HPLC法测定阿日申－18中栀子苷的含量

包长龙萨茹拉赵东鲲.内蒙古自治区通辽市食品药品检验所，内蒙古　通辽　08000; .内蒙古国际蒙医医院，内蒙古　呼和浩特　00000

HPLC法测定阿日申－18中栀子苷的含量

包长龙1萨茹拉2赵东鲲1
1.内蒙古自治区通辽市食品药品检验所，内蒙古通辽028000; 2.内蒙古国际蒙医医院，内蒙古呼和浩特010000

【摘要】目的:测定阿日申－18中栀子苷的含量.方法:采用HPLC法，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，流动相为乙腈－水(15∶85)，检测波长为238 nm，流速为1. 0 ml/min.结果:栀子苷在0. 065 0～0. 812 5 μg/ml范围内呈良好的线性关系.栀子苷平均加样回收率为101. 7%，RSD为1. 5%(n =9).结论:该方法简便、灵敏，可用于制剂的质量控制.

【关键词】阿日申－18;栀子苷; HPLC

阿日申－18是由枫香脂、冬葵果、决明子、党参、草乌(制)、麻黄、苦参、黄精、栀子、文冠木、木香、五灵脂(制)、石菖蒲、诃子、川楝子、瞿麦、黑云香、人工麝香十八味药组成的水丸，该方具有清热、泻火、凉血的功效[1－2]，可治疗银屑病、皮肤瘙痒、湿疹、疖肿、梅毒等各种皮肤病及风湿病症.该方主要成分之一栀子对本方临床疗效有重要作用，本文采用高效液相色谱法测定栀子中主要有效成分栀子苷的含量[3].实验表明，该方法简单、准确、重现性好，可有效的控制产品的质量，可作为质量控制的方法.

1　仪器与试药

1. 1仪器Alltech高效液相色谱仪Series1500，UV201紫外检测器，自动进样器; TP－300超声仪.

1. 2试药栀子苷对照品(批号: 110749－200613，中国药品生物制品检定所提供);阿日申－18(批号: 080705、090616、090617)由内蒙古通辽市蒙医研究所制剂室提供.

2　方法和结果

2. 1色谱条件色谱柱: Phenomenex C18柱(250mm× 4. 6mm，5μm);流动相:乙腈－水(15∶85);流速: 1. 0ml/min;进样量: 10μl;柱温: 30℃;检测波长: 238nm.理论塔板数按栀子苷峰计算应不低于3000.

2. 2对照品溶液的制备称取栀子苷对照品16mg，精密称定，置100ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml，置25ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得(制成每1ml含栀子苷30μg的溶液).

2. 3样品溶液的制备取装量差异项下的本品适量，研细，取约1. 6g，精密称定，置100ml碘量瓶中，加入甲醇25. 0ml，称定重量，超声处理(功率160W，50kHz)30min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过.量取续滤液3. 0ml，置10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得.

2. 4阴性对照试验按上述方法制备样品溶液和对照品溶液.另取阴性样品(按处方比例并以相同工艺制备的无栀子的样品)，按阿日申－18溶液制备法制得阴性对照溶液.分别精密吸取阴性溶液、阿日申－18溶液、对照品溶液各10μl，注入Alltech高效液相色谱仪Series1500，在同一色谱条件下进行测定，结果:阴性色谱图中，在与栀子苷对照品及样品阿日申－18色谱图相同保留时间处无色谱峰出现，表明配方中的其他组分对阿日申－18中栀子苷的测定无干扰.

2. 5线性关系考察精密吸取对照品溶液1、2、5、8、 10、15、20、25μl分别进样，按上述色谱条件进行测定，以峰面积为纵坐标(Y)，以对照品进样量为横坐标(X)，绘制标准曲线.结果栀子苷在0. 3762～3. 7620μg/ml范围内线性关系良好，回归方程为: Y = 1. 5E + 6X + 3692. 7，r =0. 99985.

2. 6精密度试验精密量取栀子苷对照品溶液10μl，在上述色谱条件下连续进样6次，测定栀子苷峰面积，结果栀子苷峰面积的RSD(n =6)为1. 2%.

2. 7重复性试验精密称取同一批样品(批号: 090616)6份，研细，按上述样品制备方法制备样品溶液，在上述色谱条件下进行分析测定，测得每份样品含量.结果栀子苷的平均含量(n =6)为2. 11mg/g，RSD为0. 1%.见表1.

表1　栀子苷含量重现性试验结果

2. 8稳定性试验取同一供试品溶液，分别于0、2、4、6、8、10、15、20h取样10 μl，按上述色谱条件进样测定.RSD(n =6)为0. 2%，表明供试品溶液20h内稳定.

2. 9加样回收试验取供试品(含量1. 864 mg/g)9份，各约0. 8 g，精密称定，分别置9个具塞锥形瓶中，再分别在其中3个具塞锥形瓶中各精密加入浓度为0. 1738 mg/ml的栀子苷对照品甲醇溶液5 ml(约相当于供试品含有量的75%)及甲醇溶液20 ml，另3个具塞锥形瓶中各精密加入上述对照品溶液12 ml(约相当于供试品含有量的100%)及甲醇溶液13 ml，其余3个具塞锥形瓶中各精密加入上述对照品溶液16 ml(约相当于供试品含有量的125%)及甲醇溶液9 ml，分别称定重量，超声处理30min，取出，再称重，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过.各取续滤液10 μl进样，测定每份含量，计算回收率，栀子苷平均回收率(n =6)为101. 7%.RSD为1. 5%.结果见表2.

2. 10样品测定按含量项下方法制备样品溶液，在上述色谱条件下进行测定，三批样品的测定结果见表3.

表2　栀子苷加样回收试验结果

表3　样品中栀子苷含量测定结果

3　讨论

3. 1提取条件的优化根据文献[4－5]，中药栀子的栀子苷含量测定方法中，选用甲醇作为提取溶剂，故本研究也采用甲醇作为提取溶剂.分别对不同溶剂体积及不同超声时间进行了对比试验，最后得到最优化的提取方法为:溶剂甲醇，加入量25 ml，超声处理30min.

3. 2检测方法的优点本文中定量方法准确、灵敏、专属性强，可作为控制阿日申－18制剂质量的检测方法.

参考文献

[1]那莎，郭国田，王宗殿，等．栀子及其有效成分药理研究进展[J]．中国中医药信息杂志，2005，12(1): 90－92．

[2]方尚玲，刘源才，张庆华，等．栀子苷镇痛和抗炎作用的研究[J]．时珍国医国药，2008，19(8): 1374－1376．

[3]刘瑛，张浩．栀子药材中栀子苷的含量测定[J]．华西药学杂志，2003，18(5): 374－375．

[4]国家药典委员会．中华人民共和国药典(一部)[M]．北京:中国医药科技出版社，2010．

[5]赵超，康文艺．栀子中栀子甙的提取工艺研究[J]．河南大学学报(医学版)，2007，45(1): 43－44．

收稿日期:( 2014. 12. 16)

【文章编号】1007－8517(2015)06－0013－02

【文献标志码】A

【中图分类号】R284. 1