鸡传染性法氏囊病快速诊断方法的研究

王佳伟

（河北省霸州市畜牧兽医局，廊坊 065700）

鸡传染性法氏囊病快速诊断方法的研究

王佳伟

（河北省霸州市畜牧兽医局，廊坊 065700）

文章主要分析了鸡传染性法氏囊病的流行病学和临床症状、病原分离鉴定及胶体金免疫层析技术，以此为养殖户进行疫病防治提供指导。

鸡传染性法氏囊病 快速诊断 方法研究

1 流行病学和临床症状

1.1 流行病学

不论是什么品种的鸡，都可能感染传染性法氏囊病，尤其是4～6周大的雏鸡，更是容易感染。其最显著的特征就是感染性强、发病快，并且病程比较短。近几年来，传染性法氏囊病病毒的超强毒株和变异毒株的出现，使被感染的鸡群的发病率和死亡率大幅度升高。

1.2 临床病症

病鸡主要表现为精神萎靡、食欲不振、双翅下垂、反应迟钝、腹泻等。如果病情严重，鸡群就会畏寒，从而扎堆取暖，最后出现严重脱水，极度虚弱，体温开始逐渐下降，最终死亡。通常发病后的3～5 d是鸡死亡的高峰期。

2 病理学诊断

典型的感染传染性法氏囊病而死亡的鸡的尸体会呈现出严重的脱水状态，胸肌、腿肌会出现不同程度的血斑，或成点状或成条状；肾脏肿大，并且有石灰乳样尿酸盐沉积；法氏囊肿大，并且有出血的情况；盲肠扁桃体肿胀、出血。亚临床型感染或者变异感染的鸡虽然情况没有典型感染的鸡那么严重，但是仍存在的一定的变化。通常这些鸡的法氏囊会出现一定程度的萎缩，并且皱襞会变得相对扁平，囊腔之内也会出现一定的干酪样物质，部分鸡的胸肌和腿肌也会出现轻微程度的出血，肾脏同样也会轻微肿胀，同时伴随少量尿酸盐沉积。

3 病原分离鉴定

3.1 样品制备

采取感染了传染性法氏囊病病鸡的新鲜法氏囊，然后用剪刀将法氏囊剪碎，与经过灭菌处理的生理盐水进行混合。再加入少量青霉素和链霉素溶液，搅拌至均匀状态。维持温度在37 ℃，静置30～60 min，以3 000 r/min的转速离心10～20 min。最后收集上层的清液作为鉴定的样品使用。

3.2 鸡胚分离病毒

使用绒毛尿囊膜将样品分别接种到5枚无特异性抗体的鸡胚上（0.2 ml/枚），这些鸡胚以9～11日龄为最佳。接种好之后用石蜡将接种孔进行密封，并将温度控制在37 ℃。接种之后，如果鸡胚在48 h内就死亡的，应该将其舍弃不用，将接种后48 h之后死亡的鸡胚进行收集，并且检查鸡胚的病变情况。检查发现鸡胚出现萎缩、出血、皮下水肿的情况，并且越晚死亡的鸡胚病变情况越严重。

3.3 鸡体分离病毒

选取5只年龄在3～7周的易感鸡作为实验组，同时设置相应的对照组。对实验组的5只鸡分别通过眼滴和口服的方式，服用病料上清液各0.5 ml。72 h之后，将这些鸡全部宰杀，检查其法氏囊的病变情况。它们的法氏囊都呈现为黄色，并且有出血和肿胀的情况，甚至有些鸡的法氏囊周围组织还出现了水肿的情况。因此，根据实验组易感鸡的法氏囊出现了病变，而对照组健康鸡的法氏囊没有出现病变，即可进行快速诊断。

3.4 细胞分离病毒

纤维细胞最适合用来分离IBDV，具体操作步骤如下：用含有100 mmol/L氯化钠溶液的MEM培养SPF鸡胚纤维细胞。等到纤维细胞长成单层状态时进行病毒组织样品的接种。保持37 ℃的恒温状态，进行2 h的吸附，然后倾倒去接种物，再加入维持液培养72 h。72 h之后进行收毒和盲传处理，直到鸡胚纤维细胞出现明显的病变位置。观察可以发现，传至第3代时即可出现很明显的病变效应，细胞就会出现圆缩、脱落的情况。

4 胶体金免疫层析技术

胶体金免疫层析技术是利用免疫层析的原理将抗原和抗体都固定在层析介质之上。相应的抗体或者抗原会出现毛细涌动的情况，并且会和特异性的物质进行结合，然后最终滞留在结合的区域。这时只要通过显色反应就可以进行判定，这里的显色反应应用的就是胶体金免疫显色，当胶体金的颗粒数量达到了107 m3时，用肉眼即可看见呈粉红色的斑点。

4.1 制备组织悬液

将待检鸡的法氏囊取出来，放置在事先准备好的容器之中，往容器中添加生理盐水，将法氏囊在生理盐水中进行充分剪碎或者进行匀浆处理，静置5 min。

4.2 检测

将事先放在4 ℃冰箱中准备待用的IBD快速诊断试纸取出来，等到试纸恢复到室温时，拿住试纸的手柄端，将测试端伸入到已经静置完成的组织悬液的上清液上，这个过程一定注意不要让液面超过max线。等到硝酸纤维膜吸满了液体之后，即可将IBD快速诊断试纸取出来，平放1～5 min，并且注意观察硝酸纤维膜的显色情况。

4.3 判定结果

当IBD快速诊断试纸的硝酸纤维膜上显现出2条红棕色线时，即表明检测的结果为阳性，也就说明待检鸡感染了传染性法氏囊病病毒；如果IBD快速诊断试纸的硝酸纤维膜上只出现了1条红棕色的线，并且这条线在靠近手柄的一端，就说明检测结果为阴性，也就是说待检鸡没有感染传染性法氏囊病病毒；如果IBD快速诊断试纸的硝酸纤维膜上没有出现任何的红棕色的线，那就说明操作的过程中存在错误或者试纸失败，需要重新进行操作。胶体金免疫层析技术这一方法，不仅快捷易操作，而且检测结果明显，灵敏度高，是鸡传染性法氏囊病快速诊断最有效的方法。

［1］ 许江涛.传染性法氏囊病病毒反向遗传系统及RT-LAMP诊断方法的建立.青岛:青岛农业大学，2010

［2］ 霍焱，曲恒溢.鸡传染性法氏囊病的血清学诊断方法.养殖技术顾问，2011，（5）：192