山枝仁炒制前后槲皮素的含量测定及质量标准研究

龚晓猛，张美，吴珊珊，李梦琪，胡麒， 胡昌江

·炮制制剂·

山枝仁炒制前后槲皮素的含量测定及质量标准研究

龚晓猛，张美，吴珊珊，李梦琪，胡麒， 胡昌江

目的：测定山枝仁炒制前后槲皮素含量，拟建立生山枝仁和炒山枝仁质量标准。方法：按照药典相应项目下规定，测定山枝仁炮制前后的水分、灰分、酸不溶性灰分、浸出物含量；并采用高效液相色谱法，测定槲皮素含量。结果：生山枝仁水分不得超过12％，总灰分不得超过6.0％，酸不溶性灰分不得超过0.7％，浸出物不得少于10.0％，含槲皮素量均不得少于0.10％；炒山枝仁水分不得过11％，总灰分不得超过6.0％，酸不溶性灰分不得过0.8％，浸出物不得少于11.0％，槲皮素含量不得少于0.13％。结论：建立了山枝仁炒制前后的质量标准，并测定了炮制前后槲皮素含量，其操作方法简便，具有良好的精密度和重复性，可作为本产品的质量控制方法。

生山枝仁；炒山枝仁；质量标准；槲皮素；含量测定

山枝仁为海桐花科海桐花属植物皱叶海桐Pittosporumcrispulum Gagnep.或海金子Pittosporum illicioides Mak.的干燥种子。秋后果实成熟时采收，除去果壳及杂质，干燥。本品历代本草未见记载，但在四川有较长使用历史。主产于四川省大邑县、宜宾市、泸州市、富顺县、乐山市等地。具有清热利湿、生津止咳、收敛止泻的功效。用于虚烦心热，口渴咽痛，痢疾，肠炎，白带，体倦乏力等［1～2］。山枝仁在临床使用，品种来源不清，导致品种混乱，影响临床疗效［3］。目前，山枝仁收载于《四川中药材标准》2010年版一部，收载了海金子，皱叶海桐植物形态描述、产地分布，薄层鉴别，水分，总灰分，酸不溶性灰分，浸出物含量，但缺少对山枝仁化学成分含量测定［2］。《四川省中药材标准》2010年版已收载炒山枝仁饮片规格，但无该饮片标准，考虑到炒山枝仁在市场有流通，因此，本文对山枝仁炮制前后槲皮素含量测定进行研究，还拟定了炒山枝仁水分，总灰分，酸不溶性灰分，浸出物限量，为进一步制定山枝仁炮制前后的质量标准评价提供科学依据。

1 仪器与材料

山枝仁（10批药材经成都中医药大学蒋桂华教授鉴定为海桐花科海桐花属植物海金子 Pittosporum illicioides Mak.的干燥种子），Agilent1200高效液相色谱仪，美国Agilent公司，KQ5200DB型数控超声波清洗器，昆山市超声仪器有限公司，电子天平，德国Sartorius公司，色谱纯甲醇、水（二次蒸馏水），乙酸乙酯，石油醚（30～60 ℃），其它试剂均为分析纯。

2 检查

2.1水分

按照水分测定法（烘干法）［4］分别测定10批生山枝仁样品，10批炒山枝仁样品，结果见表1。生山枝仁饮片10.88～11.91 ％，平均值为11.20 ％，炒山枝仁饮片为9.86～10.48 ％，平均值为10.06 ％。故规定生山枝仁水分不得超过12％，炒山枝仁水分不得过11％，收入标准正文。

2.2总灰分

按照总灰分测定法［4］分别测定10批生山枝仁样品，10批炒山枝仁样品，结果见表1。生山枝仁饮片4.51～5.94％，平均值为5.14％，炒山枝仁饮片为3.95～5.33 ％，平均值为4.71 ％。故规定生山枝仁总灰分不得超过6.0％，炒山枝仁总灰分不得超过6.0％，收入标准正文。

2.3酸不溶性灰分

按照酸不溶性灰分测定法［4］分别测定10批生山枝仁样品，10批炒山枝仁样品，结果见表1。生山枝仁饮片0.58～0.73 ％，平均值为0.63 ％，炒山枝仁饮片为0.63～0.77 ％，平均值为0.70 ％ 。故规定生山枝仁酸不溶性灰分不得超过0.7％，炒山枝仁酸不溶性灰分不得过0.8％，收入标准正文。

2.4浸出物

以50 ％乙醇为溶剂，按照醇溶性浸出物测定项下热浸法［4］操作，分别测定10批生山枝仁样品，10批炒山枝仁样品，结果见表1。生山枝仁饮片10.97～12.09 ％，平均值为11.57 ％，炒山枝仁饮片为11.05～12.15 ％，平均值为11.64 ％。故规定生山枝仁浸出物不得少于10.0％，炒山枝仁浸出物不得少于11.0％，收入标准正文。

3 槲皮素含量测定方法与结果

3.1对照品溶液及供试品溶液的制备

精密称取0.0074 g槲皮素标准品，用甲醇配制成浓度为1.48 mg·mL-1的标准品溶液，作为对照品溶液。取本品粉末2 g，加石油醚（30～60 ℃）40 mL，超声处理15 min，滤过，弃去滤液，残渣重复处理一次。残渣加乙酸乙酯50 mL，水浴回流30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2 mL使溶解，作为供试品溶液［5］。

3.2色谱条件及系统适用性试验

色谱柱： DiamonsilC18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），甲醇-0.4 ％磷酸溶液（47∶53）为流动相，检测波长为360 nm，柱温：35 ℃，进样量：10 μL，在上述色谱条件下，槲皮素的保留时间约为7.6 min，分离度大于1.5，理论塔板数不低于2500。

3.3方法学考察

3.3.1线性关系考察 精密称取0.0074g槲皮素标准品，用甲醇配制成浓度为1.48 mg·mL-1的标准品溶液，按1，2，3，4，5，10 μL体积进样，按上述色谱条件测定峰面积，以峰面积为纵坐标，以槲皮素进样量为横坐标，绘制标准曲线，计算回归方程。经计算得到槲皮素的回归方程为Y= 992.1X- 3.3677，相关系数r= 0. 9999，表明槲皮素在 0.148～1.48 μg范围内具有良好线性关系。

3.3.2重复性考察 取同一批次的山枝仁6份，按“2.1”项下方法制备供试品溶液，进样测定结果样品中槲皮素含量（n=6）为0.998 ％，RSD为0.89 ％，表明本法的重复性良好，符合要求。

3.3.3精密度考察 按照“2.1”项下的方法制备供试品溶液，同一样品精密吸取10 μL，连续进样6次，按“2.1”项下方法制备供试品溶液，依法测定结果槲皮素在样品中的百分含量（n=6）为0.998 ％，RSD为1.8 ％，表明精密度良好。

3.3.4加样回收率考察 精密称取对照品槲皮素含量（0.998 ％） 约30 mg，共6份，分别精密加入供试品溶液1 mL，按2.1项下方法制备供试溶液，依法测定，计算结果平均回收率（n=6）为97.9 ％，RSD为0.89 ％，表明本法准确性良好。

3.3.5稳定性考察 精密吸取同一供试品溶液10 μL，间隔一定时间（0，2，4，8，16，24 h）进样测定，结果表明供试品溶液在24 h内基本稳定，RSD（n=6）为1.2 ％。

3.3.6含量测定 照高效液相色谱法（附录Ⅵ D）测定。以槲皮素作为生山枝仁，炒山枝仁的含量指标；参考《中华人民共和国药典》2010年版相关饮片品种下槲皮素含量测定方法，制定山枝仁饮片含量测定方法和相关规定。取生、炒山枝仁各10批，分别按照“2.1”项下制得供试品，注入液相色谱仪，测定槲皮素的峰面积，根据槲皮素的峰面积，从回归方程求出各样品中槲皮素的含量，生山枝仁为0.1600～0.1800％，平均含量为0.1712 ％；炒山枝仁0.1535～0.1693％，平均含量为0.1591 ％。故规定槲皮素分别不得少于0.10％和0.13％，收入标准正文，结果见表1。

4 结论

根据10批生山枝仁的测定结果，生山枝仁水分不得超过12％，总灰分不得超过6.0％，酸不溶性灰分不得超过0.7％，浸出物不得少于10.0％，含槲皮素量均不得少于0.10％；炒山枝仁水分不得过11％，总灰分不得超过6.0％，酸不溶性灰分不得过0.8％，浸出物不得少于11.0％，槲皮素含量不得少于0.13％。可作为本产品的质量控制方法。为进一步研究山枝仁不同炮制品化学成分含量差异的科学内涵奠定基础。

［1］ 罗达尚主编.新修晶珠本草［M］.成都：四川科学技术出版社，2004：513.

［2］ 四川省卫生厅：四川省中药材标准2010年版，四川出版集团，四川科学技术出版社，2011.

［3］ 张俊.川产山枝仁及其近缘种的生药学研究［D］.成都中医药大学，2011.

［4］ 国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部［S］北京：中国医药科技出版社，2010.

［5］ 李祥胜，汪兴生，周亚球，等.HPLC法测定复方金钱草排石颗粒中槲皮素和山柰素的含量［J］.安徽医药，2011，15（12）：1510.

［6］ 崔涛，夏伟军，彭玲芳，等.七叶莲提取物中总黄酮和槲皮素的含量测定［J］.药物分析杂志，2011，31（11）：54.

（责任编辑：李芸霞）

Quercetin content determination and quality standard research of raw and processed Shanzhiren /

GONG Xiao-meng，ZHANG Mei，WU Shan-shan， LI Meng-qi， HU Lin， HU Chang-jiang//（School of Pharmacy， Chengdu University of Traditional Chinese Medicine， Chengdu 611137， Sichuan）

Objective: To detect quercetin content in raw and processed Shanzhiren， and research the quality standards of raw and processed Shanzhiren. Method: According to Chinese pharmacopoeia， the content of moisture， total ash， acid-insoluble ash and extracts were determined. High performance liquid chromatography （HPLC） method was used to determine quercetin content. Result: The quality of raw shanzhiren included： water less than 12 ％， total ash content less than 6.0％， acid insoluble ash content less than 0.7％， extract more than 10.0％， and quercetin content more than 0.10％. The quality of processed shanzhiren included：water less than 11 ％， total ash content less than 6.0％， acid insoluble ash content less than 0.8％， extract more than 11.0％， and quercetin content more than 0.13％. Conclusion: The quality standards of raw and processed Shanzhiren are established. The determination method of quercetin content is simple with good precision and reproducibility， which can be used for quality control of the product.

Raw Shanzhiren； processed Shanzhiren； quality standard； quercetin； content determination

R 284.1

A

1674-926X（2016）03-006-03

成都中医药大学药学院，四川 成都 611137

龚晓猛（1990-），男，硕士在读，主要从事中药炮制学方向研究Tel：13880687572 Email：gongjin20080621@126.com

胡昌江（1952-），男，教授，博士生导师，主要从事中药炮制原理与质量标准方向研究Tel：13980980796 Email：hhccjj@hotmail.com

2015-08-02