VEGF和Ki-67在子宫内膜癌中的表达及临床意义

康彩梅　王振芬　杨改中　王菊荣　牛建清

VEGF和Ki-67在子宫内膜癌中的表达及临床意义

康彩梅王振芬杨改中王菊荣牛建清

【摘要】目的探讨血管内皮生长因子(VEGF)和Ki-67在子宫内膜癌的表达及临床意义。方法选取84例子宫内膜癌组织作为观察组，另选取45例正常子宫内膜组织作为对照组。应用免疫组织化通用型二步法检测子宫内膜癌及正常子宫内膜中VEGF、Ki-67的表达，采用阳性表达率对结果进行判断。结果VEGF和Ki-67在子宫内膜癌组织中均呈现阳性表达，阳性表达率分别为82.1%和76.2%，均高于正常子宫内膜(P＜0.01)。子宫内膜癌组织中VEGF及Ki-67的阳性表达与年龄、组织学分级、手术病理分期、病理类型、淋巴结及宫颈是否受累有关(P＜0.05)。子宫内膜癌患者年龄越大，组织学分化程度越低，手术病理分期级别越高，非子宫内膜样腺癌，淋巴结转移及宫颈受累时，VEGF及Ki-67的阳性表达率均增高。VEGF阳性表达与肌层浸润深度有关，肌层浸润越深，其阳性表达率将增高，而Ki-67与肌层浸润深度无关(P＞0.05)。VEGF与Ki-67在子宫内膜癌组织中的表达呈现正相关(r =0.529，P ＜0.01)。结论VEGF和Ki-67过度表达与子宫内膜癌的发生发展相关。

【关键词】子宫内膜肿瘤;血管内皮生长因子; Ki-67;免疫组织化学

【中图分类号】R 737.33

【文献标识码】A

【文章编号】1002－7386(2015)17－2607－03

doi:10.3969/j.issn.1002－7386.2015.17.014

收稿日期:( 2015－02－11)

作者单位: 056000河北省邯郸市妇幼保健院妇科(康彩梅);河北省邯郸市中心医院妇科(王振芬、王菊荣)，病案室(杨改中);开滦总医院妇产科(牛建清)

子宫内膜癌是女性常见恶性肿瘤之一，发病率居我国女性恶性肿瘤第九位，病死率居女性生殖道恶性肿瘤第三位［1］。近年来，子宫内膜癌发病率逐步上升，并且呈现年轻化趋势。本文通过对84例子宫内膜癌血管内皮生长因子(VEGF)和Ki-67进行检测，探讨二者在子宫内膜癌发生、发展中的作用及相关性，报告如下。

1　资料与方法

1.1一般资料选取河北省邯郸市中心医院2010年6月至2013年6月住院手术并经病理证实的84例子宫内膜癌患者为观察组，年龄29～78岁，平均年龄(54 ±9)岁。内膜组织学类型:子宫内膜样腺癌66例，乳头状浆液性癌8例，透明细胞癌6例，鳞癌4例。组织学分级:高分化45例，中分化32例，低分化7例。按照2009年国际妇产科联盟(FIGO)标准分期，Ⅰ、Ⅱ期62例，Ⅲ、Ⅳ期22例。肌层浸润深度:无或浅肌层浸润52例，深肌层浸润32例。宫颈是否受累:未受累60例，受累24例。淋巴结是否受累:未受累67例，受累17例。对照组为因子宫肌瘤在邯郸市中心医院住院手术且病理证实的45例正常子宫内膜组织患者，年龄35～74岁，平均年龄(51±8)岁。2组年龄差异无统计学意义(P＞0.05)，具有可比性。

1.2主要试剂鼠抗人Ki-67单克隆抗体，鼠抗人VEGF单克隆抗体，超敏型免疫组化检测试剂盒(PV9000 Polymer)及二氨基联苯胺酶底物显色试剂盒，以上试剂均购自北京中杉金桥生物技术有限公司。

1.3实验方法每例标本均经10%中性甲醛固定，石蜡包埋，连续组织切片4 μm厚，采用免疫组化通用型二步法，按照试剂盒说明书操作步骤进行。

1.4结果判断VEGF与Ki-67免疫反应阳性物质分别主要位于细胞质和细胞核，呈现棕黄色至深棕色颗粒为阳性细胞，细胞无阳性反应为阴性。参照Parenti等［2］的标准，采用高倍镜(400×)下对每张切片随机选择5个视野，计数200个细胞/视野，共计1 000个阳性细胞所占百分比，＜5%为－，5%～25%为+，26%～50%为+ +，＞50%为+ + +，+～+ + +为阳性表达。

1.5统计学分析应用SPSS 17.0统计软件，计量资料以±s表示，彩用t检验，计数资料比较采用χ2检验，相关性采用Spearman等级相关分析，P＜0.05为差异有统计学意义。

2　结果

2.1 VEGF与Ki-67在子宫内膜癌中的表达

2.1.1 VEGF: VEGF在正常子宫内膜、子宫内膜癌的阳性表达率分别为22.2%、82.1%，从正常子宫内膜至子宫内膜癌，VEGF的阳性表达率呈增高的趋势，差异有统计学意义(χ2=46.150，P＜0.01)。见表1。

2.1.2 Ki-67: Ki-67在正常子宫内膜、子宫内膜癌的阳性表达率分别为24.2%、76.2%，从正常子宫内膜至子宫内膜癌，Ki-67的阳性表达率呈增高的趋势，差异有统计学意义(χ2=33.061，P＜0.01)。见表1。

2.2 VEGF及Ki-67表达与子宫内膜癌临床病理特征

的关系子宫内膜癌组织中VEGF及Ki-67的阳性表达率均与年龄、组织学分级、手术病理分期、病理类型、淋巴结及宫颈是否受累有关(P＜0.05)。子宫内膜癌患者年龄越大，组织学分化程度越低，手术病理分期级别越高，非子宫内膜样腺癌，淋巴结转移及宫颈受累者，VEGF及Ki-67的阳性表达率均增高。VEGF阳性表达率与肌层浸润深度有关(P＜0.05)，肌层浸润越深，其阳性表达率将增高，而Ki-67与肌层浸润深度无关(P＞0.05)。见表1。

表1　VEGF与Ki-67在子宫内膜癌中的表达　例

2.3子宫内膜癌组织中VEGF与Ki-67表达的相关性采用Spearman等级相关分析，VEGF与Ki-67在子宫内膜癌组织中的表达呈显著正相关(r = 0.529，P＜0.01)。见表2。

表2　84例子宫内膜癌中Ki-67与VEGF表达的关系　例

3　讨论

VEGF是血管内皮细胞特异性的肝素结合生长因子，为一种同源二聚体。二聚体为分子量24 kDa的单链以二硫键组成。VEGF分解的单体无活性，N2糖基去除对生物效应无影响，但可能在细胞分泌中起作用。由于转录后不同加工方式，产生出至少5种蛋白形式，其中VEGF121、VEGF145、VEGF165是分泌型可溶性蛋白，可直接作用于血管内皮细胞，诱导血管增生。

VEGF是目前公认的作用最强，并且在肿瘤中起着最重要作用的促血管生长因子之一，诱导肿瘤血管生长，促进肿瘤生长、浸润及转移。有文献报道，VEGF与结直肠癌、上皮性卵巢癌及乳腺癌的发生及发展密切相关［3－5］。本研究中VEGF在子宫内膜癌的阳性表达率较正常子宫内膜组增高，且组织分化程度越差、手术病理分期期别越高、肌层浸润越深、宫颈及淋巴结受累时，其阳性表达率将增高。有研究报道，VEGF是子宫内膜癌的预后因素之一，与临床病理参数密切相关［6－9］，这与本研究结果接近。这提示VEGF促进了子宫内膜癌的血管形成，推进内膜癌的发生，促进其生长、侵袭及转移。

Ki-67是重要的肿瘤增殖标记分子之一，命名是由Gerdes J一项研究而来，其中Ki-67代表研究者所在的城市Kiel，67代表一株抗体(以霍奇金淋巴瘤细胞系L428细胞的细胞核抗原免疫小鼠得的单克隆抗体)的杂交瘤细胞在96孔板上的序号。Ki-67蛋白有2个分子量分别为320 000和359 000的两种体现形式，由人染色体10q25转录后不同加工方式而来。Ki-67是一个细胞增殖相关蛋白，与细胞周期密切相关。Ki-67随细胞周期进展变化: G1期，Ki-67抗原信号定位于此期形成的核仁;细胞进入S期和G2期，Ki-67信号增强，在核仁和核质中均出现强的分布;细胞进入M期，核膜消失，Ki-67浓集于染色体表面，胞质中少量分布［10］。

对于人Ki-67蛋白的单克隆抗体MIB-1产生，极大推进了Ki-67在回顾性病例研究中的应用。有研究报道，Ki-67与恶性间皮增殖、胃肠道间质瘤及乳腺叶状肿瘤的发生存在相关［11－13］。本研究中子宫膜癌Ki-67阳性表达率明显高于正常子宫内膜组，差异有统计学意义(P＜0.01)，提示Ki-67与子宫内膜癌的发生可能存在相关。近研究报道，Ki-67与淋巴瘤、尤文肉瘤及肾上腺皮质癌的预后密切相关［14－17］。本研究中子宫内膜癌患者年龄增高、组织学分化越低、手术病理分期期别越高、非子宫内膜样腺癌、宫颈及淋巴结受累时，Ki-67的阳性表达率将增高，差异均有统计学意义

(P＜0.05)，表明Ki-67与子宫内膜癌的预后可能存在相关。有研究发现，Ki-67是子宫内膜癌的增殖标志物，与子宫内膜癌的发生发展相关［18，19］，这与本研究结果一致。

研究报道，VEGF及Ki-67与儿科神经系统恶性肿瘤的临床病理指标存在关联，提示VEGF与Ki-67交互作用于肿瘤，促进细胞增殖，诱导血管形成，促进恶性肿瘤生长、侵袭及转移［20］。本研究中VEGF及Ki-67在子宫内膜癌中的表达呈正相关，提示Ki-67在子宫内膜癌中高表达，它可能通过上调VEGF，促进子宫内膜癌血管形成，进而促进肿瘤的生长、浸润及转移。

子宫内膜癌的发生是多基因、多因素、多步骤共同参与的结果，Ki-67、VEGF不仅参与增殖和调亡过程，而且可促进血管形成。深入研究VEGF、Ki-67及其在子宫内膜癌发生、发展中的作用，有可能从另一角度揭示子宫内膜癌的发病机制和生物学行为，为子宫内膜癌的防治提供更可靠的依据。

参考文献

1 Parkin DM，Bray F，Ferlay J，et al.Olobal cancer statistics，2002.Cancer J Cilincia，2005，55: 74-108.

2 Parenti A，Leo G，Porzionato A，et al.Expression of survivin，P53，and caspase 3 in barrett＇esophagus carcinogenesis.Hum Pathol，2006，37: 16-22.

3 Jang MJ，Jeon YJ，Kim JW，et al.Association of VEGF and KDR single nucleotide polymorphisms with colorectal cancer susceptibility in koreans.Mol Carcinog，2013，52: E60-69.

4 Robati M，Ghaderi A，Mehraban M，et al.Vascular endothelial growth factor(VEGF)improves the sensitivity of CA125 for differentiation of epithelial ovarian cancers from ovarian cysts.Arch Gynecol Obstet，2013，288: 859-865.

5 Wang HL，Zhang ZL.Analysis of the relationship between ultrasound of breast cancer Dot-SDI And the expression of MVD，VEGF and HIF-1α.Cell Biochem Biophys，2014，70: 205-208.

6 Wang J，TayLor A，Showeil R，et al.Expression Profiling and significance of VEGF-A，VEGFR2，VEGFR3 and related proteins in endometrial carcinoma.Cytokine，2014，68: 94-100.

7 Guset G，Costi S，Lazay E，et al.Expression of vascrlar endothelial growth factor(VEGF)and Assessment of microvascular density with CD34 as prognostic markers for endometrial carcinoma.Rom J Morphol Embryol， 2010，51: 677-682.

8 Talvensaari-Mattila A，Soini Y，Santala M.VEGF and its receptors(flt-1 and KDR/flk-1)as Prognostic indicators in endometrial carcinoma.Tumour Biol，2005，53: 81-87.

9 Yokoyama Y，Charnock-Jones DS，Licence D，et al.Expression of vascular endothelial growth Factor(VEGF)-D and its receptor，VEGF receptor 3，as a prognostic factor in endometrial carcinoma.Clin Cancer Res，2003，9: 1361-1369.

10 Bullwinkel J，Baron-Luhr B，ludemann A，et al.Ki-67 protein is associated with ribosomal RNA Transcription in quiescent and proliferating cells.J Cell Physiol，2006，206: 624-635.

11 Taheri ZM，Mehrafza M，Mohammadi F，et al.The diagnostic value of Ki-67 and repp86 in Distinguishing between benign and malignant mesothelial proliferations.Arch Pathol Lab Med，2008，132: 694-697.

12 Di Vizio D，Demichelis F，Simonettis，et al.Skpz expression in associated with high risk and Elevated ki-67 expression in gastrointestinal stromal tumours.BMC Cancer，2008，8: 134.

13 Chan YJ，Chen BF，Chang CL，et al.Expression of P53 Protein and Ki-67 antigen in phyllodes Tumor of the breast.J Chin Med Assoc，2004，67: 3-8.

14 Vesela P，Tonar Z，Salek D，et al.Microvessel density of mantle cell lymphoma.A retrospective Study of its prognostic role and the correlation with the ki-67 and the mantle cell lymphoma International prognostic index in 177 cases.Virchows Arch，2014，465: 587-597.

15 Marino MT，Grilli A，Baricordi C，et al.Prognostic significance of miR-34a in Ewing sarcomaIs associated with cyclin D1 and ki-67 expression.Ann Oncol，2014，25: 2080-2086.

16 Jiang L，Li P，Wang H，et al.Prognostic significance of ki-67 antigen expression in extranodal Natural killer/T-cell lymphoma nasal type.Med Oncol，2014，31: 218.

17 Duregon E，Molinaro L，Volante M，et al.Comparative diagnostic and prognostic performances of the hematoxylin-eosin and phosphor-histone H3 mitotic count and Ki-67 index in adrenocortical carcinoma.Mod Pathol，2014，27: 1246-1254.

18 Apostolou G，Apostolou N，Nikolaidou C，et al.Cytodiagnosis of endometrialcarcinomaand hyperplasia on imprint smears with additional immunocytochemistry using Ki-67and p53 biomarkers.Cytopathology，2014，25: 86-94.

19 Kosmas K，Stamoulas M，Marouga A，et al.Expression of ki-67 as proliferation biomarker in imprint smears of endometrial carcinoma.Diagn Cytopathol，2011，57: 122-127.

20 Gheytanchi E，Mehrazma M，Madjd Z.Expression of Ki-67，p53 and VEGF in pediatric neuroblastoma.Asian Pac J Cancer Prev，2014，15: 3065-3070.