GeXP分析仪：7种猪病原体的多重PCR检测



GeXP分析仪：7种猪病原体的多重PCR检测

基于GenomeLab Gene Expression Profiler (GeXP)分析仪，一种新的高通量方法被提出，即利用多重PCR（聚合酶链式反应）可实现同时对猪7种病原体的检测。该方法可检测的病原体包括：伪狂犬病毒（PRV）、猪瘟病毒（CSFV）、非洲猪瘟病毒（ASFV）、猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）、猪细小病毒（PPV）、猪圆环病毒2型（PCV-2）和日本脑炎病毒（JEV）。

7对嵌合引物，由病原体的特异性序列融合到一个通用序列的5'端，用于启动PCR，之后一套通用引物被用于后续的聚合酶链式反应。扩增产物用毛细管电泳分离，并用荧光分光光度法测定。该研究采用单一和混合病原体的cDNA 和DNA模板对分析仪的特异性进行检测，GeXP分析仪检测到7种病原菌的特异性DNA产物扩增峰，且在对照组未检测到DNA扩增产物。采用对含有病原体特异序列的质粒进行10倍浓度稀释的研究方法，检测(GeXP)分析仪的灵敏度，结果表明：在优化条件下，以单一病原体样品为模板，该试验的灵敏度为100～1 000拷贝/μL；以7种病原体混合样品为模板，试验灵敏度为1 000拷贝/μL。此外，与常规PCR方法相比，GeXP-PCR分析仪检测58个临床样品的特异性为100%。总之，该方法快速、经济、灵敏度高、特异性强，并能实现同时对7种猪病原体的高通量检测。

（编译自：http：//www.sciencedirect.com/science/ article/pii/S0166093415003882）