磨盘草提取物的抗氧化活性研究

郑鸿娟，黄春阳，齐梁煜，张 航，李兆叠，黄月维，钟兆银，黄锁义,3*

(1.右江民族医学院 临床医学院，广西 百色 533000；2.右江民族医学院 药学院，广西 百色 533000；3.右江流域特色民族药研究广西高校重点实验室，广西 百色 533000)

1.2.2 清除DPPH 自由基能力的测定[7]

1.2.3 还原力的测定[8]



磨盘草提取物的抗氧化活性研究

郑鸿娟1，黄春阳1，齐梁煜1，张 航1，李兆叠1，黄月维1，钟兆银2，黄锁义2,3*

(1.右江民族医学院 临床医学院，广西 百色 533000；2.右江民族医学院 药学院，广西 百色 533000；3.右江流域特色民族药研究广西高校重点实验室，广西 百色 533000)

目的：探究磨盘草乙醇提取物和甲醇提取物的抗氧化活性。方法：检测磨盘草乙醇提取物和甲醇提取物清除DPPH 自由基能力和还原Fe3 +能力，评价并对比不同提取方法所得物质的抗氧化活性。结果：磨盘草乙醇提取物和甲醇提取物对DPPH自由基均具有较强的清除作用和较显著的还原Fe3+能力，且随着提取液质量浓度的增加而增强。结论：磨盘草乙醇提取物和甲醇提取物均具有较强的抗氧化活性且与浓度呈现良好的量效关系。在一定质量浓度下乙醇提取物清除DPPH·能力比甲醇提取物强，甲醇提取物的还原Fe3+能力比乙醇提取物强。

磨盘草；提取物；抗氧化活性

磨盘草为锦葵科苘麻属植物磨盘草[Abutilonindicum(L.) Sweet]，异名为金花草、唐挡草、耳响草、帽笼子、磨笼子、磨盆草、印度苘麻、牛响草、白麻、米兰草、研仔盾草等。全草或根入药，甘淡平, 疏风清热、化痰止咳、消肿解毒， 用于感冒、发热、咳嗽、中耳炎、腮腺炎、耳聋、咽痛炎、尿路感染、疮痈肿痛、跌打损伤。生于砂地、旷野或路旁,分布于广西、广东、贵州、云南、福建、台湾等地[1]。经研究全草含有萜类、甾类、酚类、黄酮苷、氨基酸、有机酸和糖等[2-3]。磨盘草适应性广，生长条件要求不高，药用价值高，有一定的开发利用前景。经文献调研，目前国内外对于磨盘草的研究主要集中于其成分的分析[3-5]，对其提取物体外抗氧化活性的相关研究很少见，限制了磨盘草的深度开发和利用。为此，本文采用DPPH 自由基和Fe3+还原力的不同体外抗氧化模型，以其还原力和清除自由基能力为指标，评价并对比磨盘草乙醇提取物和甲醇提取物的抗氧化活性，以期进一步优化与扩展磨盘草的研究和综合利用价值，为完善磨盘草的临床应用和开发新型功能提供实验依据。

随着抗氧化剂的蓬勃发展，对抗氧化剂的要求也越来越高，天然产物作为重要的抗氧化剂，可以低毒、高效的清除体内过量的自由基，以预防衰老并治疗自由基引发的相关疾病，对维持人民群众的健康生活起到重要保障作用[6]，从天然植物中寻找体内自由基消除剂将是现代医药和保健行业的发展趋势。因此，本研究对磨盘草采取不同的提取方法并探索其提取物的对自由基的清除，通过比较抗氧化活性的强弱得出较佳的提取方法，这不仅开拓磨盘草在现代医药、保健行业的应用还可扩大天然抗氧化剂来源的范围，为获取天然植物抗氧化剂的相关研究提供实验依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 仪器

高速万能粉碎机( FW100) (天津泰斯特仪器有限公司) ，FA1204B电子天平(上海天美天平仪器有限公司) ，电热式恒温水浴锅(箱) (江苏金坛宏凯仪器厂) ，回流装置，循环水真空抽气泵(上海嘉鹏科技有限公司) ，RE-5299旋转蒸发器(上海振捷实验设备有限公司) ，电热恒温鼓风干燥箱(上海精宏实验设备有限公司)，752N紫外可见分光光度计(上海精科实业有限公司)。

1.1.2 试药

磨盘草(购自百色市右江区，由右江民族医学院民族医学教研室覃道光副教授鉴定)；无水乙醇，甲醇，1，1-二苯基-2-三硝基苦肼( DPPH，南京建成生物工程研究所) ，十二水合磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、三氯乙酸( TCA) 、三氯化铁、铁氰化钾等均为分析纯，试验用水为蒸馏水。

1.2 实验方法

1.2.1 提取物的制备

称取磨盘草干燥粉末100 g置于圆底烧瓶，以料液比1∶10量取95%乙醇1 000 mL加入浸泡1h后水浴加热回流提取2h，冷却抽滤，回收滤液，用旋转蒸发仪减压浓缩至20～40 mL后水浴制成浸膏备用。称定质量，用95%乙醇稀释成不同浓度的磨盘草乙醇提取液，根据以上方法制备不同浓度的磨盘草甲醇提取液。

1.2.2 清除DPPH 自由基能力的测定[7]

取5支10 mL 具塞比色管，各加入新配置的6×10-4mol/L DPPH溶液0.5 mL，分别加入质量浓度0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0 mg/mL的样品液1. 0 mL，加无水乙醇定容至5 mL，暗光反应30 min，以无水乙醇调零，在517 nm处测定吸光度值A(n= 3) ，根据计算公式计算其清除率：

清除率=[( A1- A2) /A1]×100%

其中A1为空白吸光度(t= 0 min)，A2为反应30 min 后的吸光度。

1.2.3 还原力的测定[8]

采普鲁士兰法[8]测定。取5支大试管，分别移取1 mL不同浓度的磨盘草多糖样品溶液，加2.5 mL pH=6.6磷酸盐缓冲溶液和2.5 mL 1%铁氰化钾溶液，混合后，于50 ℃恒温水浴锅内放置20 min后，继续加入2.5 mL质量分数为10%的三氯乙酸溶液，若有沉淀物则需离心(4.0×103r/min，10 min)，取上清液2.5 mL，加入2.5 mL蒸馏水和2.5 mL 0.1%三氯化铁溶液，混匀，静置10 min，于波长为700 nm处测定吸光度A。

2 结果与分析

2.1 清除DPPH 自由基能力

DPPH·是一种稳定的自由基，与氧化剂发生反应，提供H 被还原，颜色发生变化，由深紫色变为淡黄色，可用紫外分光光度法测定，吸光度值越小其清除率越大。以高浓度逐渐稀释的方式检测不同样品溶液对自由基的清除率，以自由基清除率为50%时样品的浓度( IC50) 来衡量样品对自由基的清除能力。IC50越小，表明样品清除自由基的能力越强。实验结果如图1，随着提取液浓度的增加，对DPPH·的清除率呈上升趋势，存在一定的量效关系，表明磨盘草提取物具有较显著的抗氧化活性。经比较可知当DPPH·清除率接近50% 时乙醇样品液的浓度( IC50)为0.6 mg/mL，甲醇样品液的浓度为0.7 mg/mL，表明磨盘草乙醇提取物清除DPPH·的能力比甲醇提取物强。

图1 磨盘草提取液对DPPH 自由基的清除能力

2.2 还原Fe3 +能力

还原力的测定是检验样品是否是良好的电子供体的方法，还原力强的样品应该是良好的电子供体者，它供应的电子能使Fe3 +还原为Fe2 +。还原力的测定是用来评价抗氧化剂活性的常用方法，吸光度越高则说明该物质的抗氧化能力越强。采用普鲁士兰法测定不同提取方法所得样品液还原Fe3 +能力，结果如图2。随着磨盘草提取物浓度的增加，其吸光度值呈逐渐递增趋势，还原Fe3 +能力逐渐增强，在相同质量浓度下甲醇提取物所测的吸光度值均大于乙醇提取物所测得数据。磨盘草95%乙醇提取物、甲醇提取物还原Fe3+能力的回归方程分别为A=0.204 5C+0.086 9(R2=0.996 8)，A=0.191 5C+0.159 5 (R2=0.989 9)，因此可说明磨盘草不同提取液均具有较强还原Fe3 +的能力，且甲醇提取物的能力优于乙醇提取物。

图2 磨盘草提取液还原Fe3+能力

3 讨 论

通过对DPPH自由基的清除和还原Fe3+能力的探究，比较以95%乙醇与甲醇为溶剂所得磨盘草提取物体外抗氧化活性，实验结果表明两种不同的提取物均具有较好的抗氧化活性，其能力与提取物浓度呈正相关。乙醇提取物清除DPPH自由基的能力优于甲醇提取物，甲醇提取物还原Fe3+能力比乙醇提取物显著。

目前研究发现中草药具有抗氧化功能，有效成分有：黄酮类、多酚类、皂苷类、鞣质类、维生素类、褪黑素等，其中黄酮类化合物具有抗癌、抗菌、抗病毒、抗过敏等多种生理活性及药理作用。对人类肿瘤、衰老、心血管疾病的预防和治疗有着重要意义；皂苷大多有明显的抗氧化作用。已知氧化损伤与许多病理生理现象如衰老、动脉粥样硬化、缺血再灌注损伤等有关。皂苷类的抗氧化作用则可能是其延缓衰老，抗动脉粥样硬化。抗缺血再灌注损伤等药理作用的共同作用机制；鞣质的抗氧化性还表现在抑制肝脏线粒体、微粒体的脂质过氧化作用；抑制由肾上腺索引起的脂肪细胞的脂质分解作用；降低多种诱变剂的诱变性并有抗病毒活性；降低血液中尿素氨浓度；有抗肿瘤、抗癌变作用等[9]。磨盘草具有较强抗氧化活性与其含酚类、黄酮苷和糖等有效成分密切相关。对磨盘草抗氧化活性的探究以期优化磨盘草的综合利用价值，加快与完善磨盘草的临床应用，为进一步研究与开发磨盘草的新型功能提供实验依据。

植物作为人体外源性抗氧化物质的最重要来源，其提取物的抗氧化研究开发日益受到人们的重视并取得了许多成果。不同天然植物提取成分的性质及抗氧化机制不尽相同， 目前研究报道的抗氧化机理主要包括直接清除或抑制自由基，提供质子、电子，作用于与自由基有关的酶，抑制氧化酶的活性[10]。自由基生物学和自由基医学的飞速发展表明，自由基与癌症、衰老、各种心血管疾病、帕金森综合症等各种急性和慢性疾病密切相关[11]。磨盘草不仅具有较强的清除自由基能力,提供电子还原Fe3+能力，还具有易种植、生产与采集等优点，若能充分发挥磨盘草在医疗与保健等领域的作用，将可扩展植物天然抗氧化剂在食品、饲料、医疗保健中的应用，充分体现我国地大物博的优势。因此天然中草药中筛选和开发抗氧化作用确切、安全无毒的新品种或分离提取其有效抗氧化成分，已是当务之急。

[1] 国家药典委员会.中国药典: 一部[S].北京: 中国医药科技出版社,2010: 3758-3760.

[2] 黄必奎.广西壮药磨盘草研究概况[J]. 右江民族医学院学报,2013,35(4):541-542.

[3] 张燕,张洪斌,陈忠荫,等. 磨盘草微量元素的初级形态分析[J]. 时珍国医国药,2010,21(5):1068-1070.

[4] 陈勇,杨晨,魏后超,等. 磨盘草化学成分研究[J]. 时珍国医国药,2010,21(9):2245-2246.

[5] 陈勇,魏后超,韦韬,等. 磨盘草醋酸乙酯部位化学成分研究[J]. 时珍国医国药,2012,23(7):1725-1726.

[6] 王忠雷,杨丽燕,张小华,等. 天然产物抗氧化活性成分研究进展[J]. 药物评价研究,2012,35(5):386-390.

[7] 黄挺章,郭圣奇,齐梁煜,等.谷精草提取物的抗氧化活性考察[J]. 中国实验方剂学杂志,2015,21(10):13-15.

[8] 卢善善,黄挺章,李远辉,等.薏苡茎甲醇提取物的抗氧化性研究[J]. 中国野生植物资源,2015,34(1):12-15.

[9] 陈会良,顾有方,王月雷. 中草药化学成份与抗氧化活性的研究进展[J]. 中国中医药科技,2006,13(1):63-64.

[10] 谭榀新,叶涛,刘湘新,等. 植物提取物抗氧化成分及机理研究进展[J]. 食品科学,2010,31(15):288-292.

[11] 熊双丽,卢飞,史敏娟,等. DPPH自由基清除活性评价方法在抗氧化剂筛选中的研究进展[J]. 食品工业科技,2012,33(8):380-383.

Study on Antioxidant Effect of the Extracts from Abutilon indicum (L.) Sweet

Zheng Hongjuan1, Huang Chunyang1, Qi Liangyu1, Zhang Hang1, Li Zhaodie1,
Huang Yuewei1, Zhong Zhaoyin2, Huang Suoyi2，3*

(1. College of Clinical Medicine, Youjiang Medicine University for Nationalities, Baise 533000，China; 2. College of Pharmacy, Youjiang Medicine University for Nationalities, Baise 533000，China;3.Key Laboratory of Guangxi Universities on National Medicine in Youjiang River Basin, Baise 533000，China)

Objective：Study on antioxidant effect of the extracts of ethanol and methanol fromAbutilonindicum(L.) Sweet. Method：Clearance ability of the extracts of ethanol and methanol fromAbutilonindicum(L.) Sweet on DPPH· and the reduction of Fe3+ability were measured with the spectrophotometry．To evaluate and compare the antioxidant activity of the extracts from different methods. Results: Experiments showed that the extracts of ethanol and methanol fromAbutilonindicum(L.) Sweet had great effect on clearance of DPPH· and Reduction Fe3+，and its effect increases with increasing concentration．Conclusion: Ethanol extract and methanol extract ofAbutilonindicum(L.) Sweet have strong antioxidant activity ,and the concentration showed good dose effect relationship. In a certain mass concentration，ethanol extract is stronger than methanol extract about clearance ability on DPPH·. Methanol extract is better than ethanol extract on the reduction of Fe3 +ability.

Abutilonindicum(L.) Sweet; extracts ; antioxidant activity

10.3969/j.issn.1006-9690.2016.06.009

2016-03-28

2015年自治区级大学生创新创业训练计划立项项目(201510599042)；国家中医药管理局“十二五”中医药重点学科中药化学建设项目(国中医药人教发{[2012]32号)；广西重点学科药物化学建设项目(桂教科研[2013]16号)；广西高校科技创新能力提升工程建设项目(桂教科研〔2015〕5号)；广西高校右江流域特色民族药研究重点实验室开放课题(kfkt2016035)。

郑鸿娟(1993—)，女，壮族，右江民族医学院学生。E-mail:zhenghongjuangx@163.com

*通讯作者： 黄锁义(1964—)，男，教授，硕士生导师，主要从事医用化学的教学和科研工作,研究方向：食品卫生、天然产物化学、药物化学。E-mail: huangsuoyi@163.com

Q946

A

1006-9690(2016)06-0035-04