性注射器在输卵管上制造切口并通过轻挤压方式释放出受精卵[3］。对获取的受精卵进行洗涤后置于卵裂培养皿中，以10个受精卵为一观察液滴，将其放置到环境适宜的培养箱中。

体外受精组：分为7个批次采用上述体内受精组方法注射雌鼠，HCG注射后隔日早10：00同法让雌鼠死亡，同法处理输卵管，通过轻挤压方式释放出卵冠丘复合体，对获取的卵冠丘复合体进行洗涤后置于受精皿中，以15个受精卵为一观察单元，将其放置到环境适宜的培养箱中[4］。随后采集雄鼠的精液利用集中受精法进行体外受精。

1.3观察指标

本次实验中观察的指标包括：2-细胞率、受精率、囊胚形成率等。

1.4统计学方法

本次研究采用了SPSS19.0进行分析，计量资料用（均数±标准差）表示，采用t检验，计数资料用百分比表示，采用χ2检验，P＜0.05，差异有统计学意义。

2　结果

在本院新建设的培养室环境下，开展了7个批次的昆明白小鼠体内受精，在总共35个周期内一共获卵1 136枚，其中2-细胞数1 058个。同时开展了7个批次的昆明白小鼠体外受精，在总共35个周期内一共获卵1 486枚，其中1 254枚受精。通过对实验数据的记录和分析可知，体内受精组的2-细胞率为（93.07±1.25）%，体外受精组的受精率为（85.21±2.66）%；由此可知体内受精组的受精率高于体外受精组（P＜0.05）。体内受精组与体外受精组的囊胚形成率分别为（90.22±2.01）%和（91.02±1.88）%，两组的囊胚率对比，差异无统计学意义（P＞0.05）。

3　讨论

繁衍后代是绝大多数生物在其生命历程中都需要经历的重要一环，体外受精胚胎培养室在辅助人类生育上发挥着“加工厂”的作用，而这个“加工厂”的培养室质量控制则成为学术界关注的重点[5-6］。

通过对实验数据的记录和分析可知，在本院新建设的培养室环境下，本实验的结果显示采用两种方法的鼠胚囊胚率均大于80%，研究报道囊胚形成率达到 80%即可以做为胚胎实验室培养体系符合要求的标准[7］，且本研究结果显示采用两种方法的质量控制结果没有差异，因此，以上两种方法均可以用于胚胎实验室的质量控制。

但笔者认为体外授精囊胚培养法更适宜用于新建实验室的质量控制。其原因在于：已有的研究结果显示体外受精比体内受精的鼠胚胎对胚胎发育的影响因素更为敏感，更有利于检测出不利因素对胚胎发育的影响[8］，发现体外培养体系中存在的问题；也是对实验操作者技术能力的检验，可以培训和提高实验室技术人员的技术能力。

鼠胚实验是目前较为常用的胚胎培养实验室质量控制检测方法之一。很多因素会影响到胚胎的质量和囊胚率，故只有尽可能控制那些影响胚胎生长发育的胚胎培养体系中的可控因素，胚胎培养实验室的整个培养体系才能为胚胎的生长发育提供相对适宜的条件，才可能培养出生长发育潜能好的胚胎。

[1]王辉田，李涛，黎伟豪，等.鼠胚实验在新建体外受精胚胎培养室质量控制中的作用[J］.实用妇产科杂志，2015，31（2）：115-119.

[2]王辉田，李涛，宏苹苹，等.新建IVF实验室中挥发性有机化合物的浓度变化及其对鼠胚体外发育的影响[J］.生殖与避孕，2016，36（1）：15-20.

[3]胡卫华，侯文文，吴满意，等.鼠胚实验在新建IVF胚胎培养室中的质控研究[J］.皖南医学院学报，2013，32（3）：181-183.

[4]苏亮，罗平，罗江霞.不同来源小鼠胚胎培养在辅助生殖实验室质量控制中的应用[J］.华夏医学，2012，25（1）：16-18.

[5]王巍，邱卓琳，马海兰，等.小鼠体外受精胚胎培养在新建IVF实验室质量控制中的作用[J］.华夏医学，2011，24（6）：649-652.

[6]刘云，李峰，陈小芳，等.小鼠胚胎培养在新建体外受精实验室的质量控制验证[J］.中国妇幼保健，2014，29（26）：4300-4301.

[7]李小平，郝朝亮，高庭，等.鼠胚实验在新建胚胎培养实验室质量控制中的作用[J］.中南医学科学杂志，2013，41（1）：21-23.

[8]高亚可，杜姗姗.新建辅助生殖实验室的鼠胚实验报告[J］.广西医学，2016，38（3）：304-307.

The Effect of Mouse Embryo Test on the Quality Control of New ly Built in Vitro Fertilization Embryo Culture Room

P
AN Hui XIA Yan ZHANG Ling Assisted Reproduction Center， Urumqi Maternal and Child Health Care Hospital， Urumqi Xinjiang 830002， China

Ob jective To study the effect of mouse embryo test on the quality control of new ly constructed in vitro fertilization and embryo culture room. Method s In the course of the experiment， the mice were divided into the in vivo fertilization group and the in vitro fertilization group， recording and statistical analysis of their training status. Resu lts The fertilization rate of in vivo fertilization group was higher than in in vitro fertilization group （P＜0.05）. In vivo fertilization group and in vitro fertilization group blastocyst formation rate contrast， the difference is not statistically significant （P＞0.05）. Conclusion The experiment of mouse embryo can be carried out to evaluate the culture system of the new embryo culture room.

Mouse embryo experiment， Culture room， Quality control

R-33

A

1674-9308（2016）27-0012-02

10.3969/j.issn.1674-9308.2016.27.008

新疆乌鲁木齐市（自治区）妇幼保健院辅助生殖中心，新疆 乌鲁木齐 830002